Photoswitching intravital y el seguimiento de Dendra2 marcado con las células tumorales a través de la ventana de imagen mamaria es una técnica que nos permite la imagen del comportamiento metastático de las células tumorales en los microambientes tumor elegido por un plazo de días.
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Artículo de método
Dendra2 Photoswitching a través de la ventana de imágenes mamarias
En este artículo
Resumen
Resumen
En la última década, la microscopía intravital de los tumores de mama en ratones y ratas en una sola célula de resolución
Protocolo
1. Generación de tumores fluorescente mediante la inyección de células tumorales en la almohadilla de grasa mamaria:
- Cultivar una línea celular que expresa Dendra2 proteínas (como un marcador citoplasmático) a 40 - 80% de confluencia.
- Enjuague los platos por lo menos 3 veces con PBS w / o Ca 2 + o Mg 2 +.
- Añadir 3 ml de tripsina por plato de 10 cm y se incuba a 37 ° C hasta que la mayoría de las células de separar y volver a golpear el plato sobre una superficie plana para que temblar.
- Enjuague todas las células de la placa, y el uso de un raspador (goma de policía) para recoger la matriz también. Agregar....
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Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por los EE.UU. Departamento de Defensa (BC075554 a BG y BC061403 a DK), EE.UU. Institutos Nacionales de Salud (U54GM064346 a JvR; CA100324 a JC, JES y JW, CA77522 a JES, U54CA126511 a JC y BG). Damos las gracias a D. Entenberg para ayudar con el microscopio, M. Rottenkolber para ayudar en la fabricación de la caja de imagen y J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) para el anticuerpo F4/80.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| PBS sin Ca, Mg | GIBCO, por Life Technologies | 14190-144 | |
| Tripsina | GIBCO, por Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, por Life Technologies | 14025 | |
| Medio DMEM (células MDA-MB-231) | GIBCO, por Life Technologies | 11965 | |
| Isoflurano (Aerrane) | Baxter International Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| Ratón SCID | Instituto Nacional del Cáncer | N/D | |
| Placas de cultivo | BD Biosciences | 353003 | Pedido personalizado |
| Cubreobjetos circulares de 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
Referencias
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
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Reimpresiones y permisos
