Ein in vitro Assay zur Bewertung der Anti-Tumor-Aktivität von tumorspezifischen CAR-T-Zellen
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Immunologie
0 Aufrufe • 2:42 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die B-Zell-Lymphom-Tumorzellen enthält, die ein B-Zell-spezifisches Oberflächenantigen exprimieren, und ein zytoplasmatisches Luciferase-Enzym
.Geben Sie CAR-T-Zellen in ausgewählte Vertiefungen und inkubieren Sie. Die Zellen exprimieren chimäre Antigenrezeptoren (CARs), die aus einer extrazellulären Domäne bestehen, die auf das Tumorantigen abzielt, und intrazellulären Signaldomänen.
CAR bindet an das Tumorantigen und induziert so die Aktivierung der CAR-T-Zellen.
Die aktivierten Zellen setzen Zytokine frei, die die Anti-Tumor-Aktivität der Zellen fördern und die Freisetzung von Giftstoffen auslösen.
Die Giftstoffe dringen in die Tumorzellen ein und leiten den Zelltod ein.
Schleudern Sie die Zellen herunter und isolieren Sie den Überstand. Quantifizieren Sie die Zytokine, um die Aktivität der CAR-T-Zellen zu beurteilen.
Resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer, der Luciferin, ein biolumineszierendes Substrat, enthält.
Beim Eintritt wird Luciferin durch Luciferase in lebenden Tumorzellen oxidiert und Licht emittiert.
Messen Sie die Biolumineszenz, um ein vermindertes Signal in den behandelten Tumorzellen zu identifizieren, was die CAR-T-Zell-v
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