Echtzeitmessung des mitochondrialen bioenergetischen Profils von Neutrophilen

Dieses Protokoll konzentriert sich auf die Quantifizierung der mitochondrialen Atmung von Maus und menschlichen Neutrophilen sowie von neutrophilenähnlichen HL60-Zellen mit dem metabolischen extrazellulären Flussanalysator. Diese Methode ermöglicht es uns, die mitochondriale Funktion in neutrophilen Granulozyten unter normalen und krankheitsbedingten Bedingungen zu quantifizieren. Dies ist eine einfache Technik, die Einblicke in die mitochondriale Funktion der Zellen als Reaktion auf Medikamente oder andere Krankheiten liefern kann.

Da verschiedene Zellen eine unterschiedliche mitochondriale Atmungseffizienz aufweisen, muss die Optimierung der Zellaussaatdichte und der Reagenzienkonzentration genau durchgeführt werden, um qualitativ hochwertige Ergebnisse zu erzielen. Um mit dem metabolischen extrazellulären Flussassay zu beginnen, nehmen Sie eine Sensorkartusche, die auf einer speziell entwickelten 96-Well-Platte verpackt ist, und übertragen Sie 200 Mikroliter Kalibriermedium in jede Vertiefung der darunter liegenden Platte. Heben Sie die Kartusche und die Platte vorsichtig mit Calibrant an und legen Sie sie über Nacht zur Flüssigkeitszufuhr in einen mit Kohlendioxid befeuchteten Inkubator mit 37 Grad Celsius.