Neuartige Objekterkennung und Objektposition Verhaltens Tests bei Mäusen mit kleinem Budget

Hier bieten wir ein Protokoll beinhaltet umfassende Anweisungen für den wirtschaftlichen Aufbau des murinen Objektposition und neuartige Objekt testen Anerkennung Verhaltens, einschließlich der Planung, Kosten und Bau der erforderlichen Ausrüstung sowie Ausführung des Verhaltens testen, Datenerfassung und Analyse.

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen zur Speicherregulierung zu beantworten. Zum Beispiel bestimmen wir die Rolle bestimmter Proteine im Gedächtnis, indem wir transgene Knockout-Mäuse in diesen Aufgaben testen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass es eine schnelle und kostengünstige Möglichkeit ist, Speichertests in jedem Labor durchzuführen.

Die Demonstration der Arena-Konstruktion ist entscheidend, da das Lösungsmittelschweißen nur dann zu starken Ergebnissen führt, wenn es mit Vorsicht durchgeführt wird. Beginnen Sie mit dem Erwerb von fünf Blättern Acryl, Acrylzement und einem 16-Spur-Hypo-Applikator. Entfernen Sie die Schutzpapierbeschichtung von den Acrylplatten.

Dann trocknen Sie alle Materialien, um zu bestätigen, dass die Größen korrekt sind. Als nächstes montieren und beladen Sie die Spritze mit Acrylzement. Richten Sie den langen Rand einer Außenwand mit dem oberen Rand der Basis aus und stellen Sie sicher, dass sie mit einer Kombination oder einem Maschinistenquadrat senkrecht zueinander stehen.

Dann verwenden Sie die Spritze, um eine kleine und stetige Perle aus Zement direkt auf die Ecke der beiden Teile zu tragen, die verbunden werden. Halten Sie die beiden Stücke für fünf Minuten an Ort und Stelle, bis sie zunächst festgelegt sind. Wiederholen Sie die gleichen Schritte, um die andere Außenwand an der Basis zu befestigen.

Dann befestigen Sie zwei Innenwände, eine nach der anderen, die Basis mit Acrylzement. Schließlich verwenden Sie die Spritze, um eine kleine und stetige Perle aus Zement direkt auf die Ecke aufzutragen, die jetzt durch die Außenwand und die Innenwand gebildet wird. Beginnen Sie die Gewöhnungssitzung, indem Sie Mäuse in Vierergruppen einteilen und sie in einzelnen sauberen Haltekäfigen unterbringen.

Als nächstes bringen Sie eine Gruppe von Mäusen in den Testraum und lassen Sie sie für mindestens 30 Minuten zu akklimatisieren. Beginnen Sie nach der Akklimatisierung mit der Aufnahme des Videos. Platzieren Sie jede Maus in der Arena mit Blick auf die Wände der Freisetzungsecke, und lassen Sie die Mäuse die Arenen für sechs Minuten frei erkunden.

Beenden Sie dann die Aufnahme des Videos, und kehren Sie die Mäuse während des Inter-Trial-Intervalls in ihre sauberen Haltekäfige zurück. Reinigen Sie alle Arenen mit tierisch empfohlenen Reinigungsmethoden, wie z. B. Wischen mit 70% Ethanol, um olfaktorische Hinweise zu minimieren. Schließlich, nach Abschluss von insgesamt drei Gewöhnungssitzungen, bringen Sie alle Mäuse in ihre heimischen Käfige zurück.

Bringen Sie nach 24 Stunden dieselbe Mäusegruppe in den Testraum und lassen Sie sie sich mindestens 30 Minuten lang im Testraum gewöhnen, wie vor den Gewöhnungssitzungen am Vortag. Führen Sie die Trainingsprüfung mit zwei Objekten durch, die in der Arena platziert sind. Befestigen Sie Objekte mit doppelseitigem Klebeband sechs mal sechs Zentimeter von zwei nicht freisetzenden Ecken entfernt, so dass sie in der Arena ausgeglichen werden.

Erlauben Sie Mäusen, die Arena und Objekte 10 Minuten lang frei zu untersuchen. Beenden Sie dann die Videoaufzeichnung. Legen Sie die Mäuse 20 Minuten lang wieder in ihre sauberen Haltekäfige und reinigen Sie die Bereiche mit Ethanol.

Um die Objektpositionsaufgabe OLT auszuführen, verschieben Sie eines der in der Trainingstestverwendeten objekte in eine neue Nicht-Release-Ecke, und befestigen Sie das Objekt sechs Zentimeter von jeder Wand dieser Ecke mit doppelseitigem Klebeband. Wiederholen Sie die gleiche Videoaufzeichnung der Mäuse in der Gegend für 10 Minuten, wie zuvor beschrieben. Um schließlich die neue Objekterkennungsaufgabe NORT auszuführen, ersetzen Sie das Objekt, das während des OLT nicht verschoben wurde, durch ein neues Objekt, und befestigen Sie das neue Objekt sechs Zentimeter von den beiden Wänden der Ecke mit doppelseitigem Klebeband.

Wiederholen Sie die gleiche Videoaufzeichnung der Mäuse in der Gegend für 10 Minuten, wie zuvor beschrieben. Während des OLT wird der Speicher für die Objektposition von einer Gruppe von Mäusen reflektiert, die im Durchschnitt deutlich mehr Zeit mit einem Objekt verbringen, nachdem es verschoben wurde. Dies kann auch als eine Erhöhung des Diskriminierungsindex dargestellt werden.

Im NORT wird das Gedächtnis für die Objektposition durch eine Gruppe von Mäusen widergespiegelt, die im Durchschnitt deutlich mehr als 50 % der Untersuchungszeit mit dem neuen Objekt verbringen oder einen Diskriminierungsindex zeigen, der deutlich größer als Null ist. Die Auswahl von Objekten, für die Mäuse keine inhärente Präferenz haben, ist der Schlüssel. In einem Pilotversuch mit einer Stichprobengröße von vier zeigten Mäuse beispielsweise einen Trend, weniger als 50 % der Untersuchungszeit mit Objekt A zu verbringen, wenn sie mit Objekt B gepaart wurden. Wenn Objekt A dann als romantes Objekt in einem NORT verwendet wurde, mit einer größeren Stichprobengröße von 16, verbrachten Mäuse deutlich weniger als 50 % der Untersuchungszeit mit Objekt A. Diese Daten deuten auf eine inhärente Abneigung gegen Objekt A hin. Während dieses Verfahrens , ist es wichtig, daran zu denken, alle Objekte und Arenen zwischen der Verwendung gründlich zu reinigen.

Bei dieser Methode kann die Objektuntersuchung manuell von Forschern oder mit kommerzieller Software bewertet werden. Software hat höhere Vorabkosten, kann aber nach der Kalibrierung langfristig Zeit und finanzielle Ressourcen sparen.