Descifrar Caminos axonal de los grupos definidos genéticamente las neuronas en el tubo neural del polluelo Utilizando In ovo La electroporación

Resumen

Este video muestra la forma de visualizar las vías axonales de grupos genéticamente definidos de neuronas en la médula espinal de embriones de pollo que utilizan In ovo Electroporación de los genes reportero bajo el control de determinados elementos potenciadores.

Resumen

El empleo de elementos potenciadores para dirigir la expresión de genes reporteros en las neuronas es un paradigma ampliamente utilizado para el seguimiento de la proyección axonal. Para el seguimiento de la proyección axonal de interneuronas espinales en los vertebrados, la línea germinal objetivo genes reportero de etiquetado sobre simetría bilateral. Por lo tanto, es difícil distinguir entre la ipsi y contra-lateral se proyecta axones. Electroporación unilateral en el tubo neural de pollo proporciona un medio útil para limitar la expresión de un gen a un lado del sistema nervioso central, y de seguir la proyección axonal en ambos lados

Protocolo

I. La electroporación

Manejo de huevo

1. Coloque los huevos en una incubadora humidificada conjunto a 37-38 ° C, preferible una incubadora con una bandeja oscilante.
2. Embrión se electroporated después de 66 horas de la incubación, cuando han llegado a Hamburgo y Hamilton (HH) la etapa 18-20. En esta etapa se encuentra la cabeza en ángulo recto con el tronco (condición llamada flexión cervical) y un vasto conjunto de los vasos sanguíneos extra-embrionarias, como la anterior, las venas posterior, vitelina derecha y la izquierda debe ser visto. Este es un momento óptimo para el potenciador que dependen de expresión específica <....

Discusión

Electroporación de ADN plásmido en el embrión de pollo se desarrolla como una técnica de gran alcance para la expresión ectópica en vivo. La combinación de potenciadores específicos, y la electroporación de pollo proporciona una herramienta rápida y eficaz para descifrar las vías axonal de un grupo definido genéticamente las neuronas ^1,3,5. Utilizando el cre / loxP y los sistemas de amplificación GAL4/UAS puede aumentar los niveles y duración de la expresión. El panorama resultante es el de una divergencia de.......