Name: Immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) auf Paraffin-embedded Slides der Pankreaskarzinom Tissue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Lernen Sie die immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) in Pankreaskarzinom-Gewebeschnitten. Diese Methode ermöglicht die Visualisierung immunsuppressiver Signale im Tumormikromilieu.

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EB, KMB und HX tragen gleichermaßen. Diese Studie wurde von der NCI SPORE in Gastrointestinal Cancers P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Training Grant, Sol Goldman Pancreatic Cancer Center und National Pancreas Foundation unterstützt.

B7-H1/PD-L1, ein Mitglied der B7-Familie von immunregulatorische Zelloberflächenproteinen, spielt eine wichtige Rolle bei der negativen Regulation von zellvermittelten Immunantworten durch seine Wechselwirkung mit seinem Rezeptor, programmierten Zelltod-1 (PD -1) 1,2. Überexpression von B7-H1 durch Tumorzellen wurde in einer Reihe von menschlichen Krebsarten, einschließlich Melanom, Glioblastom und Karzinomen der Lunge, Brust, Dickdarm, Eierstock und Nierenzellen bemerkt worden, und wurde gezeigt, dass anti-Tumor-T beeinträchtigen Zell-Immunität 3-8. Vor kurzem hat B7-H1 Expression von Pankreaskarzinom Geweben als potentieller prognostischer Marker 9,10 identifiziert worden. Zusätzlich hat Blockade von B7-H1 in einem Mausmodell von Bauchspeicheldrüsenkrebs gezeigt worden, um eine Anti-Tumor-Antwort 11 zu erzeugen. Diese Daten legen nahe, wie wichtig B7-H1 als ein potenzielles therapeutisches Ziel. Anti-B7-H1-Blockade Antikörper sind daher in klinischen Studien für mehrere Menschen getestetsolider Tumoren wie Melanomen und Karzinomen der Lunge, Dickdarm, Niere, Magen und Bauchspeicheldrüse 12. Um schließlich in der Lage sein, um die Patienten, die von B7-H1 Targeting-Therapien profitieren zu identifizieren, ist es wichtig, den Zusammenhang zwischen Expression und Lokalisation von B7-H1 und Ansprechen des Patienten auf die Behandlung mit B7-H1-Blockade Antikörper zu untersuchen. Untersuchen der Expression von B7-H1 in menschlichen Pankreaskarzinom Gewebe durch Immunhistochemie wird ein besseres Verständnis, wie diese mit-inhibitorische Signalmolekül trägt zur Unterdrückung der Antitumor-Immunität in Mikroumgebung des Tumors. Die Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) von Chen und Mitarbeitern entwickelt wurde gezeigt, zuverlässig Färbeergebnisse in Kryoschnitten mehrerer Arten von menschlichen neoplastischen Geweben 4,8 zu produzieren, aber auf Anfärben Paraffin eingebetteten Folien war eine Herausforderung, bis kürzlich 13-18. Wir haben die B7-H1 staini entwickeltng Protokoll für Paraffin eingebettete Folien Pankreaskarzinom Gewebe. Die B7-H1 Färbeprotokoll hier beschriebenen konsistente membranöse und zytoplasmatische Färbung von B7-H1 mit wenig Hintergrund. Ein. De-parafinization <ol><li> Bake gleitet bei 55 ° C für 20 min. </li><li> In einer chemischen Haube, Folien tauchen in Xylol für 10 min. </li><li> Objektträger in frischem Xylol für 10 min. </li><li> Objektträger in 100% Ethanol für 5 min. </li><li> Objektträger in frisch 100% Ethanol für 5 min. </li><li> Objektträger in 95% Ethanol für 5 min. </li><li> Objektträger in 80% Ethanol für 5 min. </li><li> Objektträger in entionisiertem Wasser für 5 min. </li></ol> 2. Antigen Retrieval <ol><li> Objektträger in Tris-EDTA-Puffer (pH 9,0) und Wärme in einem Dampfkochtopf bis 125 ° C für 30 sec, dann 90 ° C für 10 sek. </li><li> Lassen Dias cool für 60 min. </li><li> Objektträger in TBST für 5 min; repebei zweimal. </li></ol> 3. Färbung <ol><li> Wischen Sie Lösungen rund um das Gewebe auf den Folien. Markieren Sie einen Kreis um das Gewebe mit einer hydrophoben Stift. </li><li> Objektträger in einer feuchten Kammer und vermeiden das Trocknen des Gewebes auf der Folie über den gesamten Färbeprozesses. Einen Tropfen (etwa 200 ul oder mehr, um das Gewebe vollständig zu bedecken Bereich) von Peroxidase Block innerhalb des hydrophoben Kreis auf der Rutsche und inkubieren in Peroxidase Block für 5 min. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. </li><li> Geben Sie einen Tropfen BLOCK ACE Blocking-Puffer auf jeder Folie und Inkubation für 15 min. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. </li><li> Geben Sie einen Tropfen Avidin-Lösung auf jeder Folie und Inkubation für 15 min. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. </li><li> Geben Sie einen Tropfen Biotin-Lösung auf jeder Folie und Inkubation für 15 min. </li><li> Spülen slides mit TBST, dann in TBST für 5 min. </li><li> Die Objektträger mit 1:1000 Verdünnung von Maus-Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) oder einer Maus IgG1 κ Isotypenkontrolle in 200 ul TBST bei 4 ° C über Nacht für 22 h + / - 1 h. Die endgültige Antikörperkonzentration in TBST ist 2,57 ug / ml. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen. </li><li> Die Objektträger mit einem Biotin konjugiertes Ratte-anti-Maus-IgG1-Antikörper in einer sekundären 1:500 Konzentration (in 200 ul 2% Ziegenserum-Lösung) für 30 min. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen. </li><li> Geben Sie einen Tropfen Streptavidin-Biotin-Komplex auf jeder Folie und Inkubation für 15 min (muss mindestens 30 min vor Gebrauch vorbereitet werden). </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen. </li><li> Geben Sie einen Tropfen Amplifikationsreagenz (verdünnt 2:1 mit TBST) auf jeder Folie und Inkubation für 4 min. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen. </li><li> Geben Sie einen Tropfen Streptavidin-HRP auf jeder Folie und Inkubation für 15 min. </li><li> Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen. </li><li> Setzen Sie einen Tropfen 3,3-Diaminobenzidin (DAB)-Substrat und Chromogen auf jeder Folie entwickeln und die Farbe für 2 min. </li><li> Unmittelbar nach der Farbentwicklung, waschen Folien mit ddH 2 O für 1-2 min. </li><li> Die Objektträger mit einem Tropfen Hämatoxylin für 90 sec. </li><li> Waschen mit ddH 2 O für 1-2 min. </li><li> Waschen mit Seifenwasser Leitungswasser für 1-2 min. </li><li> Waschen mit ddH 2 O für 1-2 min. </li></ol> 4. Dehydration und Montage <ol><li> Eintauchen der Objektträger in 80% Ethanol für 3 min. </li><li> Tauchen Sie die Folien in 95% Ethanol für 3 min. </li><li> Eintauchen der Objektträger in 100% Ethanol für 5 min. Wiederholen. </li><li> Eintauchen der Objektträger in Xylol für 5 min. Wiederholen. </li><li> Einen TropfenCytoseal 60 auf den Schlitten und Ort das Deckglas. </li></ol> Tabelle 1 listet die Reagenzien in den oben beschriebenen Verfahren verwendet.

<ol><li>Flies, D. B., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+new+B7s%3A+playing+a+pivotal+role+in+tumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunother%22%5BJournal%5D)">The new B7s: playing a pivotal role in tumor immunity.</a> J. Immunother. 30, 251-260 (2007).</li>
<li>Dong, H., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1%2C+a+third+member+of+the+B7+family%2C+co-stimulates+T-cell+proliferation+and+interleukin-10+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion.</a> Nat. Med. 5, 1365-1369 (1999).</li>
<li>Curiel, T. J., Wei, S., Dong, H., Alvarez, X., Cheng, P., Mottram, P., Krzysiek, R., Knutson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+B7-H1+improves+myeloid+dendritic+cell-mediated+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity.</a> Nat. Med. 9, 562-567 (2003).</li>
<li>Dong, H., Strome, S. E., Salomao, D. R., Tamura, H., Hirano, F., Flies, D. B., Roche, P. C., Lu, J., Zhu, G. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDong%2C+H+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. 8, 793-800 (2002).</li>
<li>Dong, H., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+pathway+and+its+role+in+the+evasion+of+tumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Med.+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity.</a> J. Mol. Med. (Berl). 81, 281-287 (2003).</li>
<li>Strome, S. E., Dong, H., Tamura, H., Voss, S. G., Flies, D. B., Tamada, K., Salomao, D., Cheville, J., Hirano, F., Lin, W., Kasperbauer, J. L., Ballman, K. V., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+blockade+augments+adoptive+T-cell+immunotherapy+for+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">B7-H1 blockade augments adoptive T-cell immunotherapy for squamous cell carcinoma.</a> Cancer Res. 63, 6501-6505 (2003).</li>
<li>Hirano, F., Kaneko, K., Tamura, H., Dong, H., Wang, S., Ichikawa, M., Rietz, C., Flies, D. B., Lau, J. S., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+B7-H1+and+PD-1+by+monoclonal+antibodies+potentiates+cancer+therapeutic+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Blockade of B7-H1 and PD-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity.</a> Cancer Res. 65, 1089-1096 (2005).</li>
<li>Thompson, R. H., Gillett, M. D., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Webster, W. S., Krejci, K. G., Lobo, J. R., Sengupta, S., Chen, L., Zincke, H., Blute, M. L., Strome, S. E., Leibovich, B. C., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Costimulatory+B7-H1+in+renal+cell+carcinoma+patients%3A+Indicator+of+tumor+aggressiveness+and+potential+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Costimulatory B7-H1 in renal cell carcinoma patients: Indicator of tumor aggressiveness and potential therapeutic target.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17174-17179 (2004).</li>
<li>Geng, L., Huang, D., Liu, J., Qian, Y., Deng, J., Li, D., Hu, Z., Zhang, J., Jiang, G., Zheng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+up-regulated+expression+in+human+pancreatic+carcinoma+tissue+associates+with+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cancer+Res.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">B7-H1 up-regulated expression in human pancreatic carcinoma tissue associates with tumor progression.</a> J. Cancer Res. Clin. Oncol. 134, 1021-1027 (2008).</li>
<li>Loos, M., Giese, N. A., Kleeff, J., Giese, T., Gaida, M. M., Bergmann, F., Laschinger, M., WB, M., Friess, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+regulation+of+the+costimulatory+molecule+B7-H1+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and regulation of the costimulatory molecule B7-H1 in pancreatic cancer.</a> Cancer Lett. 268, 98-109 (2008).</li>
<li>Okudaira, K., Hokari, R., Tsuzuki, Y., Okada, Y., Komoto, S., Watanabe, C., Kurihara, C., Kawaguchi, A., Nagao, S., Azuma, M., Yagita, H., Miura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+B7-H1+or+B7-DC+induces+an+anti-tumor+effect+in+a+mouse+pancreatic+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Blockade of B7-H1 or B7-DC induces an anti-tumor effect in a mouse pancreatic cancer model.</a> Int. J. Oncol. 35, 741-749 (2009).</li>
<li>Wang, S., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+cancer+therapies+targeting+CD137+and+B7-H1%2FPD-1+cosignal+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of cancer therapies targeting CD137 and B7-H1/PD-1 cosignal pathways.</a> Curr. Top Microbiol. Immunol. 344, 245-267 (2011).</li>
<li>Thompson, R. H., Webster, W. S., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Leibovich, B. C., Kuntz, S. M., Sengupta, S., Kwon, E. D., Blute, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+glycoprotein+blockade%3A+a+novel+strategy+to+enhance+immunotherapy+in+patients+with+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">B7-H1 glycoprotein blockade: a novel strategy to enhance immunotherapy in patients with renal cell carcinoma.</a> Urology. 66, 10-14 (2005).</li>
<li>Thompson, R. H., Kuntz, S. M., Leibovich, B. C., Dong, H., Lohse, C. M., Webster, W. S., Sengupta, S., Frank, I., Parker, A. S., Zincke, H., Blute, M. L., Sebo, T. J., Cheville, J. C., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+B7-H1+is+associated+with+poor+prognosis+in+renal+cell+carcinoma+patients+with+long-term+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor B7-H1 is associated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up.</a> Cancer Res. 66, 3381-3385 (2006).</li>
<li>Thompson, R. H., Dong, H., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+B7-H1+expression+in+clear+cell+carcinoma+of+the+kidney+for+prognostication+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Implications of B7-H1 expression in clear cell carcinoma of the kidney for prognostication and therapy.</a> Clin. Cancer Res. 13, 709s-715s (2007).</li>
<li>Karim, R., Jordanova, E. S., Piersma, S. J., Kenter, G. G., Chen, L., Boer, J. M., Melief, C. J., vander Burg, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-expressed+B7-H1+and+B7-DC+in+relation+to+PD-1%2B+T-cell+infiltration+and+survival+of+patients+with+cervical+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor-expressed B7-H1 and B7-DC in relation to PD-1+ T-cell infiltration and survival of patients with cervical carcinoma.</a> Clin. Cancer Res. 15, 6341-6347 (2009).</li>
<li>Inman, B. A., Sebo, T. J., Frigola, X., Dong, H., Bergstralh, E. J., Frank, I., Fradet, Y., Lacombe, L., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1+%28B7-H1%29+expression+by+urothelial+carcinoma+of+the+bladder+and+BCG-induced+granulomata%3A+associations+with+localized+stage+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression.</a> Cancer. 109, 1499-1505 (2007).</li>
<li>Brahmer, J. R., Drake, C. G., Wollner, I., Powderly, J. D., Picus, J., Sharfman, W. H., Stankevich, E., Pons, A., Salay, T. M., McMiller, T. L., Gilson, M. M., Wang, C., Selby, M., Taube, J. M., Anders, R., Chen, L., Korman, A. J., Pardoll, D. M., Lowy, I., Topalian, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+study+of+single-agent+anti-programmed+death-1+%28MDX-1106%29+in+refractory+solid+tumors%3A+safety%2C+clinical+activity%2C+pharmacodynamics%2C+and+immunologic+correlates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates.</a> J. Clin. Oncol. 28, 3167-3175 (2010).</li>
<li>Wang, L., Ma, Q., Chen, X., Guo, K., Li, J., Zhang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+of+B7-H1+and+B7-1+expressions+in+pancreatic+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Clinical significance of B7-H1 and B7-1 expressions in pancreatic carcinoma.</a> World J. Surg. 34, 1059-1065 (2010).</li>
<li>Nomi, T., Sho, M., Akahori, T., Hamada, K., Kubo, A., Kanehiro, H., Nakamura, S., Enomoto, K., Yagita, H., Azuma, M., Nakajima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+therapeutic+potential+of+the+programmed+death-1+ligand%2Fprogrammed+death-1+pathway+in+human+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death-1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer.</a> Clin. Cancer Res. 13, 2151-2157 (2007).</li>
<li>Taube, J. M., Anders, R. A., Young, G. D., Xu, H., Sharma, R., McMiller, T. L., Chen, S., Klein, A. P., Pardoll, D. M., Topalian, S. L., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colocalization+of+inflammatory+response+with+B7-h1+expression+in+human+melanocytic+lesions+supports+an+adaptive+resistance+mechanism+of+immune+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape.</a> Sci. Transl. Med. 4, 127ra37(2012).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Immunhistochemische Färbung von B7-H1 auf Kryoschnitten In früheren Studien wurde für eine Vielzahl von Krebsarten 3,4 gemeldet. Jedoch klinischen Tumorproben üblicherweise nur in Form von in Paraffin eingebetteten Blöcke verfügbar. Die monoklonalen Antikörper 5H1 hat neuerdings erfolgreich an die Färbung von Paraffin eingebettet Tumorgeweben einschließlich Nierenzellkarzinom, Gebärmutterhalskrebs, Blasenkrebs und Melanom 13-18 angewandt. B7-H1 Färbung auf Paraffin eingebettete, 9,19 ode...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> CSA-System </td><td> Dako </td><td> K1500 </td><td> Enthält die folgenden Reagenzien in dem Protokoll genannt: Peroxidase Block, Streptavidin-Biotin-Komplex, Amplifikationsreagens, Streptavidin-HRP und DAB Substrat und Chromogen </td></tr><tr><td> Avidin / Biotin Blocking Kit </td><td> Vektor </td><td> SP-2001 </td><td></td></tr><tr><td> Block ACE </td><td> Serotec </td><td> BUF029 </td><td></td></tr><tr><td> Biotin Anti-Maus-IgG1 </td><td> BD </td><td> 553441 </td><td></td></tr><tr><td> Mouse IgG1 K Isotypkontrolle </td><td> eBioscience </td><td> 14-4714-85 </td><td></td></tr><tr><td> TBS (Tris-gepufferte Salzlösung), 10X </td><td> Cellgro </td><td> 46-012-CM </td><td> 10xTBS enthält 80 g / l NaCl und 24,2 g / L Tirs; Verdünnt 1X mit ddH2O für Waschmittel; </td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1379 </td><td> 1 ml zugesetzt, um 1 l 1X TBS zu machen TBST </td></tr><tr><td> Target Retrieval, 20x </td><td> Celerus Welle </td><td> 014-3000-000 </td><td> Verdünnt auf 1x mit ddH 2 O </td></tr><tr><td> 190 Proof Ethylalkohol </td><td> Pharmco-Aaper </td><td> 111000190 </td><td></td></tr><tr><td> 200 Proof Ethylalkohol </td><td> Pharmo-Aaper </td><td> 111000200 </td><td></td></tr><tr><td> Xylol </td><td> VWR </td><td> 95057-827 </td><td></td></tr><tr><td> Hematoxylin </td><td> Richard-Allan Scientific </td><td> 72804 </td><td></td></tr><tr><td> Cytoseal 60 </td><td> Richard-Allan Scientific </td><td> 8310-4 </td><td></td></tr><tr><td> Deckgläser </td><td> Corning </td><td> 2940-245 </td><td></td></tr><tr><td> Feuchte Kammer </td><td> Sigma </td><td> H6644 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tabelle 1. Reagenzien und Ausrüstung. </td></tr></tbody></table>

immunhistochemische färbung von b7-h1 (pd-l1) auf paraffin-embedded slides der pankreaskarzinom tissue

Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

B7-H1/PD-L1, ein Mitglied der B7-Familie von immunregulatorische Zelloberflächenproteinen, spielt eine wichtige Rolle bei der negativen Regulation von zellvermittelten Immunantworten durch seine Wechselwirkung mit seinem Rezeptor, programmierten Zelltod-1 (PD -1) 1,2. Überexpression von B7-H1 durch Tumorzellen wurde in einer Reihe von menschlichen Krebsarten, einschließlich Melanom, Glioblastom und Karzinomen der Lunge, Brust, Dickdarm, Eierstock und Nierenzellen bemerkt worden, und wurde gezeigt, dass anti-Tumor-T beeinträchtigen Zell-Immunität 3-8. Vor kurzem hat B7-H1 Expression von Pankreaskarzinom Geweben als potentieller prognostischer Marker 9,10 identifiziert worden. Zusätzlich hat Blockade von B7-H1 in einem Mausmodell von Bauchspeicheldrüsenkrebs gezeigt worden, um eine Anti-Tumor-Antwort 11 zu erzeugen. Diese Daten legen nahe, wie wichtig B7-H1 als ein potenzielles therapeutisches Ziel. Anti-B7-H1-Blockade Antikörper sind daher in klinischen Studien für die mul geprüfttiple humanen soliden Tumoren wie Melanomen und Karzinomen der Lunge, Dickdarm, Niere, Magen und Bauchspeicheldrüse 12. Um schließlich in der Lage sein, um die Patienten, die von B7-H1 Targeting-Therapien profitieren zu identifizieren, ist es wichtig, den Zusammenhang zwischen Expression und Lokalisation von B7-H1 und Ansprechen des Patienten auf die Behandlung mit B7-H1-Blockade Antikörper zu untersuchen. Untersuchen der Expression von B7-H1 in menschlichen Pankreaskarzinom Gewebe durch Immunhistochemie wird ein besseres Verständnis, wie diese mit-inhibitorische Signalmolekül trägt zur Unterdrückung der Antitumor-Immunität in Mikroumgebung des Tumors. Die Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) von Chen und Mitarbeitern entwickelt wurde gezeigt, zuverlässig Färbeergebnisse in Kryoschnitten mehrerer Arten von menschlichen neoplastischen Geweben 4,8 zu produzieren, aber auf Anfärben Paraffin eingebetteten Folien war eine Herausforderung, bis kürzlich 13-18. Wir haben developed die B7-H1 Färbeprotokoll für Paraffin eingebettete Folien Pankreaskarzinom Gewebe. Die B7-H1 Färbeprotokoll hier beschriebenen konsistente membranöse und zytoplasmatische Färbung von B7-H1 mit wenig Hintergrund.

Eine erfolgreiche immunhistochemische Färbung von B7-H1 demonstrieren die heterogene Expression von B7-H1 (braun Signale DAB Farbentwicklung) in Pankreaskarzinom. Einige Pankreaskarzinom-Zellen haben überwiegend membranöse Expression von B7-H1 (Abbildung 1A), während andere entweder vorwiegend zytoplasmatische Expression von B7-H1 oder wenig Expression von B7-H1 (Abbildungen 2 und 3). Normale Pankreasgangepithel drückt etwas B7-H1 (Abbildung 4). Anfärbung mit einem Maus...

B7-H1 (PD-L1) und seine Bindung an PD-1 einen großen tumorinduzierte immunsuppressiven Signal in Mikroumgebung des Tumors. Eine immunhistochemische Färbetechnik, die Expression und Lokalisation von B7-H1 in Pankreaskarzinom zu charakterisieren ist hier beschrieben.

Immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) auf Paraffin-embedded Slides der Pankreaskarzinom Tissue

B7-H1/PD-L1, ein Mitglied der B7-Familie immunregulatorischer Zelloberflächenproteine, spielt eine wichtige Rolle bei der negativen Regulation der zellvermittelten ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, mithilfe immunhistochemischer Färbetechniken die Expression von B seven H one PD L one in Paraffinschnitten menschlichen Pankreasadenokarzinomgewebes zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem zunächst das Paraffin entfernt und die geschnittenen Gewebeproben rehydriert werden. Der zweite Schritt des Verfahrens ist die Antigen-Retrieval, bei dem ein Schnellkochtopf zur Färbung des Gewebes verwendet wird.Ein Antikörper-Färbungsverfahren wird durch eine Signalverstärkung und Entwicklung der Farbe mittels DAB ergänzt. Die abschließenden Schritte bestehen in der Dehydrierung und Einbettung des Gewebes. Sobald abgeschlossen.Mithilfe von Mikroskopie und Bildanalyse können membranöses und zytoplasmatisches B-sieben-H-eins sichtbar gemacht werden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in der Forschung eines pankreatischen Endokarzinoms zu beantworten, indem sie ein besseres Verständnis dafür liefert, wie B-sieben-eins BTL-eins zur Unterdrückung der anti-tumoralen Immunität im Mikromilieu des Tumors beiträgt. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie der Färbung von Kryoschnitten, liegt darin, dass sie spez

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Dieses Video zeigt Verfahren zur Charakterisierung von humanen Langerhans-Inseln mit Hämatoxylin und Eosin (H &amp; E) und Immunhistochemie (IHC). Pankreas-Abschnitten von Kopf, Körper und Schwanz Regionen werden sowohl von H &amp; E und IHC gefärbt, um Inselzellen endokrinen Zusammensetzung (Insulin, Glukagon und pankreatische Polypeptid), Zell-Replikation (Ki67) und entzündlichen Infiltraten (H &amp; E, CD3) zu bestimmen. Die uncinatus Region lokalisiert ist mit IHC für pankreatische...

Färbeprotokollen for Human Pankreasinseln

Hier präsentieren wir Ihnen einen Protokoll zum menschlichen Bauchspeicheldrüse Bildausschnitte in drei Dimensionen (3D) mit optimierten passiven clearing-Methoden. Diese Handschrift zeigt diese Verfahren für passive optische Clearing folgten mehrere Immunfluoreszenz Färbung um Schlüsselelemente der autonomen und sensorische neuronale Netze innervieren menschlichen Inselchen zu identifizieren.

Hochauflösende 3D Bildgebung des menschlichen Bauchspeicheldrüse Neuro-insularen Netzwerks

Die Versuchsdurchführung auf die Immunphänotypisierung der murinen orthotopen PDAC Homografts bezweckt die Profilierung der Tumor Immuno-Mikroumgebung. Tumoren sind Orthotopically über Operation implantiert. Tumoren von 200 – 600 mm3 in der Größe wurden geerntet und distanzierte um einzellige Suspensionen, gefolgt von Multi-immun FACS Markeranalyse mit verschiedenen fluoreszent-markierten Antikörpern vorzubereiten.

Die Immunphänotypisierung der Orthotopen Homograft (Phänomen) der murinen primäre KPC duktales Pankreaskarzinom durch Durchflusszytometrie

Ex-Vivo pancreatic Islet Studien sind wichtig für Diabetes-Forschung. Bestehende Techniken an kultivierte Inselchen in ihrer Muttersprache 3-dimensionale Architektur zu studieren sind zeitaufwendig, ineffizient und selten verwendete. Diese Arbeit beschreibt eine neue, einfache und effiziente Methode zur Erzeugung von qualitativ hochwertige Paraffin Abschnitte des gesamten kultivierten Inselchen.

Pancreatic Islet Einbettung für Paraffin Abschnitte

Ein detailliertes Protokoll für ein sechs-Marker multiplex Immunfluoreszenz-Panel optimiert und durchgeführt ist, mit Hilfe einer automatisierten Stainer für konsistentere Ergebnisse und eine kürzere Verfahrensdauer. Dieser Ansatz kann direkt von jedem Labor für Immuno-onkologischen Studien angepasst werden.

Automatisierte Multiplex Immunfluoreszenz Panel für Immuno-Onkologie-Studien auf Formalin fixiert Karzinom Gewebeproben

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Möglichkeit, einzupflanzen und dieses orthotopen Brust Krebs Mausmodell mit einer richtigen Mamma Fettlappen Umgebung kann verwendet werden, um verschiedene Aspekte zu untersuchen Krebs.

Orthotopen Injektion von Brustkrebs-Zellen in den Mäusen Mamma Fettlappen

Dieses experimentelle Protokoll beschreibt und optimiert eine Multiplex-Immunhistochemie (IHC)-Färbemethode, hauptsächlich durch die Optimierung der Inkubationsbedingungen von Einzelkanal-Antikörpern und die Anpassung der Einstellungen von Antikörpern und Kanälen, um die Probleme der Autofluoreszenz und des Kanalwechsels in Lungenkrebsgeweben klinischen Ursprungs zu lösen.

Multiplex-Immunhistochemie-Färbung für paraffineingebettetes Lungenkrebsgewebe

Die zyklische Multiplex-Immunhistochemie ermöglicht den gleichzeitigen In-situ-Nachweis mehrerer Marker durch wiederholte Antigen-Antikörper-Inkubation, Bildscannen sowie Bildausrichtung und -integration. Hier stellen wir das Operationsprotokoll zur Identifizierung von Immunzellsubstraten mit dieser Technologie in Lungenkrebs- und gepaarten Hirnmetastasenproben vor.

Zyklische Multiplex-Fluoreszenz-Immunhistochemie

Um zu entwirren die frühesten molekularen Mechanismen Prostatakrebs Initiation, neuartige und innovative menschlich Systeme und Ansätze dringend benötigt werden. Das Potenzial der pre-Prostata Urogenitalsinus Mesenchym (UGSM) an pluripotenten Stammzellen Zellpopulationen induzieren die menschliche Prostata-Epithel zu bilden ist ein leistungsfähiges Werkzeug in Prostata experimentellen Forschung.

Formation of Human Prostate Epithel Mit Tissue Rekombination von Nagetier Urogenitalsinus Mesenchym und menschlichen Stammzellen

Verbessertes Verständnis von Bauchspeicheldrüsenkrebs Biologie ist dringend erforderlich, um die Entwicklung von besseren therapeutischen Optionen zur Behandlung von Bauchspeicheldrüsenkrebs zu ermöglichen. Um diesen Bedarf zu demonstrieren wir eine orthotopic Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, die nicht-invasive Überwachung der Tumorprogression ermöglicht...

Bioluminescent orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression

Lernen Sie die immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) in Pankreaskarzinom-Gewebeschnitten. Diese Methode ermöglicht die Visualisierung immunsuppressiver Signale im Tumormikromilieu.

Immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) auf Paraffin-embedded Slides der Pankreaskarzinom Tissue

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