Name: Kutane Leishmaniose in der Rückenhaut von Hamstern: ein nützliches Modell für das Screening von Drogen leishmanientötende (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Erfahren Sie die intradermale Inokulation von Leishmania-Promastigoten in der Rückenhaut von Hamstern. Diese optimierte Methode ermöglicht präzise Läsionscharakterisierung und verbessert die Wirksamkeitsprüfung neuer Wirkstoffe bei kutaner Leishmaniose.

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COLCIENCIAS und dem Zentrum für Entwicklung von Produkten gegen Tropenkrankheiten - - CIDEPRO Diese Studie wurde durch Zuschüsse aus dem Ausschuss für Forschung an der Universität von Antioquia (CODI), der kolumbianischen Instituts für Entwicklung der Wissenschaft und Technologie unterstützt.

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Keine Interessenskonflikte erklärt.

Kutane Leishmaniose ist endemisch in den Tropen und Neotropis. Es wird oft als eine Gruppe von Krankheiten aufgrund der vielfältigen Spektrum an klinischen Manifestationen, die von kleinen kutanen Knötchen auf grobe Schleimhautgewebe Zerstörung Bereich bezeichnet. Die meisten verfügbaren Medikamente sind teuer, erfordern lange Behandlungsschemata und immer wirkungsloser werden, erfordern die Entdeckung neuer Medikamente. Das Maus-Modell ist weit verbreitet, aber einige Nachteile. Ein hoch em...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Typ </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Reagens </td><td> Holliday-Scott SA </td><td></td></tr><tr><td> Xilacine </td><td> Reagens </td><td> Synthese </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Reagens </td><td> GIBCO </td><td> 14190-136 </td></tr><tr><td> Digitaler Messschieber </td><td> Ausrüstung </td><td> Fischer </td><td> 15-077-958 </td></tr><tr><td> Giemsa </td><td> Reagens </td><td> SIGMA </td><td> GS1L-1L </td></tr><tr><td> Formalin </td><td> Reagens </td><td> Nova Labor </td><td> 11273 </td></tr><tr><td> Paraffin </td><td> Reagens </td><td> Pechiney Plastic Packaging </td><td> PM-996 </td></tr><tr><td> Haemotoxilin </td><td> Reagens </td><td> Nova Labor </td><td&gt; 10870103 </td></tr><tr><td> Eosin </td><td></td><td> Nova Labor </td><td> 10870203 </td></tr><tr><td> Kodak Ektachem Trockenchemie </td><td> Ausrüstung </td><td> Kodak Ektachem </td><td> DT-60 </td></tr><tr><td> Meglumin antimonsaurem </td><td> Reagens </td><td> Aventis </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskopie </td><td> Ausrüstung </td><td> Nikon </td><td> YS2-T </td></tr></tbody></table>

kutane leishmaniose in der rückenhaut von hamstern: ein nützliches modell für das screening von drogen leishmanientötende

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Traditionell werden Hamster experimentell in der Schnauze oder dem Fußballen geimpft. Doch in diesen Seiten ein Geschwür nicht immer auftritt, ist die Messung der Größe der Läsion ein hartes Vorgehen und Tieren zeigen, Schwierigkeiten zu essen, atmen und weil der Läsion zu bewegen. Um die Hamster-Modell für Haut-Leishmaniose, jungen erwachsenen männlichen und weiblichen Goldhamster zu optimieren (Mesocricetus auratus) wurden intradermal an der dorsalen Haut mit 1 bis 1,5 x l0 7 Promastigoten der Leishmania-Spezies und das Fortschreiten der später Läsionen injiziert wurden für bis zu bewertenden 16 Wochen nach der Infektion. Der Goldhamster wurde ausgewählt, weil es als das adäquate Modell für Bio-Medikamente gegen Leishmania bewerten, da sie anfälliger für Infektionen durch verschiedene Arten sind. Kutane Infektion von Hamstern kommt es zu chronischen, aber kontrollierte Läsionen, und eine klinische Entwicklung mit ähnliche Symptome wie beim Menschen beobachtet. Deshalb, o die Einrichtungf das Ausmaß der Infektion durch Messen der Größe der Läsion nach Anspruch Bereich der Verdickungen und Geschwüre möglich ist. Dieser Ansatz hat seine Vielseitigkeit und einfache Handhabung bei der Impfung bewiesen, Follow-up und Charakterisierung von typischen Läsionen (Ulzera), Anwendung von Behandlungen durch verschiedene Arten und den Erhalt von klinischen Proben nach unterschiedlichen Behandlungen. Durch die Nutzung dieser Methode die Qualität des tierischen Lebens in Bezug auf Fortbewegung, die Suche nach Nahrung und Wasser, Spiel-und sozialen Aktivitäten isalso erhalten.

Optimierung der experimentellen Hamster-Modell für kutane Leishmaniose durch intradermale Injektion von<em&gt; Leishmania</em&gt; Promastigoten an der dorsalen Haut. Dieser Ansatz ist sinnvoll, während der Inokulation, Follow-up, Charakterisierung von Läsionen, die Anwendung von Behandlungen und den Erhalt von klinischen Proben. Locomotion, die Suche nach Nahrung und Wasser, sind Spiel-und sozialen Aktivitäten erhalten.

Kutane Leishmaniose in der Rückenhaut von Hamstern: ein nützliches Modell für das Screening von Drogen leishmanientötende

Traditionell werden Hamster experimentell an der Schnauze oder am Ballen inokuliert. An diesen Stellen bildet sich jedoch nicht immer ein Geschwür, sodass die Messung von ...

Um das Hamstermodell für kutane Leishmaniasen zu optimieren, beschreiben wir hier einen Ansatz, der eine intradermale Inokulation von Promastigoten in die dorsale Haut verwendet. Dieser Ansatz hat seine Vielseitigkeit und einfache Handhabung bei der Inokulation, Nachverfolgung und Charakterisierung typischer Läsionen, Anwendung von Therapien auf verschiedenen Wegen, Gewinnung para-klinischer Proben sowie Erhebung von Daten zu verschiedenen aussichtsreichen Wirkstoffen bewiesen, ohne dass dies eine signifikante Beeinträchtigung der Lebensqualität des Modells bedeutet.Was die Fortbewegung betrifft, erfolgt die Suche nach Nahrung und Wasser sowie Spiel und soziale Aktivitäten mit vorsichtigen, sicheren und ruhigen Bewegungen. Das Tier muss dabei an der Nackenbasis mit den Fingern festgehalten werden, wobei der große Hautanteil genutzt wird, den das Meerschweinchen besitzt. Die Handfläche dient dazu, dem Tier eine stützende Oberfläche zu bieten, auf der es sich wohlfühlt. Sobald das Tier entspannt ist, kann die Haut am Nacken und an den Backentaschen mit Zeigefinger und Daumen gedehnt werden, während die übrigen Finger die Haut der Tasche fest gegen die Handfläche halten, sodass das Tier vollständig fixiert ist.Ein charakteristisches Merkmal beim Weibchen ist die Sichtbarmachung der Mi-Mary-Linie, die bereits ab der ersten Lebenswoche deutlich nachweisbar ist. Ein weiteres Merkmal ist der kurze anogenitale Abstand. Beim Geschlechtsbestimmung des Männchens kann der Eichhörnchenbeutel, der die Hoden enthält, beobachtet werden.Zusätzlich dazu und als Folge hiervon besteht ein größerer Abstand zwischen Anus und der Vierhaut. Das Tier wird am Nackenansatz festgehalten und in eine Falle oder Box gelegt, die auf einer zuvor kalibrierten Waage positioniert ist, wobei nach einigen Sekunden die Kalibrierung abgeschlossen ist. Sobald das Tier in diesem Raum ruhig steht, wird das Gewicht abgelesen und unverzüglich im vorgesehenen Format erfasst.Die gebräuchlichsten Methoden zur Identifizierung von Hamstern sind das Anfärben einer Hautstelle mit Piri-Säure und das Ohrlochen zur Färbung. Bei Verwendung von Piri-Säure wird wie folgt vorgegangen: Das Tier, wie zuvor beschrieben, festhalten und mit einem mit Piri-Säure getränkten Tupfer die zu markierende Region – üblicherweise ein vorderes oder hinteres Gliedmaßenende, links oder rechts – mit einer ausreichenden Menge benetzen, sodass die Markierung bis zum Ende des Versuchs sichtbar bleibt. Bei dieser Identifikationsmethode wird empfohlen, das Tier unter Sedierung oder Anästhesie zu halten.Obwohl dies nicht zwingend erforderlich ist, wird das U-Ohr ausgewählt und mit Alkohol desinfiziert. Danach wird die zu perforierende Stelle ausgewählt, wobei der Bereich mit Blutgefäßen vermieden werden sollte. Anschließend wird das Ohr mit einem Ohrlocher für Nagetiere durchstochen; der Eingriff muss schnell, aber fest und sicher durchgeführt werden.Da in einem Käfig zwei bis drei Tiere untergebracht werden sollten, können pro Jahr bis zu zwei Löcher angelegt werden. Um das Betäubungsmittel am Tier anzuwenden, muss es, wie am Anfang beschrieben, so gehalten werden, dass die Bewegung des Hamsters mit dem Tier verhindert wird.In Rückenlage wird der Bauchbereich, an dem das Medikament appliziert wird, mit 70 %igem Alkohol desinfiziert und mit einer sauberen Watte getrocknet. Die intraperitoneale Applikation erfolgt, wobei das Tier leicht zum Kopf hin geneigt wird, um eine viszerale Verschiebung zu bewirken. Die Nadel wird vollständig etwas parallel zur Wirbelsäule eingeführt.Eine erste Aspiration wird durchgeführt, um sicherzustellen, dass keine Organe durchstochen wurden, und anschließend wird das Medikament angewendet, um den Hautbereich des Tieres zu rasieren, der inoculiert werden soll. In verbesserter Position wird ein Punkt zwei Zentimeter von der Basis des Schwanzes markiert. Mithilfe einer Schere wird sämtliches Haar entfernt, wobei vorsichtig ein Bereich von etwa zwei Quadratzentimetern freigelegt wird, um Verletzungen in einer biologischen Sicherheitswerkbank zu vermeiden, und während das Hamster unter Narkose liegt, werden in einer Ein-Milliliter-Spritze 100 Mikroliter der bekannten Menge in logarithmischer Phase appliziert.Pro maus von Leishmania wird verabreicht. Vorsichtshalber muss die Nadel am Spritzenkörper befestigt werden, um Unfälle zu vermeiden. Mit steriler Kochsalzlösung getränktes Wattepad dient zum Reinigen der rasierten Stelle des Tieres in einer Richtung.Anschließend wird mit der Nadelöffnung nach oben die Haut des Hamsters durchdrungen, wobei sichergestellt werden muss, dass die Nadel langsam und schrittweise in die Unterhaut eindringt. Das Inokulum wird injiziert, um eine subdermale Blase zu bilden; danach wird die Nadel leicht gedreht und herausgezogen. Sämtliche verwendeten Materialien werden entsorgt.Um die Bio­sicherheits­standards zur Überwachung von durch Leishmanien verursachten Hautläsionen einzuhalten, wird eine erste Fixierung des Tieres in einer Falle empfohlen, um den Prozess der genauen Läsionsmessung zu erleichtern. Die abgetastete injizierte Hautstelle wird palpiert, um die Induration und das entstandene Ulkus mithilfe eines digitalen Messschiebers abzugrenzen; dabei wird die Breite des Ulkus erfasst und die Messung in Millimetern in einem für die klinische Überwachung vorgesehenen Format dokumentiert. Ebenso wird die Länge des Ulkus gemessen, die nach der subdermalen Inokulation ebenfalls registriert werden muss.Es gibt eine Wartezeit von vier bis fünf Wochen, um typische Läsionen zu erhalten, die den hier gezeigten vergleichbar sind, wie beim Menschen. Das Tier wird in einer speziellen Halterung fixiert, die es ermöglicht, den Rücken freizulegen, an dem die Läsion angelegt wird.Mithilfe einer Pipette wird die Substanz auf die Verletzung aufgetragen, und die Flüssigkeit wird trocknen gelassen, bevor das Tier in seinen Käfig zurückgebracht wird. Während das Tier wie oben dargestellt sicher fixiert ist, wird mit der geschickteren Hand die Stelle mit Alkohol und Watte in eine Richtung desinfiziert. Anschließend wird dieselbe Hand verwendet, um die Spritze mit dem zu verabreichenden Wirkstoff zu handhaben, wobei ein maximales Volumen von 200 µL nicht überschritten werden darf.Das Medikament wird durch den Semitendinosus oder die Semimembranosus-Muskulatur der Hinterläufe injiziert. Falls das Medikament mehrere Tage lang verabreicht werden muss, sollte zwischen den Gliedmaßen gewechselt werden, um Unbehagen und Schäden am Tier zu vermeiden. Mit der weniger geübten Hand wird das Tier wie zuvor beschrieben fixiert. Die andere Hand dient zur Handhabung der orogastralen Sonde.14 mL-Spritze, die mit einer 1 mL-Spritze verbunden ist, um bequem eine Menge von nicht mehr als 200 µL bereitzustellen. Der Hamster wird sicher mit einer Fixiervorrichtung befestigt, wobei der zu behandelnde Bereich freigelegt wird, der mit steriler Watte und Kochsalzlösung in einer einzigen Bewegung in eine Richtung gereinigt wird. Mit einer 1 mL-Spritze, wobei die Schräge nach unten zeigt und ein Volumen von nicht mehr als 100 µL verwendet wird, erfolgt ein einzelner subdermaler Ansatz an einem Scheitelpunkt der Läsion, und allmählich wird das Medikament injiziert, wobei der gesamte Bereich der Läsion vor der Tötung abgedeckt wird. Die Tiere werden wie zuvor für den Euthanasieprozess beschrieben anästhesiert.Der Hamster wird in eine versiegelte Acryl-Kammer gebracht, die mit einem Zylinder oder einem Netzwerk aus Kohlendioxid verbunden ist. Das Ventil wird langsam mehrere Minuten lang geöffnet, um die fixierten, auf einer Präparationsfläche befestigten Hamster zu entnehmen. Glasobjektträger sind für Abdrücke der Haut und innerer Organe erforderlich.15-Milliliter-Falcon-Röhrchen mit 10 % Formalin für histopathologische Proben sowie Materialien wie Präparation, Schere, Pinzette, Skalpell, Griff und Klingen. Schließlich wird das Vorhandensein von Leishmania in Proben aus Hautläsion oder Narbe, Leber, Milz, Niere und poplitenen Lymphknoten direkt durch Untersuchung von mit Geimsa gefärbten Ausstrichen und histopathologische Untersuchung dieser Gewebe bestimmt. Eine Biopsieprobe wird in 10 % Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet.Fünf Mikrometer dicke Schnitte der fixierten Gewebe wurden mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt und mit einem optischen Mikroskop bei 1000-facher Vergrößerung mit Ölimmersion untersucht, um die Mikroarchitektur, die Merkmale des zellulären Infiltrats sowie das Vorhandensein oder Fehlen von Parasiten zu analysieren. Fotomikrografien wurden angefertigt und digitale Bilder aufgenommen.Alle Materialien sollten gemäß den Vorschriften der Biosicherheit für die Entsorgung biologischer Abfälle entsorgt werden. Der goldene Hamster Mi hat sich als besonders nützlich zur Untersuchung kutaner Leishmaniose erwiesen, die durch Leishmania-Arten sowohl der alten als auch der neuen Welt verursacht wird. Die Inokulation von Promastigoten kann zwischen ein und zwei Monaten nach der Inokulation kutane Läsionen hervorrufen.Die Hamster weisen nach experimenteller Infektion eine vorhersehbare Krankheitsentwicklung auf, die durch die Ausbildung von Läsionen gekennzeichnet ist, wie sie aufgrund der chronischen Natur der kutanen Leishmaniose beim Menschen beobachtet werden. Aufgrund der chronischen Natur der kutanen Läsionen beim Hamstermodell ist die Überwachung therapeutischer Maßnahmen über längere Zeiträume hinweg möglich. Traditionell werden Hamster experimentell in die Schnauze oder die Fußsohle inoculiert; jedoch treten an diesen Stellen nicht immer Läsionen auf. Darüber hinaus ist die Messung der Läsionsgröße schwierig durchführbar, und die Hamster zeigen Schwierigkeiten beim Fressen, Atmen und Bewegen.Zusammenfassend zeigt dieser Ansatz, dass die klinisch-pathologischen Merkmale kutaner Leishmaniasis, die an der dorsalen Haut von Hamstern hervorgerufen werden, bemerkenswert ähnlich der menschlichen Erkrankung sind, sich jedoch auffallend vom üblicherweise verwendeten marinen Modell unterscheiden. Daher stellt die experimentelle Infektion in der dorsalen Haut von Hamstern ein geeignetes Modell dar, um das Potenzial von Wirkstoffen zu überprüfen, die als Kandidaten für anti-leishmanielle Arzneimittel in Betracht kommen.

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Forschung

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