Rat Modell der Blut-Hirn-Schranke Störung zu Neurovascular Therapeutics Gezielte zulassen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Blut-Hirn-Schranke zu stören. Dies wird erreicht, indem das Tier zunächst in eine intravenöse Anästhesie mit einem endotrachealen Atemweg gesetzt wird. Als nächstes wird die Bifurkation der Arteria carotis communis freigelegt.

Dann wird ein Katheter in die Arteria carotis externa eingeführt. Zum Schluss wird Mannitol verabreicht. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die eine Störung der Blut-Hirn-Schranke durch Extravasation von Evan's Blue Dye zeigen.

Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden der intraarteriellen Therapie besteht darin, dass sie es ermöglicht, dass Medikamente in das Gehirn gelangen, die normalerweise unter physiologischen Bedingungen die Blut-Hirn-Schranke nicht überwinden. Dies hat Auswirkungen auf den Bereich der Neurowissenschaften, da es uns ermöglicht, neue Therapien zu testen, die die Blut-Hirn-Schranke nur unzureichend überwinden können. Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf die Neuroonkologie, da viele Chemotherapeutika die Blut-Hirn-Schranke nicht überwinden.

Nun, obwohl diese Methode uns Einblicke in die neue Onkologie gibt, kann sie uns auch Informationen über andere neurologische Erkrankungen liefern, die mit Medikamenten mit schlechter Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke behandelt werden. Wir hoffen, dass die visuelle Demonstration dieser Methode es Forschern und Vertrauten der Tierchirurgie ermöglichen wird, diese Technik in ihren Labors anzuwenden. Bereiten Sie zunächst eine Lösung aus 25% Mannitol vor und stellen Sie sicher, dass keine Kristalle vorhanden sind.

Wenn Kristalle vorhanden sind, lösen Sie diese auf, indem Sie das Fläschchen in ein 80 Grad Celsius heißes Wasserbad stellen und umrühren. Erfassen Sie regelmäßig die Masse des Tieres und bereiten Sie zwei 12-ml-Spritzen mit Propofol vor, die mit einer Geschwindigkeit von 0,1 Millilitern pro Minute verabreicht werden. Nachdem Sie das Tier in einer Induktionskammer betäubt haben, legen Sie es auf ein Einweghandtuch und rasieren Sie seinen Hals und die Innenseiten der Oberschenkel.

Setzen Sie das Tier für drei Minuten wieder in die Induktionskammer. Um sich auf die Intubation der Ratte vorzubereiten, beginnen Sie mit der Vorbereitung eines Endotrachealtubus mit einem IV-Katheter. Der Schlauch muss groß genug sein, um einen ausreichenden Luftstrom zu ermöglichen, aber klein genug, um in die Luftröhre zu passen, ohne Schäden zu verursachen.

Um einen Stift herzustellen, ziehen Sie die Nadel aus dem Kunststoffkatheter und brechen Sie die Nadel vorsichtig ab. Führen Sie die Nadel etwa einen Zentimeter von der scharfen Spitze entfernt wieder in den Katheter ein. Hängen Sie dann die Ratte an ihren Zähnen an einer abgewinkelten Oberfläche auf und richten Sie ein Licht direkt gegen den Hals des Tieres, der zwischen seinen Ohren ausgerichtet ist.

Führen Sie anschließend einen kleinen Spatel in den Oropharynx ein. Etwa drei Zentimeter. Hebe die Zunge nach oben, während du sie sanft aus dem Mund ziehst.

Stellen Sie sich die Öffnung der Luftröhre als ein kleines Loch vor, das sich öffnet und schließt. Führen Sie den Katheter bei jedem Atemzug vorsichtig in das Loch ein und achten Sie darauf, ihn nicht in den Knorpel der empfindlichen Luftröhre zu drücken. Stellen Sie das Beatmungsgerät auf einen Liter pro Minute und 60 BPM und dann auf 2 % Fluor ein. Schließen Sie dann den Katheter an das Beatmungsgerät an und kleben Sie den Schlauch an die Operationsfläche.

Vergewissern Sie sich, dass das Tier betäubt ist, indem Sie eine Zehenkneifung durchführen. Sichern Sie die Route, indem Sie alle vier Gliedmaßen im Heck an die Arbeitsfläche kleben. Schrubben Sie den rasierten Hals und die Leistengegenden dreimal mit Chlorhexidinseife.

Dann mit Chlorhexidin schrubben. Dreimal ausspülen. Befestigen Sie eine Spritze mit Propofol an einem IV-Verlängerungsset und montieren Sie die Spritze auf die Infusionspumpe.

Schneiden Sie anschließend mit einem Skalpell durch die Haut des rasierten Oberschenkels, ohne den Muskel zu durchtrennen. Verwenden Sie dann eine Pinzette, um den Schnitt zu öffnen und die Oberschenkelvene zu lokalisieren, und ziehen Sie das Gewebe über die Arterie weg, um das Gefäß freizulegen. Führen Sie einen 26-G-Mono-Eject-Veterinär-IV-Katheter in die Vene ein.

Sobald die Nadel die Venenwand durchsticht, wird es einfacher, sie zu drücken. Ziehen Sie die Nadel zurück und schieben Sie den Katheter drei bis fünf Minuten in das Gefäß. Nach Beginn der Propofol-Infusion schalten Sie das Anästhesiegas auf ein Gemisch aus 50 % O2 und 50 % N zwei O um und schalten Sie das Fluor ab.

Um die Bifurkation der Halsschlagader freizulegen, beginnen Sie mit einer Skalpellklinge, um einen Mittellinienschnitt am Hals zu machen. Schneiden Sie durch die oberflächliche Faszie entlang der Mittellinie, um den Zungenbeinmuskel über der Luftröhre zu erreichen. Bewegen Sie das Gewebe seitlich weg, um eine Gruppe von drei Muskeln sichtbar zu machen, dem Zungenbein des Brustbeins, dem Di-Magen und dem sternalen Mastoid, die mit einer Pinzette oder Schere das Karotisdreieck der Ratte bildeten.

Trennen Sie die Faszie zwischen den Muskeln des Halsschlagaderdreiecks, um die Halsschlagader freizulegen. Verwenden Sie bipolare Kauter, um kleinere Gefäße zusammen mit Gaze und Wattestäbchen zu teilen. Um die Blutung zu kontrollieren, verwenden Sie Retraktoren, um die Muskeln mit einer Pinzette auseinander zu halten. Bewegen Sie das Gewebe von der Halsschlagader weg und finden Sie die Bifurkation.

Legen Sie die Arteria occipitalis direkt distal der Bifurkation frei. Verätzen Sie es zwischen den Pinzetten und verwenden Sie einen Elektrokauter, um es mit einer Pinzette zu trennen. Legen Sie die Halsschlagadergabelung und so viel wie möglich von der Arteria carotis externa (ECA) vollständig frei.

Legen Sie die obere Schilddrüsenarterie frei, die von der ECA distal zur Arteria occipitalis abzweigt. Verätzen Sie es zwischen den Pinzetten und trennen Sie es, um die ECA zu katheterisieren. Lege zwei Bahnen von vier Oh Silk darunter.

Verwenden Sie ein Blutstillungsmittel und nehmen Sie ein Stück Naht und ziehen Sie das ECA wieder mit der anderen Naht zurück. Binden Sie ihn so weit wie möglich mit dem Knoten des Chirurgen, distal zur Bifurkation und proximal zur bleibenden Ligatur. Binden Sie locker den Knoten eines anderen Chirurgen, um die Arterie zu entspannen.

Spülen Sie es mit 1% Lidocain, füllen Sie den Katheter mit heparinisierter Kochsalzlösung. Platzieren Sie als Nächstes einen provisorischen Gefäßclip in einem Winkel, der so nah wie möglich an der Bifurkation liegt. Schieben Sie dann den losen Knoten mit einer Mikroschere in Richtung des Clips.

Machen Sie einen kleinen Schnitt in der ECA direkt neben der Ligatur. Wenn der Clip und die Ligatur fest sitzen, sollte es zu keinen Blutungen mit einer Pinzette kommen. Um die ECA-Wände zu kontrollieren, führen Sie das abgeschrägte Ende des Katheters in das Gefäß mit dem losen Chirurgenknoten ein.

Befestigen Sie den Katheter. Binden Sie die Arterie um den Katheter herum, entfernen Sie dann den Clip und reinigen Sie den Bereich mit einem Wattestäbchen. Schieben Sie den Katheter etwa einen Millimeter distal zur Bifurkation vor.

Verwenden Sie eine Pinzette, um die Arterie proximal zum Knoten zu halten, um sicherzustellen, dass das Gefäß immobilisiert ist. Zur Verabreichung von Mannitol. Füllen Sie ein acht Zoll IV Verlängerungsset und eine sechs Milliliter Spritze mit Mannitol, ohne dass Luftblasen entstehen.

Lagern Sie es bei 37 Grad Celsius, um die Störung der Blut-Hirn-Schranke sichtbar zu machen, oder verabreichen Sie BBBD zwei Milligramm pro Kilogramm 2%Evans Blue durch eine neue IV-Stelle am Bein kontralateral zur Propofol-Infusion. Befestigen Sie das Erweiterungsset an einem Fünf-Mikron-Filter und füllen Sie es mit Minol, um Luftblasen zu entfernen. Befestigen Sie es dann am Anschlaghahn, ohne Blasen zu bilden.

Verabreichen Sie Mannitol mit 0,09 Millilitern pro Sekunde Beobachten Sie 25 Sekunden lang, bis das Mannitol an einem Punkt direkt proximal der Arteria carotis interna ein Gleichgewicht mit dem Fluss in der Halsschlagader erreicht, es sollte den Anschein haben, mit der Herzfrequenz der Ratte zu pulsieren. Stellen Sie sicher, dass das Mannitol nicht in Richtung Herz fließt, was darauf hindeutet, dass der Fluss den Blutdruck der Ratte überwunden hat und schwerwiegende Komplikationen verursachen kann. Die Störung der Blut-Hirn-Schranke auf einer Seite des Gehirns ermöglicht es dem Evan-Blau, in das gestörte Hemisphärenblau einzudringen und es zu färben, während die nicht-störende Hemisphäre unverändert bleibt.

Hier ist ein Beispiel für ein Gehirn ohne Störung der Blut-Hirn-Schranke oder BBBD gezeigt, und hier ist ein Beispiel für ein Gehirn, das nach osmotischer BBBD blau gefärbt wurde, beachten Sie, dass die rechte Hemisphäre gefärbt ist und dass etwas Blau in die linke Hemisphäre in der Nähe der medialen Längsfissur eingedrungen ist, als Ergebnis einer Vermischung des Blutflusses am Willis-Kreis. Diese Technik ebnet den Forschern den Weg, Therapien zu erforschen, die die Blut-Hirn-Schranke in einem Rattenmodell nicht überwinden. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie in der Lage sein, die verschwommene Hirnschranke zu durchbrechen, indem Sie die Halsschlagader katheternisieren und eine Manitollösung direkt in das Gehirn infundieren.