/
/
Bouw van CRISPR Plasmids en detectie van knock-out efficiëntie in zoogdiercellen door middel van een Dual Luciferase Reporter System
Zum Anzeigen dieser Inhalte ist ein JoVE-Abonnement erforderlich. Melden Sie sich an oder starten Sie Ihre kostenlose Testversion.
Kapitel
- 00:05Introduction
- 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
- 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
- 02:42Dual-luciferase Detection
- 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
- 05:20Conclusion
Hier presenteren we een protocol dat een gestroomlijnde methode beschrijft voor het efficiënt genereren van plasmiden die zowel het CRISPR-enzym als het bijbehorende single guide RNA (sgRNAs) uitdrukken. Co-transfectie van zoogdiercellen met deze sgRNA / CRISPR vector en een dubbele luciferase reporter vector die dubbelstreng breuk reparatie onderzoekt maakt evaluatie van knock-out efficiëntie.
