Mesure en temps réel du profil bioénergétique mitochondrial des neutrophiles

Ce protocole se concentre sur la quantification de la respiration mitochondriale des neutrophiles de souris et humaines, ainsi que des cellules HL60 de type neutrophile à l’aide de l’analyseur de flux extracellulaire métabolique. Cette méthode nous permet de quantifier la fonction mitochondriale des neutrophiles dans des conditions normales et pathologiques. Il s’agit d’une technique simple qui peut fournir des informations sur la fonction mitochondriale des cellules en réponse à des médicaments ou à toute maladie.

Étant donné que différentes cellules ont une efficacité respiratoire mitochondriale différente, l’optimisation de la densité d’ensemencement cellulaire et de la concentration de réactif doit être effectuée avec précision pour obtenir des résultats de haute qualité. Pour commencer le test de flux extracellulaire métabolique, prenez une cartouche de capteur emballée sur une plaque de 96 puits spécialement conçue et transférez 200 microlitres de milieu d’étalonnage dans chaque puits de la plaque sous-jacente. Soulevez soigneusement la cartouche et la plaque avec un calibrant et placez-la dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius sans dioxyde de carbone pendant la nuit pour l’hydratation.