Esta película y el protocolo se pretende ayudar al aprendizaje de la transferencia nuclear.
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Artículo de método
Transferencia nuclear en ovocitos de ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
La transferencia nuclear en un ovocito no fertilizado puede restablecer el potencial de desarrollo de una célula diferenciada. Esto demuestra que los procesos que subyacen al desarrollo, la diferenciación y el envejecimiento son epigenéticos en lugar de los procesos genéticos. La reversibilidad de estos procesos se abre perspectivas interesantes en la investigación básica, y en el futuro más lejano, en la medicina regenerativa. En el ratón, las células madre embrionarias se pueden derivar de la clonación de embriones de preimplantación etapa. Estas células madre embrionarias tienen la capacidad de dar lugar a todos los tipos celulares del organismo adulto. Es importante destacar que estas células son genéticamente idénticos al donante. Si es aplicable a humanos, esto permitirá la obtención de células madre de un paciente. Estas células podrían entonces ser diferenciado en el tipo de células afectadas del paciente y estudio in vitro, o se utiliza para reemplazar las células dañadas o faltantes. El estudio de la transferencia nuclear en el ratón sigue siendo importante ya que nos puede informar acerca de los principios de la reprogramación nuclear. Esta película y el protocolo de acompañamiento están destinadas a ayudar al aprendizaje de la transferencia nuclear en el ratón, un método desarrollado inicialmente en el grupo del Prof. Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocolo
Preparaciones:
- Una descripción detallada de superovulación y cultivo de embriones microgota se puede encontrar en otro lugar 2.
- Prepare una placa de Petri con microgotas de medio de cultivo de embriones (por ejemplo, KSOM, Chemicon). Cubrir con aceite mineral (lotes de aceite mineral deben ser probados para la compatibilidad con el cultivo de embriones). Equilibre a 37 ° C en el aire, más el 5% de CO 2. (En Thermo Electron-agua incubadora con camisa de 3110 o su equivalente)
- Preparar un plato para el aislamiento de los ovocitos: gotas Lugar de HEPES buffer CZB y....
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Discusión
¡Buena suerte!
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
DE gustaría agradecer al Dr. Ocultar Akutsu para compartir sus trucos NT y el Dr. Stephen Sullivan y Garrett Birkhoff para la lectura crítica del protocolo.
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Materiales
Por favor revise las composiciones buffers adicionales en la parte del Protocolo.
Referencias
- Eggan, K., Jaenisch, R. Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. Pease, S., Lois, C. , Springer. (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Manipulating the mouse embryo. Press, C. S. H. L. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R.
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Reimpresiones y permisos
