Visualisierung und Größenbestimmung von Faustoviren mittels Elektronenmikroskopie

Nehmen Sie eine Kultur von Amöben, die mit einem als Faustovirus bekannten Riesenvirus infiziert sind.

Sammeln Sie das Kulturüberstand, der das Faustovirus enthält.

Auf ein glühentladenes Elektronenmikroskopie-Gitter pipettieren Sie das Überstandmedium.

Inkubieren Sie, um die Adsorption der viralen Partikel an den Raster zu ermöglichen.

Den Rost auf Filterpapier abtupfen, um nicht gebundene Viruspartikel zu entfernen.

Tragen Sie einen Tropfen Ammoniummolybdat auf.

Ammoniummolybdat wirkt als Negativkontrastmittel, indem es an das Gitter um das Virus bindet und den Hintergrund verdunkelt, um den Kontrast während der Bildgebung zu verbessern.

Entfernen Sie überschüssiges Ammoniummolybdat, indem Sie das Gitter auf Filterpapier abtupfen.

Legen Sie das Objektträgergitter auf eine Petrischale und lassen Sie es trocknen.

Danach das Objektträgergitter auf den Probenhalter setzen.

Führen Sie den Halter in das Elektronenmikroskop ein.

Nehmen Sie ein Bild des Faustovirus auf und messen Sie die Größe des Faustovirus für weitere Analysen.

Um die Elektronenmikroskopie durchzuführen, pipettieren Sie fünf µL der positiven Probe auf ein glühentladenes Raster und inkubieren Sie etwa 20 Minuten bei Raumtemperatur. Trocknen Sie das Raster vorsichtig ab und geben Sie anschließend eine kleine Menge 1 % Ammoniummolybdat hinzu, gefolgt von einer Inkubation von 10 Sekunden. Entfernen Sie den Tropfen vorsichtig und lassen Sie das Raster danach fünf Minuten lang trocknen. Stellen Sie als Nächstes das Elektronenmikroskop auf 200 keV ein. Platzieren Sie danach das Raster auf dem Halter und führen Sie den Halter in das Mikroskop ein. Klicken Sie auf das Symbol für die Vakuumübersicht und überprüfen Sie das Vakuum. Schließen Sie dann die Ventile und stellen Sie eine Spotgröße von fünf sowie eine Vergrößerung von 25.000 ein, bevor Sie mit der Beobachtung beginnen. Nachdem ein Riesenvirus auf dem Aufnahmeschirm lokalisiert wurde, verwenden Sie das Messwerkzeug, um das Virus zu vermessen.

Führen Sie die Molekularbiologie und die Sequenzierung des viralen Genoms gemäß dem Textprotokoll durch.