Descelularización y recelularización de hígados enteros

Resumen

Descelularización perfusión es una técnica novedosa para producir andamios todo hepática que conserva la composición del órgano de la matriz extracelular y la microarquitectura. Aquí, el método de preparación de andamios todo órgano con descelularización perfusión y posterior repoblación con hepatocitos se describe. Los injertos de hígado funcionales y trasplantables se pueden generar con esta técnica.

Resumen

El hígado es un órgano complejo que requiere una perfusión constante para el suministro de nutrientes y oxígeno y la eliminación de los residuos con el fin de sobrevivir a ^una. Los esfuerzos para recrear o simular la microestructura del hígado con motivos up approach utilizando ingeniería de tejidos y técnicas de microfabricación no han tenido éxito hasta ahora debido a este reto de diseño. Además, los biomateriales sintéticos usados ​​para crear los andamios para aplicaciones de ingeniería de los tejidos del hígado se han limitado en la inducción de la regeneración y reparación de tejidos en gran parte debido a la falta de motivos de células específicas de unión que podría inducir a las funciones de las células adecuadas ^2. Descelularizada tejidos nativos como los vasos sanguíneos y la piel ^{3 4} en el otro lado se han encontrado muchas aplicaciones en la ingeniería de tejidos, y han proporcionado una solución práctica a algunos de los desafíos. La ventaja de la matriz descelularizada nativos es que conserva, en cierta medida, la composición original, y la microestructura, por lo tanto, la mejora de la adhesión celular y la reorganización ^5.

En este trabajo se describen los métodos para realizar la perfusión-descelularización del hígado, de tal manera que un hígado intacto bioscaffold que conserva la estructura de los vasos sanguíneos principales se obtiene. Además, se describen los métodos para recellularize estas matrices biodegradables para adultos con hepatocitos primarios, la creación de un injerto de hígado que es funcional in vitro, y tiene el acceso de los buques necesarios para el trasplante de vivo.

Protocolo

1. Hígado descelularización

1. La cosecha de un hígado de rata con canalización de la vena portal y el uso del catéter de calibre 18. Salir de la inferior y la vena cava superior abierta. Mantener el órgano hidratado en tampón fosfato salino (PBS) en una placa de Petri de 10 cm.
2. Establecer un sistema de perfusión, que consiste en depósito de 8 litros, bomba peristáltica y una trampa de burbujas.
3. Llene el sistema de perfusión con solución salina de fosfato y que siga funcionando durante 10 minutos. Rellene PBS en una placa de Petri de 10 cm y reducir la velocidad de flujo de tampón fosfato salino a 1 mL / min.
4. Transferir cuidadosa....

Discusión

El método descrito aquí descelularización perfusión produce un conjunto de andamios que el hígado tiene la misma estructura bruta y la microarquitectura vascular del hígado nativo. El andamio tiene una composición de la matriz extracelular similar a la del hígado nativo. El método recelularización logra la repoblación de los andamios con células de alta eficiencia y las células permanecen viables y funcionales durante el período de cultivo in vitro de la prueba. Con la adición de las células no parenqu.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Dodecil sulfato de sodio	Sigma-Aldrich	L4390
Tritón X-100	Sigma-Aldrich	T8787
Motor digital Masterflex L/S	Cole-Parmer	EW-07523-80
Cabezal estándar de bomba Masterflex L/S	Cole-Parmer	EW- 07013-81
Trampa de burbujas	Radnoti Glass Technology Inc.	130149