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Immunologie
0 Aufrufe • 5:41 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir Transfektionspolyplexe, die Zielplasmide enthalten, die an ein Polymer gebunden sind. Die Plasmide kodieren für ein virales Antigen, das mit einem Peptid-Tag und einem Affinitäts-Tag fusioniert ist.
Inkubieren Sie die Polyplexe mit Säugetierzellen, die die Polyplexe in den Endosomen internalisieren.
Das Polymer induziert einen Vesikelbruch. Die freigesetzten Plasmide exprimieren das virale Antigen, das extrazellulär sezerniert wird.
Ernten Sie den Überstand, der das Antigen und die Kontaminanten enthält. Fügen Sie ein konkurrierendes Mittel in niedriger Konzentration hinzu.
Laden Sie es auf eine Affinitätschromatographiesäule.
Die Affinitätsmarkierungen binden an das Säulenharz und immobilisieren das Antigen, während der konkurrierende Wirkstoff die unspezifische Bindung verringert.
Fließen Sie das konkurrierende Mittel in einer niedrigen Konzentration, um schwach gebundene Verunreinigungen zu entfernen.
Waschen Sie mit steigenden Konzentrationen konkurrierender Wirkstoffe, um die stark gebundenen Antigene zu verdrängen und zu eluieren.
Bakterielle Vesikel der äußeren Membran (OMVs) mit einem oberflächengebundenen Fängerprotein einführen und inkubieren.
Antigen-Peptid-Ta
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