Induktion Myointimale Hyperplasie Versus Atherosklerose in Mäuse: Eine Einführung von zwei gültigen Modelle

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, zwei valide Tiermodelle vorzustellen, die über unterschiedliche Mechanismen zu einer Verengung der Aorta führen. Das erste Modell ist die Ballonkatheterisierung der Aorta, um die Entwicklung einer myointimalen Hyperplasie zu erzeugen. Zuerst wird die infrarenale Bauchschlagader freigelegt und geklemmt.

Dann wird die Aorta mit einem Querschnitt eröffnet und der Ballonkatheter eingeführt. Anschließend wird das Endothel der Aorta mit dem aufgeblähten Katheter entblößt und die Operation ist abgeschlossen. Das zweite Modell ist eine diätetische Manipulation von transgenen APOE-Null-Mäusen, um atherosklerotische Plaques zu erzeugen.

Diese Mäuse werden unter Standardbedingungen untergebracht und vier bis sechs Monate lang mit einer fettreichen westlichen Diät gefüttert. Letztendlich zeigt die histologische Analyse der chirurgisch induzierten myo intimalen Hyperplasie und des diätetischen Restriktionsmodells, dass sie zu unterschiedlichen luminalen Verengungen führen. Heute zeigen wir Ihnen zwei verschiedene Modelle, um eine luminale Verengung zu induzieren: das Mausmodell mit einem Ballonkatheter zur Induktion einer Gefäßverletzung und das Modell der arteriellen Sklerose.

Unter Verwendung transgener Mäuse in der westlichen Ernährung kann das Ballonkathetermodell dazu beitragen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Stenose zu beantworten. Das transgene homozygote obere E-Mutanten-Mausmodell wird verwendet, um die Pathophysiologie der Atherosklerose zu untersuchen. Für das Modell der intimalen Hyperplasie erhalten Sie C 57 schwarz sechs J-Mäuse, die etwa 25 Gramm wiegen.

Halten Sie sie unter normalen Bedingungen mit einer normalen Ernährung. Nachdem Sie die Maus mit 2% Fluor betäubt haben, schneiden Sie die Bauchhaare ab und geben Sie Carprofen durch subkutane Injektion zur Analgesie. Als nächstes desinfizieren Sie die Haut alternativ mit Provo Jod und 80% Ethanol in zwei Zyklen.

Überprüfen Sie nun, ob keine Reflexe vorhanden sind, indem Sie die Zehen zusammendrücken. Beginnen Sie die Operation, indem Sie die Haut und den Muskel entlang der linearen Alba trennen. Wickeln Sie dann den Darm in einen mit Kochsalzlösung angefeuchteten Handschuh, reinigen Sie dann vorsichtig das Fettgewebe und bedecken Sie die Bauchaorta.

Legen Sie nun die infrarenale Aorta bis zu ihrer Bifurkation frei. Achten Sie darauf, keine Astgefäße zu verletzen. Klemmen Sie nun die Aorta fest.

Platzieren Sie zunächst eine mikrochirurgische Klemme auf der proximalen infrarenalen Aorta, um den Blutfluss zu unterbrechen. Zweitens legen Sie eine zweite distale Klemme neben der Aortenbifurkation an. Wenn der Blutfluss unterbrochen ist, machen Sie einen kleinen Schnitt in die Aorta in der Nähe der proximalen Klemme.

Führen Sie den Katheter in Richtung der distalen Klemme der Aorta ein, um eine Endothelverletzung zu verursachen. Entblößen Sie die Aorta, indem Sie den Katheterballon vorsichtig aufblasen und den Katheter langsam in Richtung der proximalen Klemme ziehen. Wiederholen Sie dies, manövrieren Sie zweimal für insgesamt drei Aortenblasen.

Entfernen Sie nun den Katheter und verschließen Sie den Aortenschnitt mit 10 au Prolin Laufnähten. Öffnen Sie mit den Nähten vorsichtig die distale Klemme, wenn an der AOR-Autotomiestelle Blutungen auftreten. Schließen Sie die Klemme wieder, lokalisieren Sie die Blutung und stoppen Sie sie mit zusätzlichen unterbrochenen Stichen.

Wenn keine Blutung vorhanden ist, öffnen Sie langsam die proximale Klemme. Ein Aortenpuls sollte distal des Schnittes sichtbar sein. Ordnen Sie nun den Darm in C zwei an.

Anschließend verschließen Sie die Bauchdecke, beginnend mit der Muskelschicht, mit sechs OTT Prolin-Laufnähten. Verschließen Sie dann die Haut mit fünf OTT-Nähten und übertragen Sie die Maus zurück in ihren Käfig. Geben Sie in den ersten drei postoperativen Tagen Metrazol zur Schmerzkontrolle an das Trinkwasser.

Überwachen Sie das Tier während seiner Genesung, die etwa 28 Tage dauert. Für das Atherosklerose-Modell erhalten Sie vier Wochen alte A-POE-defiziente Mäuse. Halten Sie diese Mäuse vier bis sechs Monate lang unter Standardbedingungen mit einer fettreichen westlichen Ernährung.

Behalten Sie diese Diät während des gesamten Experiments bei. Sechs Stunden vor der Ernte der Aorta den Zugang zu Nahrung entziehen. Bereiten Sie dann die Maus für die Operation vor, wie im vorherigen Abschnitt beschrieben.

Beginnen Sie die Operation, indem Sie den Brustkorb öffnen. Als nächstes schneiden Sie die Spitze des Herzens ab und durchbluten sie unter sanftem Druck mit drei Millilitern 4%Paraformaldehyd durch die Aortenwurzel, um die Aorta zu fixieren. Befreien Sie dann die Aorta von der Wurzel bis zu ihrer Bifurkation.

Versuchen Sie, so viel Fettgewebe wie möglich zu entfernen. Schneiden Sie anschließend den Aortenbogen ab und lagern Sie ihn in 4%para Formaldehyd. Übertragen Sie nun das Herz und den Aortenbaum in eine Silikon-Ausleitungsschale mit PBS in der Schale.

Schneiden Sie ein Ende des Aortenbaums ab und befestigen Sie es mit feinen Stecknadeln auf der Silikonschicht. Öffnen Sie die Aorta in Längsrichtung und lassen Sie das Aortengewebe einige Minuten bei Raumtemperatur in PBS liegen. Spülen Sie dann das Tuch einmal mit 50%Ethanol aus und tauchen Sie es in ein Sudanbad.

Drei, Färbelösung für ca. 15 Minuten. Spülen Sie das Gewebe nach dem Färben einige Sekunden lang schnell mit 50% Ethanol aus, um nur den überschüssigen Sudan zu entfernen. Durch dreimaliges Überspülen wird zu viel Fleck entfernt, das Gewebe sofort mit destilliertem Wasser gespült und mit der Bildgebung fortgefahren. Für das Modell der myointimalen Hyperplasie wurden entblößte Mausaorten entnommen, Paraffin eingebettet und mit Chrom gefärbt. Die Im-Verhältnisse wurden aus den Tri-Chrom-Fleckenabschnitten durch Messung der Intima- und Mediendicke berechnet.

Mittels Computeranalyse und anschließender Berechnung des Verhältnisses wurde die maximale Plaquedicke als maximale Intimadicke im Lumen mit Hilfe eines Computer-Morphobaums gemessen. Der Prozentsatz der luminalen Auslöschung wurde als Verhältnis des neuen inneren Lumens zum alten Lumen berechnet. Die Plaquefläche wurde berechnet, indem das neue innere Lumen vom früheren Lumen subtrahiert wurde.

Die gleichen Analysen wurden an trichromgefärbten Querschnitten des Atherosklerosemodells an der Aortenklappe, dem Aortenbogen und der absteigenden Aorta nur für das Atherosklerosemodell durchgeführt. Die absteigende Aorta wurde längs geöffnet und mit Sudanrot gefärbt. Die Plaquefläche und die gesamte Aortenfläche wurden mit Hilfe eines Computers zur Analyse beider Modelle vermessen.

Andere Methoden wie die Histopathologie und die konfokale Immunfluoreszenzmikroskopie können durchgeführt werden, um Fragen wie die Luminaloblation, die Morphologie und die Zellularität zu beantworten. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.