मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग द्वितीय: और मानव islets के शोधन और संस्कृति
Summary
उच्च गुणवत्ता और मानव islets की उचित मात्रा में हासिल सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए प्रमुख किसी और चीज की की है. इस वीडियो में, हम कदम से कदम का वर्णन एक संशोधित स्वचालित पद्धति का उपयोग मानव अग्नाशय आइलेट (भाग द्वितीय: और मानव islets की शुद्धि और संस्कृति) अलगाव के लिए प्रक्रियाओं.
Abstract
टाइप 1 मधुमेह के प्रबंधन को भारी है, दोनों व्यक्ति और समाज के लिए, 100 से अधिक अरब डॉलर सालाना लागत. ग्लूकोज की निगरानी और नए इंसुलिन योगों के व्यापक उपयोग के बावजूद, कई व्यक्तियों को अभी भी विनाशकारी माध्यमिक जटिलताओं के विकास. अग्नाशय आइलेट प्रत्यारोपण मधुमेह के रोगियों में सामान्य ग्लूकोज नियंत्रण के पास बहाल कर सकते हैं<sup> 1</sup> गंभीर hypoglycemic एपिसोड है कि इंसुलिन गहन चिकित्सा के साथ जुड़े रहे हैं के जोखिम के बिना. पर्याप्त आइलेट जन प्रदान सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए महत्वपूर्ण है. हालांकि, दाता विशेषताओं, अंग खरीद और संरक्षण अलगाव परिणाम को प्रभावित<sup2></sup>. शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय (यूआईसी) पर हम एक बेहतर शुद्धि ढाल के साथ एक सफल अलगाव प्रोटोकॉल विकसित<sup> 3</sup>. कार्यक्रम जनवरी 2004 में शुरू किया और 300 से अधिक isolations नवंबर 2008 के लिए प्रदर्शन किया गया. pancreata ठंड संरक्षण समाधान में भेजा गया था (UW, के विस्कॉन्सिन या HTK के विश्वविद्यालय, हिस्टडीन Tryptophan ketoglutarate)<sup4-7></sup> सेल यूआईसी पर अलगाव प्रयोगशाला आइलेट अलगाव के लिए. अग्नाशय islets यूआईसी विधि है, जो मूल रूप से Ricordi द्वारा वर्णित विधि का एक संशोधित संस्करण है का उपयोग कर अलग किया गया<em> एट अल</em><sup8></sup>. पार्ट में वर्णित मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतक का संग्रह, मानव अग्न्याशय छंटनी था, cannulated, perfused, और पचता. संग्रह और UW समाधान में ऊष्मायन के कम से कम 30 मिनट के बाद, ऊतक सेल विभाजक में लोड किया गया था (COBE +२,९९१, Cobe, Lakewood, सीओ शुद्धि के लिए)<sup> 3</sup>. निम्नलिखित शुद्धि, आइलेट उपज (आइलेट समकक्ष, IEQ के रूप में व्यक्त), ऊतक की मात्रा, और पवित्रता मानक विधियों के अनुसार निर्धारित किया गया था<sup9></sup>. पृथक islets CMRL-1066 (Mediatech, Herndon, VA) के मीडिया, 1.5% मानव albumin, 0.1% (आईटीएस) इंसुलिन transferrin – सेलेनियम, ciprofloxacin, 1M HEPES के 5 मिलीलीटर की 1 मिलीलीटर के साथ पूरक है, और 14.5 मिलीलीटर में सुसंस्कृत थे 37 में 7.5% T175 बोतल में सोडियम बिकारबोनिट डिग्री सेल्सियस रातोंरात संस्कृति पहले islets प्रतिरोपित थे या अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया.
Protocol
Discussion
मानव आइलेट अलगाव की तकनीक में महत्वपूर्ण प्रगति के बावजूद, आइलेट उपज उच्च चर और अप्रत्याशित रहेगा. पचा अग्नाशय के ऊतकों के शोधन सफल enzymatic पाचन के बाद प्रत्यारोपण के लिए एक पर्याप्त टापू जन ठीक करने के लि?…
Acknowledgements
शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय से स्थापना के रूप में अच्छी तरह के द्वारा समर्थित आइलेट सेल संसाधन केंद्र NIH अनुदान (RFA-05-003 आर आर), क्रिस्टोफर फाउंडेशन, Efroymson फाउंडेशन, और Tellabs फाउंडेशन के रूप में.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | equipment | Gambro. BCT | 2556 | islet purification |
| MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
| Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
| Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
| COBE bag | disposable equipment | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 culture flask | disposable equipment | Sarstedt | 83.1812.500 | |
| University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagent | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
| Final wash/Culture Medium | reagent | Mediatech Inc | 99-785-CV | |
| Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |
Referencias
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