Name: Urinausscheidende Fläche Infektion in eine kleine Tiermodell: transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 23 s
Description: Lernen Sie die transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen zur Untersuchung von Harnwegsinfektionen. Diese Methode ermöglicht geschlechtsspezifische Vergleiche der Immunantwort und Erkenntnisse für Blasenerkrankungen.

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Wir danken Dr. Matthieu Rousseau für kritische Lektüre des Manuskripts und das Labor von dendritischen Immunbiologie für ihre hilfreiche Erkenntnisse bei der Entwicklung dieses Protokoll und Projekt. Diese Arbeit wurde zum Teil unterstützt durch Mittel aus der siebten Rahmen Programm Marie-Curie-Maßnahmen der Europäischen Union (PCIG11-GA-2012-3221170 und die Immuno-Onkologie LabEx (MAI).

Maus-Experimente wurden im Einklang mit Genehmigung des Protokoll-Nummer 2012-0024 vom Comité d'Éthique de Expérimentation Animale Paris Centre et Sud (der Ethikkommission für Tierversuche), in Anwendung der Europäischen Richtlinie 2010/63 EU.
1. Vorbereitung von Kathetern
<ol><li>Bereiten Sie eine pädiatrische intravenösen Zugang Kanüle für jede Gruppe von Mäusen, angesteckt zu werden. Veräußern Sie mit Hilfe des eingebauten Federmechanismus, jede Kanüle von der Nadel, wie vom Hersteller angewiesen. Entsorgen Sie die Nadeln, erhalten nur die Kunststoff intravenöse Kanüle.</li>
	<li>Sterilisieren Sie Katheter in einer Laminar-Flow-Haube für eine Ultraviolett (UV) Zyklus, in der Regel 25-30 min.. Hinweis: Katheter können für mehrere Mäuse verwendet werden, jedoch ein neuen Katheter zwischen Versuchsgruppen, Geschlechtern oder Bakterienstämme verwendet werden soll.</li>
</ol>2. Vorbereitung von adhärent E. Coli Infektion
<ol><li>Mindestens zwei Tage vor der Infektion mit einer sterilen Inokulation Schleife, Streifen UPEC aus einem gefrorenen bakterielle bestand auf einer Agarplatte Luria Brühe (LB), Antibiotika-haltigem gegebenenfalls. Über Nacht bei 37 ° C inkubieren. Platten können bis zu eine Woche lang bei 4 ° C gelagert werden.</li>
	<li>In eine sterile 100 ml-Erlenmeyerkolben 10 ml LB, Antibiotika, gegebenenfalls mit einer einzigen Kolonie von der LB-Platte mit impfen und Inkubation bei 37 ° C über Nacht (ca. 16-18 h). Hinweis: Stehende Kulturen erlauben die Expression von Typ 1 Pili, die zur Infektion23erforderlich sind. Kulturen angebaut, schütteln werden weniger effizient Pili Ausdruck haben und daher inkonsistent Rate der Infektion.</li>
	<li>Messen Sie die optische Dichte (OD)600 der Nacht Kultur und berechnen Sie die Anzahl der Bakterien pro ml mit einer vorab festgelegten Wachstumskurve. Als ein Beispiel für UPEC-Stamm UTI89, OD600 = 0,35 ist gleichbedeutend mit 2 x 108 KBE pro ml, also eine Übernachtung Kultur mit einer OD600 = 2,4 wäre gleichbedeutend mit 13,7 x 108 KBE pro ml. empirisch bestimmen das Verhältnis zwischen der OD600 und lebensfähige Bakterien mit jeder neuen Stamm für Infektion eingesetzt.</li>
	<li>
Bestimmen Sie die Menge der Bakterien erforderlich unter Berücksichtigung der Zahl der Tiere infiziert sein und, dass jede Maus ca. 107 Koloniebildenden Einheiten (KBE) erhalten sollten in 50 µl PBS. Einbeziehen Sie die ~ 130 µl Totvolumen der Katheter und Spritze Kern und 100 µl benötigt, um das Inokulum bestimmen in die Berechnung.
	<ol>
<li>Drehen der Bakteriensuspension in eine Tischplatte Microcentrifuge 17.000 x g für 1 min und Aufschwemmen der resultierenden bakterielle Pellets 2 x 108 KBE pro ml mit PBS-Puffer. Seriell verdünnen Sie eine aliquote dieser Aussetzung und Platte auf LB-Agar, mit Antibiotika, wenn angebracht, um das genaue Inokulum für jede Infektion festzustellen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ziehen Sie das bakterielle Inokulum in eine 1 ml Spritze und befestigen Sie den Katheter am Ende der Spritze. Tippen Sie auf die Spritze um Luft zu entfernen, und drücken den Kolben um den Toten Luftraum in den Katheter zu füllen, vor Beginn der Instillation.</li>
</ol>3. Vorbereitung der Mäuse
<ol><li>Mäuse über intraperitoneale Injektion von 100 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazin zu betäuben. Zusätzliche Wärme kann zur Verfügung gestellt werden.</li>
	<li>Stellen Sie sicher, dass jede Maus voll sediert ist, durch Zusammendrücken der Straßenräuber mit mittlerem Druck. Mäuse sind voll sediert, wenn sie nicht reagieren und ca. 3-5 min benötigen, um diesen Zustand zu erreichen.</li>
	<li>Legen Sie Mäuse Rückenlage und mittlere Druck auf den Unterleib, die Blase Urin zu entleeren. Volle Blase fühlen Sie sich wie eine Erbse unter der Haut zwischen den ileac Wappen. Hinweis: Inhalative Isofluran verwendet wurde, um weibliche Mäuse15,22Katheterisieren, jedoch wurde es nicht getestet, ob männliche Mäuse durch eingeatmete Isofluran für dieses Verfahren ausreichend betäubt sind.</li>
</ol>(4) transurethrale Instillation von weiblichen Mäusen
<ol><li>Mit der nichtdominanten Hand, legen Sie den Daumen auf das Heck und einen Finger der gleichen Hand auf dem Bauch der Maus und üben Sie sanften Druck in entgegengesetzter Richtung um die Maus fest in Position zu halten.</li>
	<li>
Setzen Sie die Spitze des Katheters an der Harnröhrenmündung senkrecht auf die Maus. Schieben Sie mit sanftem Druck den Katheter in die Harnröhre bis Hub der Harnröhrenmündung entspricht und gleichzeitig senken die Spritze, so dass es parallel zur Arbeitsfläche. Der Katheter ist keine Schmierung erforderlich. Nicht drücken oder den Katheter in die Harnröhre zu erzwingen. Der Katheter sollte glatt und leicht in die Harnröhre, mit wenig bis keinen Widerstand schieben.
	<ol>
<li>Vor dem Einträufeln des Inokulums (Schritt 4.3), einmal ist der Katheter in Platz, sehr sanft ziehen die Bauchhaut in Richtung des Kopfes von der Maus mit dem Finger von der nicht-dominanten hand, die bereits auf dem Bauch der Maus (Schritt 4.1) ist. Wenn der Katheter in der Harnröhre, ist das Gewebe die Harnröhre Öffnung komponieren bewegt sich nicht, während wenn der Katheter nicht korrekt in der Vagina platziert wird, das Gewebe oben und Weg von den Katheter bewegen wird. Dieser Schnelltest sollte jede Maus erfolgen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wenn der Hub des Katheters der Harnröhrenmündung trifft, verzichten Sie langsam 50 µl des bakteriellen Inokulums. Eine langsame Instillation Rate minimiert vesikoureteralem Reflux in die Niere. Langsam entfernen des Katheters um austreten, über eine Anzahl von 5 zu vermeiden. Legen Sie die Mäuse in ihren Käfigen in Rückenlage.</li>
</ol>(5) transurethrale Instillation von männlichen Mäusen
<ol><li>Platzieren Sie zwei Daumen Pinzetten cranially und kaudal an der Maus äußeren Genitalien. Zurückziehen der Vorhaut um die Eichel vollständig offen zu legen. Sobald der Penis nach außen positioniert ist, lassen Sie die Daumen-Zange.</li>
	<li>Positionieren Sie die Zange um den abstehenden Penis senkrecht auf das Tier, halten die Orgel, sanft, aber straff zu stabilisieren. Visualisieren Sie die urethralen Meatus zu und führen Sie vorsichtig des Katheters in die kleine Öffnung an der Spitze der Orgel ein. Sanft führt des Katheters in den Penis, auf den Körper der Maus, sanfte Spannung mit der Zange aufrechtzuerhalten. Der Katheter ist keine Schmierung erforderlich. Zwingen Sie den Katheter nicht in den Penis; der Katheter sollte reibungslos in die Harnröhre, die Angabe korrekten Platzierung schieben.</li>
	<li>Sobald die Nabe des Katheters die Spitze des Penis trifft, verzichten Sie sehr langsam 50 µl des Inokulums, unter Beibehaltung der Position des Penis. Die Qualität der Instillation kann zu diesem Zeitpunkt nach einem vorgegebenen Instillation Qualitätsfaktor, wie in Abbildung 2dargestellten beachtet werden.</li>
	<li>Ziehen Sie den Katheter langsam, über eine Anzahl von 5 verhindert Auslaufen des Inokulums. Legen Sie die Mäuse in ihren Käfigen in Rückenlage. Tiere sollten beginnen sich zu 30-45 min nach Verabreichung von der Narkose erholen.</li>
</ol>6. Bestimmung der KBE in infizierten Organen
<ol><li>Zu vorgegebenen Zeitpunkten genehmigt Opfer Mäuse mit Standardarbeitsanweisungen (z.B., zervikale Dislokation oder Kohlendioxid Überdosierung). Befeuchten Sie den Bauch gründlich mit 70 % Ethanol, Kontamination von Fell zu minimieren.</li>
	<li>Machen Sie einen Einschnitt in das untere Drittel der Maus Bauch von mindestens 2 cm mit einer Schere und aseptisch entfernen Sie der Blase und jede andere gewünschte Organe, einschließlich aber nicht beschränkt auf, Nieren, Hoden, Samenbläschen oder Präputial Drüsen, in 5 ml Polypropylen-Snap Cap Röhrchen mit 1 ml sterile PBS. Halten Sie alle Proben auf Eis.</li>
	<li>Homogenisieren der Organe mit einem Handheld-Homogenisator, bis fast keine festen Gewebe bleibt, ca. 15-60 Sek. je nach Organ. Fett ist nicht gut homogenisieren und ist leicht erkennbar, wie glänzend Beige-weiß-Gewebe. Vor dem Fett oder folgenden Homogenisierung zu verwerfen. Waschen Sie den Homogenisator in Ethanol gefolgt von PBS zwischen jede experimentelle oder Orgel-Gruppe. Hinweis: In der Regel verwenden Sie handheld Homogenisatoren oder Korn Mühle Homogenisatoren. Während alle diese Systeme ähnliche Ergebnisse wie festgelegt durch direkten Vergleich der bakteriellen KBE in 24 Stunden nach der Infektion ergab haben, sollte die optimalen Bedingungen für Wirtsgewebe zu homogenisieren, unter Beibehaltung der bakteriellen Lebensfähigkeit empirisch vor bestimmt werden Dieses Protokoll durchführen routinemäßig.</li>
	<li>Führen Sie serielle Verdünnungen von homogenisierten Orgel Suspensionen. Verdünnungen auf Agarplatten LB, gegebenenfalls Antibiotika-haltigem Platte und inkubieren Sie über Nacht (ca. 15 Std.) bei 37 ° C. UPEC Stämme haben sehr schnelle Verdoppelung Zeiten und als solche sollte darauf geachtet werden, nicht zu lange Agarplatten inkubieren, weil dadurch die Fähigkeit, einzelne Kolonien zählen behindert wird.</li>
</ol>(7) durchflusszytometrischen Analyse der Blase Gewebe
<ol><li>Bereiten Sie Verdauung-Puffer mit Kollagenase 34 Einheiten/ml und DNase 100 µg/ml, mit PBS-Puffer vor. Halten Sie auf dem Eis. Bereiten Sie ein 15 ml konische Röhrchen pro Tier zu analysierenden und aliquoten 1 ml Verdauung Puffer pro Röhre.</li>
	<li>An vorgegebenen Zeitpunkten genehmigt Opfer Mäuse mit Standardarbeitsanweisungen (z. B. zervikale Dislokation oder Kohlendioxid Überdosierung). Befeuchten Sie den Bauch gründlich mit 70 % Ethanol, Kontamination von Fell zu minimieren.</li>
	<li>
Machen Sie einen Einschnitt in das untere Drittel der Maus Bauch von mindestens 2 cm mit einer Schere und entfernen Sie die gesamte Blase. Hackfleisch gut mit der Schere, die Blase in 2-3 mm2 große Stücke, in der Regel ca. 8 Stücke schneiden.
	<ol>
<li>Fügen Sie eine gehackte Blase pro Röhre, die Verdauung Puffer enthält. Schütteln Sie um Hackfleisch / Blase Gewebe in der Verdauung-Puffer zu waschen. Halten Sie auf Eis, bis alle Harnblasen seziert und gehackt sind.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inkubieren Sie Hackfleisch / Blase 60-75 Minuten bei 37 ° C, mit kräftig schütteln von hand für 5 s alle 15 Minuten. Wenn das Gewebe eine transparente glasig hat, ähnlich nassen Tissue-Papier, ist die Verdauung abgeschlossen. Verlängerte Verdauung wird von den Zellen benötigt zur Identifizierung Oberflächenproteine entfernen und sollte vermieden werden.</li>
	<li>Inaktivieren Sie die Verdauung Enzyme zu, durch Zugabe von 2-3 mL eiskaltes Flow Cytometry Puffer (PBS, enthält 2 % fetalen bovine Serum (FBS) und 0,2 mM EDTA) und mischen Sie vorsichtig. Legen Sie Rohre auf Eis.</li>
	<li>Um eine einzelne Zelle Aussetzung zu gewährleisten und alle Bindegewebe zu entfernen, durchlaufen Sie den Inhalt des Röhrchens eine 100 µm-Filter in einem 15 mL konische Röhrchen platziert. Drücken Sie vorsichtig alle übrigen Gewebe durch den Filter mit dem Ende des einen Spritzenkolbens. Waschen Sie den Filter mit einer zusätzliche 2 mL Flow Cytometry Puffer. Halten Sie die Proben auf Eis.</li>
	<li>Waschen Sie Proben durch Zentrifugation für 7 min bei 200 X g, 4 ° C. Aufzuwirbeln Sie Pellets in 100 µL Flow Cytometry Puffer mit Fc Block, verdünnt 5 µg/mL und Übertragung auf eine 96-Well Runde Bodenplatte. Fügen Sie nach 10-15 min 100 µL gewünscht Antikörper Cocktail zu jeder Probe hinzu. Inkubieren Sie Proben für 30-45 min auf Eis, vor Licht geschützt werden. Hinweis: Fc-Block ist ein Reagenz verwendet, um zu verhindern, dass die Bindung von den Fc-Teil der Antikörper gegen Zellen, die mit dem Ausdruck Fc-Rezeptoren. Es soll unspezifische Antikörperbindung zu minimieren. Bestimmung der Antikörper zu verwenden, wird die Hypothese getestet im Experiment abhängig gemacht werden und sollte mit Input aus der Literatur ausgewählt werden. In Abbildung 3um die Infiltration insgesamt Immunzelle zu messen Antikörpers Anti-CD45 arbeitete die ist ein Pan-Immune Zelle Protein.</li>
	<li>Waschen Sie Proben durch Zentrifugation für 7 min bei 200 X g, 4 ° C. Aufschwemmen Sie Zelle Pellets in 200 µL Flow Cytometry Puffer und eine 5 ml Polystyrol Röhre kurz vor dem Erwerb auf einem Durchflusszytometer weitergeben Sie Proben durch ein 40 µm Zelle Sieb.</li>
	<li>Sammeln Sie die gesamte Probe auf das Durchflusszytometer. Eine gute Verdauung ergibt 200.000-400.000 Zellen mit 8.000-10.000 CD45+ Immunzellen aus naiven Maus Blase, während infizierte Organen mehr enthält Zellen16 (Abbildung 3). Hinweis: Beispiele für durchflusszytometrischen Analyse vorbereitet können nicht zum KBE bewerten. Es empfiehlt sich die Blase in zwei Teile aufgeteilt, da keine Beweise vorliegen, um das UPEC Besiedlung nachweisen oder Immunzelle Infiltration einheitlich das Gewebe ist nicht.</li>
</ol>

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Die Autoren haben nichts preisgeben.

Transurethrale Instillation von männlichen Mäusen bietet viele neue Recherchemöglichkeiten in der Einfluss des Geschlechts auf Blase Schleimhaut Krankheit, aber auch einige Herausforderungen. Eine Einschränkung ist, dass der Instillation zunächst technisch schwierig erweisen, was zu übermäßiger Entzündungen beim Einführen des Katheters an erster Stelle. Verbesserung der Technik kann durch die Instillation von Toten Mäusen mit einer farbigen Lösung, wie Evans blauen Farbstoff erreicht werden. Bestätigen Sie, dass der Inst...

Harnwegsinfektionen (HWI) sind eine der häufigsten Infektionen in entwickelten Ländern1. Infektionsraten sind ähnlich zwischen Weibchen und Männchen unter Neugeborene und ältere2. Erwachsene Frauen vor den Wechseljahren, haben jedoch eine stark erhöhte Inzidenz von ambulant erworbenen UTI im Vergleich zu Männern2,3. Angesichts der Tatsache, dass diese Krankheit in erster Linie Frauen auswirkt, konzentriert Grundlagenforschung und klinische Forschung überwiegend UTI bei Frauen sich auf. Harnwegsinfektionen bei Männern ist jedoch eine deutliche und erforschten Gesundheitswesen Herausforderung4. In der Tat, da UTI bei Männern sind mit höheren Morbidität verbunden, diese Infektionen routinemäßig als komplizierte4,5gelten.
Wie entwickelt sich unser Verständnis von der zentralen Rolle der Sex-Verzerrungen in Physiologie und Pathologie, müssen neue Methoden dieser bisher vernachlässigten Aspekt der Krankheit zu erforschen. Geschlechtsunterschiede spielen eine wesentliche Rolle in Immunität und Infektion; die Weibchen haben höhere Inzidenz von Autoimmun-Krankheit, während Männchen anfälliger für bestimmte Infektionen wie Tuberkulose, Malaria und HIV6,7 sind. Blasenkrebs, eine weitere urologische Pathologie ist deutlich häufiger bei Männern als bei Frauen, und mehrere Studien für Androgene eine Rolle bei der Entwicklung von malignen Erkrankungen8,9,10,11 ,12. Insbesondere erfolgt ausschließlich bei weiblichen Tieren aufgrund der Unfähigkeit, wiederholt männliche Mäuse13Katheterisieren jedoch Untersuchung intravesikale Therapien für Blasenkrebs.
Die Studie von UTI Pathogenese stützt sich stark auf Nager-Modelle der Infektion (z.B., Mäuse und Ratten). Murine Modelle von Harnwegsinfektionen können beschäftigen Uropathogens ursprünglich von Infektionen beim Menschen, wie z. B. adhärent E. Coli (UPEC), Klebsiella, Enterococcus, Staphylococcusoder Proteus14isoliert. In der Regel werden Bakterien in die Blase über Katheterisierung der Harnröhre eingeführt. Nach Infektion, Blase und Nieren kann entfernt werden, um bestimmte Parameter der Infektion, wie bakterielle Besiedlung, Gewebeschäden oder Host Immunantwort15,16zu bewerten. Universell, sind jedoch nur weibliche Tiere für UTI Forschung verwendet. In der Tat haben viele Studien festgestellt, dass, aus anatomischen Gründen, Katheterisierung von männlichen Mäusen nicht möglich13,17,18,19. In jüngerer Zeit, ein chirurgisches Vorgehen zu männlichen Instillation ist beschrieben worden, in dem der Bauch geöffnet ist, die Blase wird durch sanften Druck auf die Öffnung in den Bauch nach außen verdrängt und Bakterien in die Blase20eingespritzt werden. Dieser Ansatz ermöglicht es männliche Infektion, auf Kosten der chirurgischen Intervention. So enthält eine wichtige Einschränkung dieses Ansatzes die Beeinflussung der Entzündung, das Ergebnis einer Infektion wie z. B. das Potenzial, eine entzündungshemmende Wundheilung Antwort auf die Schnitt-21zu induzieren. Da unsere Interessen Sex Bias als Reaktion auf die Krankheit zu verstehen gehören, entwickelten wir eine Methode der bakteriellen intravesikale Instillation bei männlichen Mäusen, die seit langem bestehenden nicht-chirurgische transurethrale Vorgehensweise bei weiblichen Nagern22 mehr entspricht .
Unser Modell basiert auf einer bewährten Methodik und bietet die Möglichkeit, die Host-Immunantwort auf UTI bei weiblichen und männlichen Tieren direkt zu vergleichen. Diese Methode wird Dissektion der geschlechtsspezifische Unterschiede in der Infektion zu ermöglichen und potenziell bieten molekularen und zellulären Hinweise auf die ausgeprägte Unterschiede in der Empfindlichkeit und Reaktion auf die Infektion zwischen den Geschlechtern. Darüber hinaus hat dieses Modell Wert jenseits UTI Studien, ermöglicht die Einrichtung von Modellen zur anderen Blase-assoziierten Erkrankungen, z. B. Blasenkrebs, Prostatitis, unter oder über der proaktiven Blase Syndrom und interstitielle Zystitis zu untersuchen.

<table><tbody><tr><td>BD Insyte Autoguard Shielded IV Katheter 24 G, 0,7 mm Außendurchmesser, 14 mM lang</td><td>BD Medical</td><td>381811 oder 381411*</td><td>* Katalognummer ist länderabhängig</td></tr><tr><td>Impföse</td><td>Greiner Bio-One</td><td>731171</td><td></td></tr><tr><td>LB Miller Bouillon</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>LB Miller Agar</td><td>Difco</td><td>244520</td><td></td></tr><tr><td>Küvetten</td><td>Bio-rad</td><td>223-9955</td><td></td></tr><tr><td>Spritzen</td><td>B Braun</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>Daumenzange (Adson)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Röhrchen, Polypropylen</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Ruptor Einwegsonden</td><td>Qiagen</td><td>990890</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Flip Cap Röhrchen</td><td>Thermo Scientific</td><td>362694</td><td></td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Invitrogen</td><td>18047019</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5401119001</td><td>sollten aliquotiert und bei -20 & deg gelagert werden; C zur Vermeidung von wiederholtem Einfrieren-Auftauen</td></tr><tr><td>100 & Mikro; M MACS SmartStrainer&nbsp;</td><td>Miltenyi</td><td>130-098-463</td><td>kompatibel mit 15 ml Röhrchen, bevorzugt</td></tr><tr><td>100 & Mikro; M-Zell-Siebe&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352360</td><td>kompatibel mit 50 ml Röhrchen, falls MACS Smart Siebe nicht verfügbar sind</td></tr><tr><td>96 Well Platte</td><td>Falcon</td><td>353077</td><td></td></tr><tr><td>Fc Block</td><td>BD Pharmingen</td><td>553142</td><td>Anti-CD16/CD32</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD45 Antikörper</td><td>BD Biosciences</td><td>561487</td><td>viele verschiedene fluoreszierende Konjugationsoptionen sind verfügbar</td></tr><tr><td>5 ml Röhrchen Polystyrol mit Filterkappe</td><td>Falcon</td><td></td><td></td>352235</tr><tr><td>Insulinspritze</td><td>Terumo</td><td>BS05M2913</td><td></td></tr><tr><td>Handhomogenisator</td><td>Qiagen</td><td>9001272</td><td>TissueRuptor</td></tr><tr><td>Durchflusszytometer</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>Fortessa SORP&nbsp;</td></tr><tr><td>Durchflusszytometrie-Software</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>Diva</td></tr></tbody></table>

urinausscheidende fläche infektion in eine kleine tiermodell: transurethrale katheterisierung von männlichen und weiblichen mäusen

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Harnwegsinfektionen (HWI) sind sehr häufig weltweit entstehen erhebliche Morbidität und krankenhausbedingten Ausgaben. Kleiner Tiermodelle, die Krankheit Einrichtung und Progression widerspiegeln, erlauben Dissektion der Wirt-Pathogen Interaktionen und Erzeugung von Immunität gegen Infektionen. Bei Mäusen intravesikale Instillation von adhärent E. Coli, das auslösende Agens in mehr als 85 % der Gemeinschaft erworben UTI, rekapituliert viele von den Stadien der Infektion beim Menschen beobachtet. Bis vor kurzem jedoch könnte UTI nur bei weiblichen Tieren modelliert werden. Diese Einschränkung hat die Studie von Sex-bezogene Unterschiede in UTI sowie andere Blase Krankheiten, wie Krebs verhindert. Hier beschreiben wir eine Methode, um männliche Mäuse, der direkte Vergleich zwischen weiblicher und männlicher Tiere erlaubt zu vermitteln und bieten ein detailliertes Protokoll um Blase Gewebe durch Durchflusszytometrie als ein Mittel, um besser zu verstehen, Host Antworten auf Infektion zu beurteilen. Zusammen, helfen diese Ansätze bei der Identifizierung von Host Faktoren, die zum Sex Neigungen in UTI und anderen Blase-assoziierten Erkrankungen beobachtet beitragen.

Bei der Entwicklung dieses Protokolls Kohorten von weiblichen und männlichen C57Bl/6 Mäusen im Alter 6 bis 8 Wochen eingeflößt und bakterielle Belastung im Harnblasen zu Zeitpunkten von 1 Stunde bis 30 Tagen ausgewertet wurden. Die Ergebnisse aus diesen Studien sind an anderer Stelle detailliert (Zychlinsky Scharff Et Al., anhängig). Hier präsentieren wir Ihnen repräsentative Daten von 24-Stunden-Infektionen. Vor allem entsprach die bakterielle Belastung zwischen männlichen und w...

Das etablierte Modell der transurethrale Katheterisierung von Mäusen ermöglicht die Untersuchung von Erkrankungen der Blase, einschließlich urinausscheidende Fläche Infektion, aber kann nur bei Frauen durchgeführt werden. Ein neues Modell der männlichen transurethrale Instillation, das hier vorgestellte wird Forschung in einem Gebiet, geprägt von starken klinischen und epidemiologischen Unterschiede zwischen den Geschlechtern zu ermöglichen.

Urinausscheidende Fläche Infektion in eine kleine Tiermodell: transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Das übergeordnete Ziel dieses experimentellen Ansatzes ist es, die Immunantwort auf Harnwegsinfektionen zu untersuchen und einen direkten Vergleich zwischen männlichen und weiblichen Tieren zu verhindern. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen der Schleimhautimmunologie zu beantworten, die sich darauf beziehen, wie Männer und Frauen auf Harnwegsinfektionen reagieren. Der Hauptvorteil besteht darin, dass die Infektion über die natürliche Wurzel etabliert wird.Die Idee zu dieser Methode hatten wir erst, nachdem wir festgestellt hatten, wie oft behauptet wird, dass das Anlegen der Blase bei den männlichen Mäusen unmöglich ist. Obwohl diese Methode Einblicke in Harnwegsinfektionen gibt, kann sie auch auf andere Krankheitsstudien wie Blasenkrebs angewendet werden. Bereiten Sie zunächst für jede Gruppe von Mäusen, die infiziert werden sollen, eine Kanüle für den intravenösen Zugang bei Kindern vor.Entfernen Sie mit dem eingebauten Federmechanismus jede Kanüle von ihrer Nadel gemäß den Anweisungen des Herstellers. Entsorgen Sie die Nadeln und bewahren Sie nur die intravenöse Kanüle aus Kunststoff auf. Sterilisieren Sie die Katheter in einer Laminar-Flow-Haube für einen UV-Zykl

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video demonstriert Methoden zur transurethral induzieren Maus Harnwegsinfektionen und zu quantifizieren, das Ausmaß der daraus resultierenden Infektionen.

Transurethrale Induktion von Maus Harnwegsinfekt

Quelle: Luyts, N., et al. Longitudinale Nachbeobachtung von Harnwegsinfektionen und deren Behandlung bei Mäusen mittels Biolumineszenzbildgebung. J. Vis. Exp. (2021).Dieses Video demonstriert die Induktion und Verfolgung einer Harnwegsinfektion in einem Mausmodell unter Verwendung biolumineszenter E. coli, die in die Blase injiziert wird, wo bakterielle Adhäsion, Invasion und intrazelluläre Replikation stattfinden. Das vom biolumineszente Operon ausgesendetes Licht dient als Echtzeit-Marker für...

Visualisierung der Harnwegsinfektion in einem Mausmodell mittels Biolumineszenz

Quelle: Conover, M. S. et al., J. Etablierung und Charakterisierung von Harnwegsinfektionen und CAUTI in einem Mausmodell. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Montage und Implantation eines transurethralen Katheter in einer weiblichen Maus, gefolgt von einer bakteriellen Impfung zur Etablierung katheterassoziierter Harnwegsinfektion und zur Untersuchung biofilmvermittelter Wirts-Pathogen-Interaktionen.

Katheterassoziierte Harnwegsinfektion in einem Mausmodell

In diesem Video beschreiben wir die Technik zur intravesikalen Verabreichung von uropathogenen Bakterien, um ein Harnwegsinfektionsmodell bei Mäusen zu erstellen. Dieses Modell kann verwendet werden, um die Ausbreitung uropathogener bakterieller Infektionen im Harnsystem und die Mechanismen zu verstehen, die die Anfälligkeit für Harnwegsinfektionen bestimmen.

Generierung eines Harnwegsinfektionsmodells: Eine Technik zur Verabreichung uropathogener Bakterien in der Maus zur Entwicklung eines Harnwegsinfektionsmodells

Dieses Video zeigt die Etablierung einer uropathogenen Escherichia coli-Infektion in einer weiblichen Mausblase durch transurethrale Katheterinstillation. Die injizierten Bakterien etablieren erfolgreich eine Harnwegsinfektion in der Blase und bieten eine wertvolle Plattform für die Untersuchung von nosokomialen Erkrankungen im Zusammenhang mit den Harnwegen.

Transurethrale Katheterisierung und bakterielle Inokulation zur Erstellung eines Harnwegsinfektionsmodells bei männlichen Mäusen

Etablierung eines Modells für Harnwegsinfektionen bei weiblichen Mäusen

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Beurteilung der Anti-Tumor-Aktivität des neutrophilenaktivierenden Proteins Helicobacter pylori (HP-NAP) in einem Maus-Blasenkrebsmodell. HP-NAP interagiert mit Tumorzell-Neutrophilen, um proinflammatorische Zytokine zu produzieren, wodurch die Differenzierung naiver T-Zellen in Typ-1-T-Helfer (Th1) und zytotoxische (Tc1) T-Zell-Phänotypen vom Typ 1 induziert wird. Die Th1- und Tc1-Zellen sezernieren Interferon-gamma, hemmen die Tumorangiogenese und...

Bewertung der Anti-Tumor-Wirksamkeit eines bakteriellen immunmodulatorischen Proteins in einem Mausmodell

Die Fähigkeit, Harnwegsinfektionen (HWI) zu modellieren, ist entscheidend, um die bakterielle Pathogenese verstehen und die Entwicklung neuartiger Therapeutika vorantreiben zu können. Das Ziel dieser Arbeit ist es, Mausmodelle für experimentelle Harnwegsinfektionen und katheterassoziierte Harnwegsinfektionen zu demonstrieren, die die beim Menschen beobachteten Ergebnisse rekapitulieren und vorhersagen.

Aufbau und Charakterisierung von UTI und CAUTI in einem Mausmodell

Transurethrale Instillation ist eine anspruchsvolle Verfahren und nicht gut in der Literatur beschrieben. Dieses Manuskript soll eine Technik für transurethrale einführen eines Katheters für intravesikale Lieferung von Flüssigkeiten mit Wirkstoffen in der urinausscheidenden Blase und/oder Prostata bei erwachsenen männlichen Mäusen zu beschreiben.

Transurethrale Instillation Verfahren bei erwachsenen männlichen Maus

Ein Mausmodell der uropathogenen transurethralen E. coli (UPEC) -Inokulation zur Etablierung latenter intrazellulärer Blasenreservoirs und einer anschließenden Blasenexposition gegenüber G. vaginalis zur Induktion einer rezidivierenden UPEC-Harnwegsinfektion ist nachgewiesen. Ebenfalls demonstriert werden die Aufzählung von Bakterien, die Urinzytologie und die In-situ-Blasenfixierung und -verarbeitung für die Rasterelektronenmikroskopie.

Rezidivierende Escherichia coli Harnwegsinfektion, ausgelöst durch Gardnerella vaginalis Blasenexposition bei Mäusen

Dieses Manuskript beschreibt die intravesikale Verabreichung  von uropathogenen Bakterien mit einem Lux-Operon zur Induktion einer Harnwegsinfektion bei Mäusen und die anschließende longitudinale In-vivo-Analyse der Bakterienbelastung mittels Biolumineszenzbildgebung.

Longitudinale Nachsorge von Harnwegsinfektionen und deren Behandlung bei Mäusen mittels Biolumineszenz-Bildgebung

Lernen Sie die transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen zur Untersuchung von Harnwegsinfektionen. Diese Methode ermöglicht geschlechtsspezifische Vergleiche der Immunantwort und Erkenntnisse für Blasenerkrankungen.

Urinausscheidende Fläche Infektion in eine kleine Tiermodell: transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen (Video) | JoVE Journal

Urinausscheidende Fläche Infektion in eine kleine Tiermodell: transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen

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