18. November 2012
Dieses Protokoll beschreibt die regelmäßige Wartung und Pflege, um optimale Bedingungen für die Zebrafisch Haltung beizubehalten. Das Video veranschaulicht das Protokoll, für die Systemwartung, regelmäßige Haltung, Fütterung, Zucht und Aufzucht von Zebrafisch-Larven.
Dieses Protokoll beschreibt die regelmäßige Pflege und Wartung eines Zebrabärbling-Labors. Aufgrund des wachsenden Interesses an der Zebrabärbling-Forschung steigt auch die Notwendigkeit, eine Haltungseinrichtung für Zebrabärblinge aufzubauen und zu betreiben. Obwohl Literatur zur Pflege eines Zebrabärbling-Labors verfügbar ist, fehlt bisher ein prägnantes Video-Protokoll.
Dieses Video erklärt die Systemwartung, Fütterung, Zucht und Aufzucht von Zebrafischnachkommen. Hallo, ich bin ABH von der medizinischen Fakultät der Universität. Hallo, ich bin Manchi vom Thee-Institut.
Heute zeigen wir Ihnen die regelmäßige Pflege und Wartung eines Zebrafisch-Labors. Zebrafische gewinnen zunehmend an Bedeutung in der Genetik, pharmakologischen und verhaltensbezogenen Forschung. Aufgrund ihrer hohen Fortpflanzungsrate, einfachen Haltung und schnellen Entwicklung eignen sie sich hervorragend für genetische Modulationen und sind geeignet für Hochdurchsatz-Drug-Screens.
Dieser Abschnitt bietet Anregungen zur Zebrafischaquakultur für Nutzer und Forscher, die darüber nachdenken, eine neue Fischhaltungsanlage einzurichten. Beginnen wir also. Mehrere Unternehmen bieten Fischhaltungssysteme an, aber wir verwenden Systeme von Aquatic Habitats.
In unserem Labor werden Zebrafische bei 26 bis 28,5 Grad Celsius und einem Licht-Dunkel-Zyklus von 14 zu 10 gehalten. Zebrafische werden in einem Zirkulationssystem aufbewahrt, das das Systemwasser kontinuierlich filtert und belüftet. Um die Wasserqualität aufrechtzuerhalten, die für eine gesunde aquatische Umgebung erforderlich ist, verwendet das System eine Reihe von Filtern verschiedener Typen innerhalb unseres Systems.
Wasser aus den Becken durchläuft eine Filtermatte, einen Patronenfilter, einen biologischen Filter, einen Aktivkohlefilter und eine UV-Lampe, bevor es wieder in das Becken zurückgeführt wird. Im Zebrabärbling-System wird entchloriniertes oder abgestandenes Wasser verwendet. Eine Entchlorinierung des Wassers kann durch Abstehenlassen von mindestens 48 Stunden erfolgen.
Überprüfen Sie täglich den pH-Wert des Systemwassers und halten Sie ihn zwischen 6,8 und 7,5. Unter Verwendung von Natriumbicarbonat sollten die Fischaquarien regelmäßig gereinigt werden. Um ein Fischaquarium zu reinigen, schließen Sie den Wasserfluss zu diesem Becken, lassen Sie überschüssiges Wasser ab, indem Sie das Becken nach hinten kippen, und nehmen Sie das Becken vorsichtig aus dem System heraus.
Richten Sie einen sauberen Behälter ein und füllen Sie ihn mit Systemwasser. Überführen Sie die Fische vorsichtig mit einem Fischernetz in diesen Behälter. Schließen Sie den Deckel und ersetzen Sie das Behälter-Etikett sorgfältig.
Stellen Sie den Tank in das System. Bringen Sie den Schlauch wieder in den Tank ein und schalten Sie die Wasserversorgung ein. Deskontaminieren Sie das Fischnetz und den Tank mit 70 % Ethanol.
Mit Wasser abspülen und trocknen lassen. Vor der Wiederverwendung müssen die Filter des Zirkulationssystems regelmäßig überprüft und gewechselt werden, um ihre ordnungsgemäße Funktion sicherzustellen.
Der 120-Mikron-Filter wird täglich vor dem Austausch auf Überprüfung und Ausrichtung in Richtung des Wasserflusses hin kontrolliert. Der Kartuschenfilter sollte wöchentlich gewechselt werden. Zum Wechseln des Kartuschenfilters diesen mit einem Schraubenschlüssel oder per Hand entfernen.
Legen Sie eine Plastikfolie oder ein Handtuch darunter, um Wasseraustritt zu verhindern. Setzen Sie eine neue Dose, einen Filter ein und bauen Sie das Gerät wieder in das System ein. Vorsichtig mit der Hand und anschließend mit einem Schraubenschlüssel festziehen.
Falls erforderlich, sollte der Aktivkohlefilter alle zwei Wochen gewechselt werden. Zum Wechseln des Aktivkohlefilters entfernen Sie ihn vorsichtig. Mit einem Schraubenschlüssel in der Hand entsorgen Sie die verbrauchte Aktivkohle aus dem Filter und füllen ihn mit neuer Aktivkohle auf.
Setzen Sie den Kohlehalter wieder ein und platzieren Sie ihn zurück in der Filtereinheit. Bringen Sie die Filtereinheit wieder im System an. Schalten Sie das System ein und prüfen Sie, ob Wasser zur Filteranlage fließt.
Der biologische Filter sollte alle sechs Monate gereinigt werden. Um den biologischen Filter zu wechseln, entfernen Sie den Filter aus dem System. Entlasten Sie den Druck im Filter, indem Sie die Druckentlastungstaste betätigen.
Schrauben Sie den Filter ab und entfernen Sie den Deckel. Geben Sie den Inhalt in einen Siebbehälter, um das Cy Oex vom Wasser zu trennen. Falls das Cy Oex sehr verschmutzt ist, ersetzen Sie es.
Füllen Sie den Filter mit dem neuen Cy Ax. Füllen Sie das Gerät mit Systemwasser. Schließen Sie den Deckel des Filters und setzen Sie das Gerät wieder zusammen, dann schalten Sie es ein.
UV-Filter dienen der Kontrolle biologischer Kontaminanten und sollten alle neun bis zehn Monate ausgetauscht werden. Zebrafische können mit Trockenfutter oder Lebendfutter wie Artemia genährt werden; Artemia-Eier sind in lokalen Zoohandlungen erhältlich und können im Labor gemäß den hier beschriebenen einfachen Schritten ausgebrütet werden. Lösen Sie Red-Sea-Salz in Systemwasser, um eine Lösung von 30 bis 35 Gramm pro Liter herzustellen.
Füllen Sie den Salinenkrebserbrüter mit Salzwasser und geben Sie die Krebseier in einer Konzentration von 1,2 Esslöffeln pro Liter hinzu. Belüften Sie den Brüter kräftig mit einer Luftpumpe und lassen Sie die Salinenkrebseier etwa 48 Stunden lang befruchten. Entfernen Sie die Luftleitung und lassen Sie die Kultur vier bis fünf Minuten lang absetzen.
Die befruchteten Artemien sammeln sich am Boden des Brutschiffes. Über den Hahn am Boden des Brutschiffes wird der erste Abfluss, der unbefruchtete Eier enthält, verworfen. Anschließend werden die befruchteten Artemien gesammelt. Trennen Sie die Artemien vom Salzwasser.
Mit einem Salinenkrebschen-Sammelnetz. Spülen Sie die Salinenkrebschen mit Systemwasser in einen Behälter. Die Salinenkrebschen befinden sich nun in hoher Konzentration am Boden des Behälters und sind bereit, den Zebrafischen verfüttert zu werden. Füttern Sie die Salinenkrebschen den Fischen mit einer Pipette oder einem Tropfer zu.
Die Menge des ausgegebenen Futters hängt von der Populationsgröße der einzelnen Becken ab. Nachdem das Futter ins Wasser injiziert wurde, schwimmen hungrige Fische los, um Artemia zu fangen, was wichtig für ihre regelmäßige Bewegung ist. Die Trockenfütterung kann entweder mit einem aquatischen Lebensraum, einem Futterautomaten für Fische, oder mit einem einfachen Löffel durchgeführt werden.
Zebrafische beginnen mit der Fortpflanzung zu Beginn der Lichtphase. Eier können durch In-Becken- oder Paarfortpflanzung gewonnen werden. Während die In-Becken-Fortpflanzung arbeitssparender ist und bei der regelmäßigen Sammlung von Embryonen verwendet wird, ist die Paarfortpflanzung vorzuziehen, wenn Gene oder Mutationen im Beckenbrutverfahren untersucht werden sollen. Stellen Sie den In-Becken-Zuchtkäfig zusammen und senken Sie ihn langsam in ein Becken ab.
Nach dem Einschalten des Lichts die Zuchtanordnung etwa 15 Minuten im Becken belassen, damit die Fische sich paaren können, bevor der Zuchtfisch aus dem Becken entfernt und die Eier gesammelt werden. Die Birnenförmige Zucht wird am späten Nachmittag eingerichtet, indem das Zuchtbecken zusammengestellt und mit Systemwasser gefüllt wird. Überführen Sie ein Weibchen und ein Männchen auf gegenüberliegende Seiten des Beckens.
Weibchen können aufgrund ihres größeren Bauches von Männchen unterschieden werden. Entfernen Sie den Trennsteg am nächsten Morgen. Kurz nach Beginn der Beleuchtung, lassen Sie die Fische für 20 Minuten ungestört paaren oder bis eine ausreichende Anzahl von Embryonen am Boden des Beckens abgelegt wurde.
Nach der Zucht bringen Sie die Fische in ihre Becken zurück. Sammeln Sie die Eier mit einem Sieb ein und waschen Sie die Embryonen gründlich.
Mit Systemwasser. Überführen Sie die Embryonen durch Ausspülen des Siebs mit Embryonenmedium in eine Petrischale. Die Embryonen können unter einem Mikroskop beobachtet werden.
Unbefruchtete Embryonen sollten mithilfe einer Nadel und einer Pipette von befruchteten Embryonen getrennt werden. Nachdem die befruchteten Eier von den unbefruchteten Eiern getrennt wurden, werden sie für 72 Stunden bei etwa 28,5 Grad Celsius in einem Inkubator aufbewahrt, bis die Larven geschlüpft sind. Nun sind die Larven aus den CORs heraus und schwimmen frei.
Die Larven müssen ab fünf Tagen nach der Befruchtung gefüttert und einige Tage lang in stehendem Wasser gehalten werden, bevor sie in das System überführt werden. Überführen Sie die Larven vorsichtig in ein Becken, das einen kleinen Leistungsstörschirm mit einer Größe von etwa 300 bis 400 Mikrometern enthält. Nach 14 Tagen können die Larvenbecken in das System eingestellt und mit einem schwachen Strom zirkulierenden Wassers versorgt werden.
Je nach Größe der Larven und ausgewachsener Fische sollten unterschiedlich große Leisten verwendet werden. Normalerweise dauert es drei Monate, bis sich die Embryonen zu geschlechtsreifen Erwachsenen entwickeln. Vielen Dank fürs Zuschauen des Menüs und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.
Dieses Protokoll beschreibt die regelmäßige Wartung und Pflege, die für eine optimale Zebrafischaufzucht erforderlich sind. Es umfasst detaillierte Verfahren für die Systemwartung, Unterbringung, Fütterung, Zucht und Aufzucht von Zebrafischnachwuchs.
Die Einrichtung robuster Haltungsprotokolle für Zebrafische unterstützt zuverlässige präklinische Modelle für pharmakologische und genetische Forschung. Standardisierte Unterbringungs-, Fütterungs- und Zuchtverfahren verringern die biologische Variabilität und verbessern die Reproduzierbarkeit der Daten in frühen Entdeckungsworkflows. Dies ermöglicht eine konsistente phänotypische Bildschirmanalyse und Zielvalidierung in krankheitsrelevanten Systemen.
Die Haltung von Zebrabärblingen ist in den Entdeckungsprozess von der frühen Target-Validierung über die Identifizierung von Leitstrukturen bis hin zum präklinischen Profiling integriert, da sie eine stabile und skalierbare biologische Plattform bereitstellt.