JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:04 Min. • January 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer Kultur von Legionella pneumophila, einem pathogenen gramnegativen Bakterium, das äußere Membranvesikel freisetzt.
Diese OMVs enthalten Lipopolysaccharide und Membranproteine, die zur bakteriellen Virulenz beitragen.
Zentrifugiere die Kultur, um intakte Bakterien zu pelletieren.
Sammeln Sie das Supernatant mit OMVs und zentrifugieren Sie erneut, um Restbakterien zu pelletieren.
Filtern Sie den Überstandsstoff durch eine Membran, um die verbleibenden Bakterien zu entfernen, während OMVs erhalten bleiben.
Führen Sie eine zweite Filtration mit einer frischen Membran durch, um bakterielle Rückstände zu entfernen.
Sammeln Sie das bakterienfreie Filtrat und ultrazentrifugieren Sie es, um die OMVs zu pelletieren.
Entsorge das Supernatant, suspendiere das Pellet wieder in Puffer und ultrazentrifugiere erneut, um lose assoziierte Proteine und Lipopolysaccharide zu entfernen.
Entferne das Supernatant und suspendiere die gereinigten OMVs wieder in Puffer.
Streifen Sie einen Aliquot der OMVs auf Blutagar und BCYE-Agarplatten und inkubieren.
Das Fehlen einer Koloniebildung bestätigt das Fehlen bakterieller Kontamination.
Lagern Sie die OMVs bei niedriger Temperatur für Studien zur Wi
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