Este video muestra un procedimiento para aislar protoplastos intactos los tejidos de 14 días de edad, las plántulas de Arabidopsis. Dado que los protoplastos aislados permanecen intactos por lo menos durante 96 horas y están aislados de plantas en vez de un mes de edad, las plantas adultas, este procedimiento acelera pruebas que requieren protoplastos intactos.
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Artículo de método
El aislamiento de protoplastos a partir de tejidos de 14 días de edad de las plántulas Arabidopsis thaliana
En este artículo
Resumen
Resumen
Los protoplastos son células vegetales que han tenido sus paredes celulares enzimáticamente eliminado. El aislamiento de protoplastos a partir de tejidos de plantas se registró por primera vez hace más de 40 años
Protocolo
Parte 1. Preparación de un medio sólido para el cultivo de plantas.
Por lo general las plantas de la cultura en el concentrado Murasige y Skoog (MS) suplementado con 1% de sacarosa y 0,7% de agar. Contiene todos los ingredientes necesarios para mantener las plantas sanas.
Para preparar 1 litro de MS, el pH 5,7
- Añadir 2,15 g de MS polvo en 800 ml de agua en botella de 2,0 litros de 1,5 autoclavable.
- Coloque una barra de agitación en la botella y disuelva el polvo MS agitando medio de una placa de agitación.
- Mientras se agita, añadir gota a gota, KOH 1N para ajusta....
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Discusión
Para asegurar el alto rendimiento de protoplastos intactos, es muy importante para la puesta en marcha de las plantas sanas. Use un filtro a esterilizar soluciones para el aislamiento de protoplastos. Recuerde que los protoplastos son frágiles. Por lo tanto, cuando usted está manejando protoplastos, no se mezclan, pipeta o vortex vigorosamente ya que les freno. En cambio, la mezcla protoplastos girando lentamente o grabar el tubo de centrífuga. El procedimiento descrito protoplastos intactos rendimiento que son viables .......
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Divulgaciones
La patente provisional que describe el procedimiento para su uso en el análisis funcional de genes de plantas han sido presentados ante Cornell Centro para la Empresa de Tecnología y Comercialización (CCTEC), junio de 2008. Expediente n º 50341/015001: Vatamaniuk, en Aceptar y, Zhai, Z. Método rápido para análisis funcional de los genes de la planta.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Estación Experimental Agrícola de la Universidad de Cornell (CUAES) NYC-125433 Hatch Grant y Cornell subvención inicial concedida a OKV
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Mezcla de Sales Basales de Murashige y Skoog (MS) | Sigma-Aldrich | M5524 | |
| Agar | Sigma-Aldrich | A1296 | |
| Placas de Petri (100x15 mm) | Krackeler Scientific, Inc. | 82-4001 | |
| Cellulasa (Onozuka R‐10) | Research Products International Corp. | C32200 | |
| Macerozima (R10) | Research Products International Corp. | M22010 | |
| Papel de gasa para queso | Fisher Scientific | 06-665-29 | |
| LabRotator | Fisher Scientific | 1167152Q | |
| Centrífuga Allegra X‐15R | VWR international | 392932 | |
| Microscopio Axioskop 2 Plus | Carl Zeiss, Inc. |
Referencias
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
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Reimpresiones y permisos
