Name: OrganIschemia-Reperfusion Verletzung durch Simulation hämodynamischer Veränderungen im Lebertransplantationsmodell der Ratte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie ein Rattenmodell zur Simulation hämodynamischer Veränderungen während der anhepatischen Phase aufbauen. Diese Methode ermöglicht grundlegende Forschung zur Ischämie-Reperfusions-Verletzung nach Lebertransplantation.

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Wir möchten die nützlichen Vorschläge von Dr. Wen-tao Li und Dr. Ji-hua Wu vom Second Affiliated Hospital der Guangxi Medical University würdigen. Die Autoren danken unseren Teamkollegen für nützliche Kommentare und Diskussionen. Die Autoren bedanken sich auch bei den anonymen Rezensenten und Redakteuren von JoVE für ihre Kommentare. Ein besonderer Dank gilt den Eltern von Dr. Yuan für ihre kontinuierliche Unterstützung und Ermutigung. Die Arbeit wurde von der Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248) unterstützt.

Die Tierethikkommission genehmigte das Experiment der Guangxi Medical University (No20190920). Alle Tiere wurden vom Animal Experiment Center der Guangxi Medical University versorgt. Wir verwendeten SPF Männchen Sprague Dawley Ratten (200-250 g, 10-12 Wochen), gehalten unter der Raumtemperatur von 25 ± 2°C und Feuchtigkeit von 50 ± 10%. Die Fütterung wurde 24 Stunden vor dem Betrieb gestoppt; wasserversorgt war.
HINWEIS: Ein Bediener kann alle Operationen ohne Mikrochirurgie oder chirurgisches Mikroskop durchführen.
1. Betrieb
<ol><li>Nach dem Wiegen die Ratten mit Isofluran ansien (5%) mit einer Tieranästhesiemaschine.</li>
	<li>Nach 1-2 Minuten die Zehen der Ratte vorsichtig mit einer Pinzette einklemmen. Wenn die Ratte nach dem Kneifen nicht reagiert, ist sie in einen Zustand der Anästhesie eingetreten. Verwenden Sie Tierarzt Salbe auf den Augen, um Trockenheit zu verhindern. Verwenden Sie Tierheizungslampen, um die Körpertemperatur der Ratten bei 37-38 °C zu halten.</li>
	<li>Nach der Abdominaldesinfektion (Povidon-Jodlösung) die Ratte auf dem Tierseziertisch fixieren. Machen Sie einen mittleren Schnitt von 3 cm unter dem xiphoiden Prozess mit Zangen und Schere.</li>
	<li>Öffnen Sie die Bauchhöhle, setzen Sie die Leber mit einem Retraktor aus und mobilisieren Sie das hepatogastrische Band. Verwenden Sie Wattestäbchen, um den mittleren Lappen der Leber sanft umzudrehen und drehen Sie ihn nach oben, um die Porta hepatis freizulegen. Identifizieren Sie CBD, PV und HA.</li>
	<li>Schieben Sie den Dünndarm mit Wattestäbchen in Richtung der linken unteren Bauchhöhle, bedecken Sie ihn mit nasser Gaze und bewegen Sie die intrahepatische Vena cava in die rechte Nierenvene.</li>
	<li>Isolieren Sie die Portalvene, die Leberarterie und die untere Vena cava oberhalb der rechten Nierenvene mit einer Intraokularlinse und Zangen, die mit 3-0 Seidenfaden markiert sind, jeweils mit einem Schlupfknoten.</li>
	<li>Schneiden Sie die linke und rechte untere Extremität san und belichten Sie die Oberschenkelvene mit ophthalmologischen Zangen. Injizieren Sie langsam niedermolekulares Heparin 625 I.E./kg durch die Femoralvene, um den ganzen Körper zu heparinisieren.</li>
	<li>Ligate die Portalvene, Leberarterie, und unterlegene Vena Cava über der rechten Nierenvene mit Nr. 3-0 Nähte, dauere 45 Minuten (Abbildung 1). Ersetzen Sie den Dünndarm in der Bauchhöhle und bedecken Sie ihn mit Gaze. Reduzieren Sie die Inhalationsanästhesie während dieser Perioden.</li>
	<li>Nach 45 Minuten, lassen Sie die Portalvene, leberarteriende arterien, und die unterlegene Vena cava über der rechten Nierenvene.</li>
	<li>Den Muskel und die Haut schichtenund befolgen und die inhalative Anästhesie beenden. Stellen Sie postoperative Analgesie mit subkutanem Morphin von 5 mg/kg alle 4 Stunden zur Verfügung.</li>
	<li>Beobachten Sie die Ratte, bis sie wach ist, und füttern Sie sie unter einer Temperatur von 25 ± 2 °C und einer Luftfeuchtigkeit von 50 ± 10 %. Tierheizungslampen sind notwendig.</li>
</ol>

<ol><li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation%3A+Cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li>
<li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li>
<li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury%3A+From+bench-to-bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li>
<li>Motiño, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li>
<li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia%2Freperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li>
<li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center%3B+2002-2019%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Iranian+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li>
<li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagulation+and+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li>
<li>Czigány, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+a+review%2C+recommendation%2C+and+publication+guide%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li>
<li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li>
<li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li>
<li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li>
<li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933(2018).</li>
<li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662(2015).</li>
<li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li>
<li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li>
<li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li>
<li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung%3Aan+experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li>
<li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heavy+water+%28D2O%29+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+%28IPRL%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818(2019).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia%2Freperfusion%3A+from+mouse+to+human%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li>
<li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Oncology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li>
</ol>

Die Autoren dieses Manuskripts haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

OLT bei Ratten ist ein ideales Modell für die Untersuchung der Organkonservierung bei Lebertransplantation, IRI, Transplantationsabstoßung, Immuntoleranz, Transplantationspathologie und Pharmakologie, Homotransplantation und Xenotransplantation. Derzeit ist es weit verbreitet in der experimentellen Forschung der Lebertransplantation verwendet.
Während Pilotstudien verabreichten wir zunächst pentobarbitales Natriumintraperitonealanästhesie und fanden heraus, dass dies zu einer hohen postoperati...

Ischämie-Reperfusionsverletzung (IRI) ist eine häufige Komplikation nach Lebertransplantation. Hepatische IRI ist ein pathologischer Prozess mit Ischämie-vermittelten Zellschäden und abnormale Verschlechterung der Leberreperfusion. Leber-IRI und die lokale angeborene Immunantwort können in heiße und kalte IRI unterteilt werden, je nach Unterschieden in der klinischen Umgebung1. Hot IRI wird durch Stammzellverletzungen induziert, in der Regel als Folge von Lebertransplantation, Schock und Trauma2. Cold IRI ist eine Komplikation der Lebertransplantation, die durch Endothelzellen und periphere Zirkulation verursacht wird3. Klinische Berichte haben gezeigt, dass Leber IRI mit 10% der frühen Organversagen verbunden ist und kann die Inzidenz von akuter und chronischer Abstoßung erhöhen4,5. Darüber hinaus kann Leber IRI auch mehrere Organdysfunktionssyndrome oder systemische Entzündliche Reaktionssyndrom induzieren, mit hoher Mortalität6. Patienten mit extrahepatischer Organbeteiligung neigen dazu, länger im Krankenhaus zu bleiben, mehr Geld auszugeben und eine schlechtere Prognose7zu haben. Die Entwicklung von Komplikationen ist eng mit der Länge der anhepatischen Phase der Lebertransplantation8verbunden.
Orthotopische Lebertransplantation (OLT) bei Ratten wurde erstmals 1973 vom amerikanischen Professor Lee berichtet. Die experimentelle Operation simulierte die Schritte der klinischen Lebertransplantation und die Anastomose der Blutgefäße und den gemeinsamen Gallengang (CBD) mit der Nahtmethode. Das Verfahren ist schwierig und zeitaufwändig mit einer geringen Erfolgsrate9. 1979 verbesserten Kamada et al. olT bei Ratten deutlich, indem sie kreativ die "Zwei-Manschetten-Methode" für anastomose der Portalvene nutzten, um die anhepatische Phase innerhalb von 26 Minuten10zu kontrollieren. Im selben Jahr schlug Zimmermann die "Single Biliary Stent-Methode" vor. Auf der Grundlage von Lees Arbeit verwendete Zimmermann Polyethylenrohre, um das CBD des Spenders und Empfängers direkt zu anastomose, vereinfachte die Rekonstruktion von CBD und bewahrte die Funktion des Schließmuskels, und diese Methode wurde zum Standard für die Gallenrekonstruktion der OLT-Modelle11. 1980 schlugen Miyata et al. die "Drei-Manschetten-Methode" vor, bei der die Portalvene (PV), die suprahepatische Vena cava (SVC) und die intrahepatische Vena cava (IVC) durch die Manschettenmethode anastomosed wurden. Es besteht jedoch die Gefahr einer Verzerrung der Kanüle mit dieser Methode, die zur Obstruktion eines minderwertigen Vena-Cava-Refluxs12führen kann. 1983 wurde die "Zwei-Manschetten-Methode" mit der Manschettenmethode für die Anastomose der PV und IVC vorgeschlagen, aber die Nahtmethode für den SVC13übernommen. Diese Methode wurde von Wissenschaftlern weltweit angenommen, um OLT-Modelle zu etablieren. Seitdem wurden die Anastomoseschritte der Manschette verbessert, um die anhepatische Phase zu verkürzen und die Überlebensrate der Ratten14zu verbessern. In ähnlicher Weise werden verbesserte Methoden in der klinischen Praxis verwendet, um die anhepatische Phase15zu verkürzen. Die Grundlagenforschung zu IRI nach einer Lebertransplantation hat jedoch gezeigt, dass die Überlebensrate umgekehrt mit dem Grad der Verletzung von extrahepatischen Organen zusammenhängt. Daher ist weitere Forschung erforderlich, und ein einfaches und reproduzierbares Tiermodell ist erforderlich, um IRI nach einer Lebertransplantation zu simulieren.
Basierend auf der Definition der anhepatischen Phase simulierten wir die hämodynamischen Veränderungen in der Lebertransplantation, die zu IRI von extrahepatischen Organen bei Ratten führten. Hierin bieten wir eine detaillierte Beschreibung, wie man ein Tiermodell der anhepatischen Phase (Leberischämie) bei Ratten baut, um die Grundlagenforschung zu IRI nach einer Lebertransplantation zu erleichtern.

<table><tbody><tr><td>4%ige Paraformaldehyd-Lösung</td><td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td><td>P804536</td><td></td></tr><tr><td>Lufttrockenschrank</td><td>Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.</td><td>BPG</td><td></td></tr><tr><td>Alanin-Aminotransferase (ALT)Kit</td><td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td><td>E-BC-K235-S</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniak</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd</td><td>10002118</td><td></td></tr><tr><td>Amylase Kit</td><td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td><td>E-BC-K005-M</td><td></td></tr><tr><td>wasserfreies Ethanol</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd</td><td>100092183</td><td></td></tr><tr><td>Tier Anästhesiegerät</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>R640</td><td></td></tr><tr><td>Aspartat-Aminotransferase (AST) Kit</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03040</td><td></td></tr><tr><td>automatischer biochemischer Analysator.</td><td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td><td>2400</td><td></td></tr><tr><td>Biosysteme (bei Bedarf)</td><td>Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.</td><td>BL-420F</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>BY-600A</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd</td><td>10212432C</td><td></td></tr><tr><td>Kreatinin Kit</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03076</td><td></td></tr><tr><td>Entwässerungsmaschine</td><td>Ungarn 3DHISTECH Co., Ltd</td><td>Donatello Serie 2</td><td></td></tr><tr><td>Einbettmaschine</td><td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td><td>KH-BL1</td><td></td></tr><tr><td>Tiefkühlmaschine</td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-L5</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin-Eosin-Farbstofflösung</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1005</td><td></td></tr><tr><td>hocheffizientes Paraffinwachs</td><td>Shanghai huayong Paraffinwachs Co., Ltd</td><td>Q / YSQN40-91</td><td></td></tr><tr><td>Salzsäure</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>10011018</td><td></td></tr><tr><td>Intraokularlinsenzange (IOL)</td><td>Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>JTZRN</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>Mikroschere (falls erforderlich)</td> <td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>WA1010</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>J32010</td><td></td></tr><tr><td>neutrales Kaugummi</td><td>Shanghai Huashen Healing Equipment Co., Ltd.</td><td>&ndash;</td><td></td></tr><tr><td>normales optisches Mikroskop</td><td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td><td>Nikon Eclipse CI</td><td></td></tr><tr><td>ophthalmische Pinzette</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>J3CO30</td><td>gerade</td></tr><tr><td>ophthalmische Pinzette</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>JD1060</td><td>Biegung</td></tr><tr><td>ophthalmische Schere</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>J1E0</td><td></td></tr><tr><td>pathologischer Slicer</td><td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td><td>RM2016</td><td></td></tr><tr><td>Pipetten</td><td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td><td></td><td></td>7010101008</tr><tr><td>Retraktoren</td><td>Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd.</td><td>JNT-KXQ</td><td></td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Ungarn 3DHISTECH Co., Ltd</td><td>Pannoramic 250</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

organischemia-reperfusion verletzung durch simulation hämodynamischer veränderungen im lebertransplantationsmodell der ratte

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopische Lebertransplantation (OLT) bei Ratten ist ein bewährtes Tiermodell, das für präoperative, intraoperative und postoperative Studien verwendet wird, einschließlich Ischämie-Reperfusionsverletzungen (IRI) von extrahepatischen Organen. Dieses Modell erfordert zahlreiche Experimente und Geräte. Die Dauer der anhepatischen Phase hängt eng mit der Zeit zusammen, iri nach der Transplantation zu entwickeln. In diesem Experiment verwendeten wir hämodynamische Veränderungen, um extrahepatische Organschäden bei Ratten zu induzieren und die maximale Toleranzzeit zu bestimmen. Die Zeit bis zur schwersten Organverletzung variierte für verschiedene Organe. Diese Methode kann leicht repliziert werden und kann auch verwendet werden, um IRI der extrahepatischen Organe nach lebertransplantation zu studieren.

Rattentoleranz gegenüber Leber-Ischämie In diesem Tiermodell sind die Stellen, an denen Blutgefäße während des Betriebs ligiert wurden, in Abbildung 1dargestellt. Die Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in 5 Gruppen für Ischämie für 15 Minuten (I15-Gruppe), 30 Minuten (I30-Gruppe), 45 Minuten (I45-Gruppe), 60 Minuten (I60) und Scheingruppe mit 10 Ratten in jeder Gruppe eingeteilt. Die Überlebensrate jeder Gruppe wurde 14 Tage nach der Operation beobachtet. Alle Ratten ü...

Dieses Papier enthält eine detaillierte Beschreibung, wie man ein Tiermodell der anhepatischen Phase (Leberischämie) bei Ratten baut, um die Grundlagenforschung zur Ischämie-Reperfusionsverletzung nach einer Lebertransplantation zu erleichtern.

OrganIschemia-Reperfusion Verletzung durch Simulation hämodynamischer Veränderungen im Lebertransplantationsmodell der Ratte

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Organisch-Ischämie-Reperfusionsverletzung durch Simulation hämodynamischer Veränderungen im Lebertransplantationsmodell der Ratte. Ischämie-Reperfusionsverletzungen sind eine häufige Anwendung nach Lebertransplantation. Patienten mit extrahepatischer Organbeteiligung neigen dazu, länger im Krankenhaus zu bleiben, mehr auszugeben und eine schlechtere Prognose zu haben.Die Entwicklung der Komplikation hängt eng mit der Länge der anhepatischen Phase der Lebertransplantation zusammen. Die Grundlagenforschung zur Ischämie-Reperfusionsverletzung nach lebertransplantation hat jedoch gezeigt, dass die Überlebensrate nach Lebertransplantation umgekehrt mit dem Grad der Verletzung extrahaptischer Organe zusammenhängt. Basierend auf der Definition der anhaptischen Phase simulierten wir die hämodynamische Veränderung der Lebertransplantation, die zu einer Ischämie-Reperfusionsverletzung von extrahaptischen Organen führte.Dieses Papiers soll eine detaillierte Beschreibung des Aufbaus eines Tiermodells der anhaptischen Phase bei Ratten, Grundlagenforschung zur Ischämie-Reperfusionsverletzung nach Lebertransplantation liefern. Dr.Yuan Yuan ist für alle Videotieroperationen verantwortlich. Zwei ophthalmologische Zangen, gerade und biegt, und interokulare Linse, IOL Zange, ophthalmologische Schere, ein bis zwei Retraktoren, Wattestäbchen, 3-0 chirurgische Nähte, iodoform Gaze, Nahtnadeln, Biosysteme, wenn nötig, und interokulare Linse, IOL Zangen wird verwendet, um Blutgefäße wegen Rundköpfen zu trennen.Tieranästhesiemaschine, Entwässerungsmaschine, Einbettmaschine, pathologische Schneidemaschine, Tiefkühlmaschine, Tissueschneider, Lufttrockner, neuraloptisches Mikroskop, Scanner, Enfluran zur Vollnarkose, 4%Paraformaldehydlösung, beliebiges Ethanol, Xylol, hocheffizientes Paraffinwachs, Hämatoxylin-Eosin-Farbstofflösung, Salzsäure, Ammoniak, Rutsche, Deckglas, neutrales Gummi und Absterben. Pipetten, Zentrifuge, automatischer biochemischer Analysator, Alanin-Aminotransferase, ALT-Kit, Aspartat, Aminotransferase, AST-Kit, Kreatinin-Kit. Nach dem Wiegen werden die Ratten von einer Tieranästhesiemaschine mit Isofluran bezähngt.Nach der Abdominaldesinfektion, machen Sie einen medianen Schnitt von drei Zentimetern unter dem xiphoiden Prozess mit Zangen und Schere. Öffnen Sie die Bauchhöhle, setzen Sie die Leber mit einem Retraktor aus und mobilisieren Sie das hepatogastrische Band. Verwenden Sie Wattestäbchen, um den mittleren Lappen der Leber sanft umzudrehen und drehen Sie ihn nach oben, um die Porta habitis freizulegen.Identifizieren Sie den Gallengang, die Portalvene und die Leberarterie. Schieben Sie den Dünndarm mit Baumwoll-Swaps in Richtung der linken unteren Bauchhöhle und bewegen Sie die unterlegene Venenhöhle in die rechte Nierenvene, isolieren Sie die Portalvene, die Leberarterie und die untere Venenhöhle oberhalb der rechten Nierenvene mit einer Intraokularlinse, IOL, Zangen, die jeweils mit 3-0 Seidenfaden mit einem Schlupfknoten markiert sind. Schneiden Sie die Haut der linken und rechten unteren Extremität auf und belichten Sie die Oberschenkelvene mit ophthalmologischen Zangen.Injizieren Sie langsam niedermolekulares Heparin 625 I.E./kg durch die Femoralvene, um den ganzen Körper zu heparinisieren. Ligate die Portalvene, Leberarterie, und unterlegene Vena Cava über der rechten Nierenvene mit der Nummer 3-0 Nähte, für 45 Minuten dauern. Ersetzen Sie den Dünndarm in der Bauchhöhle und bedecken Sie ihn mit Gaze.Inhalationsanästhesie wird während dieser Perioden reduziert. Nach 45 Minuten, lassen Sie die Portalvene, leberarteriende arterien, und die unterlegene Vena cava über der rechten Nierenvene. Muskel und Haut Schicht für Schicht befolgen und die inhalative Anästhesie beenden.Geben Sie postoperative Analgesie mit subkutanem Morphin von 5 mg/kg alle vier Stunden Beobachten Sie die Ratte bis zum Erwachen und halten Sie unter einer Temperatur von 25 plus oder minus zwei Grad Celsius und Feuchtigkeit von 50 plus oder minus 10% Tier HeizungLampen erforderlich. In diesem Tiermodell wurden die Ratten nach dem Zufallsprinzip 15 Minuten lang nach Ischämie, i 15 Gruppen, 30 Minuten, I 30 Gruppe, 45 Minuten, I 45 Gruppe, 60 Minuten, I 60 und eine Scheingruppe mit 10 Ratten in jeder Gruppe nach dem Zufallsprinzip eingeteilt. Ihre Überlebensrate jeder Gruppe wurde 14 Tage nach der Operation beobachtet.Alle Ratten überlebten in den Gruppen I 15, I 30 und Schein. Acht überlebten 14 Tage in der I 45 Gruppe und nur zwei in der I 60 Gruppe. Die Ergebnisse legten nahe, dass die Ratten die anhepatische Phase höchstens 45 Minuten tolerieren könnten.Während des Experiments wurde Biosystems verwendet, um die Veränderungen der Herzfrequenz und des Blutdrucks, die richtige interne Karotisarterienintubation vor und nach der anhepatischen Phase aufzuzeichnen. Wir fanden heraus, dass sich die Herzfrequenz und der mittlere arterielle Druck, MAP von Ratten, nach der Gefäßligation dramatisch veränderten. Nach Ligation, Leberischämie, Stau, und Ödeme im Darm, Magenvarizen und Splenomegalie waren offensichtlich.80 Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in acht Gruppen eingeteilt, darunter Ischämie für 45 Minuten, T0, Reperfusion für sechs Stunden, T6, 12 Stunden, T12, 24 Stunden, T24, 48 Stunden, T48, 72 Stunden, T72, sieben Tage, T7, in 14 Tagen, T14, bzw. T14. Die Niere, Bauchspeicheldrüse, Dünndarm, Herz- und Lungengewebe wurden eingenommen und mit HE gefärbt, nachdem Ratten geopfert wurden. Mit Ausnahme des Herzens wurden pathologische Noten nach Referenzen bzw. angegeben.Die Ergebnisse zeigten, dass die Zeit der maximalen Verletzung der extrahepatischen Organe variierte. Es dauerte sechs bis 24 Stunden nach der Operation für die Bauchspeicheldrüse und 24 bis 48 Stunden für die Lunge. Der Darmtrakt und die Niere wurden nach 45 Minuten Ischämie am schwersten verletzt.Es gab keine offensichtliche Anomalie der Darmschleimhaut 24 Stunden nach der Operation und die Nieren erholten sich nach 48 Stunden. Was das Herz betrifft, so wurden im Laufe der Zeit nach der Reperfusion lokale Myokardzellnarkose, Zellfragmentierung und -auflösung, entzündliche Zellinfiltration sowie lokale Vasodilatation und Verstopfung im Gewebe 24 bis 48 Stunden nach der Operation gefunden. Serum wurde gesammelt und die Konzentrationen von ALT, AST, Kreatinin und Amylase wurden von einem automatischen biochemischen Analysator nachgewiesen.Alle Indikatoren erreichten einen Höchststand von 24 bis 48 Stunden, im Gegensatz zu den pathologischen Veränderungen. Obwohl die Pegel 48 Stunden nach der Operation im Grunde normal waren, dauerten die pathologischen Schäden noch an. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das Modell bei Ratten einfach und einfacher ohne Mikrochirurgie zu verwenden ist und der Grundlagenforschung der Ischämie-Reperfusionsverletzung von extrahepatischen Organen nach Leberischämie grundlagesbilden.

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