Amöbenbasierte Anreicherung von Riesenviren aus einer Umweltwasserprobe

Nehmen Sie eine Mehrfachbrunnenplatte, die in Überlebensmedium kultivierte Amöben enthält.

Das Hungermedium enthält Antibiotika und antimykotische Wirkstoffe, die das mikrobielle Wachstum begrenzen, während die Amöben lebensfähig bleiben, ohne sich zu vermehren oder ruhende Zysten zu bilden.

Nehmen Sie ein Reagenzglas mit der Umwasserprobe und wirbeln Sie es, um Viren aus den Schwebstoffen und Verunreinigungen freizusetzen.

Geben Sie die Wasserprobe, die die Viren enthält, zu den Amöben hinzu.

Legen Sie die Platte in einen Beutel mit einem feuchten Tupfer, um Verdunstung zu verhindern, und inkubieren Sie sie.

Während der Inkubation nehmen die Amöben die Riesenviren durch Phagozytose auf.

Einmal internalisiert, gibt das Virus sein Genom in das Zytoplasma der Amöbe ab.

Eine zytoplasmatische Virusfabrik bildet sich um das virale Genom herum, wo sie die Wirtsmaschinerie nutzt, um sich zu replizieren und virale Proteine zu produzieren, die sich zu neuen Virionen zusammenlagern.

Dies führt dazu, dass die Amöbenzellen sich aufgerundet und lysieren, wodurch neue Virionen in das Medium freigesetzt werden und die Riesenviren für die nachgeschaltete Detektion angereichert werden.

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