Solo Drosophila Omatidio disección e Imagen

Resumen

El factor limitante en el uso de los adultos Drosophila para estudiar la neurodegeneración y la biología celular es la imagen difícil de procesos intracelulares. Se describe la disección de omatidios solo para generar una bona-fide cultivo primario de células neuronales, que pueden ser sometidos a un tratamiento de drogas y de imagen avanzada.

Resumen

La mosca de la fruta Drosophila melanogaster ha hecho valiosas contribuciones a la investigación en neurociencias y ha sido utilizado ampliamente como un modelo para las enfermedades neurodegenerativas por su poderosa genética ^1. El ojo de la mosca, en particular, ha sido el órgano de elección para la investigación neurodegeneración, siendo la parte más accesible y la vida puede prescindir de la Drosophila sistema nervioso. Sin embargo, la principal advertencia de los ojos intactos, es la dificultad, debido a la intensa autofluorescencia de los pigmentos, en los eventos de formación de imágenes intracelulares, como la dinámica de la autofagia ^2, que son fundamentales para la comprensión de la neurodegeneración.

Recientemente, hemos utilizado la disección y la cultura de un solo omatidios ³ que ha sido esencial para nuestra comprensión de las disfunciones autofagia en un modelo de vuelo de Dentatorubro-Pallidoluysian atrofia (DRPLA) ^{3, 4.}

Ahora el informe una descripción completa de esta técnica (Fig. 1), una adaptación de los estudios electrofisiológicos ^5, que es probable que se expanda enormemente la posibilidad de volar por los modelos de neurodegeneración. Este método puede ser adaptado a la imagen en vivo eventos subcelulares y para supervisar la administración de fármacos eficaces en las células fotorreceptoras (Fig. 2). Si se utiliza en combinación con las técnicas del mosaico de ^6-8, las respuestas de las células genéticamente diferentes se analizaron en paralelo (Fig. 2).

Protocolo

1. La disección de la retina Drosophila

1. Llenar una y de un portaobjetos de vidrio de 3 Bueno con tampón fosfato salino (PBS 1X), y luego vuela por anestesiar a CO _2. Tanto hombres como mujeres pueden ser utilizados para este experimento.
2. Una vez que las moscas son anestesiados, recoger una mosca con unas pinzas y colocarlo en el plato pequeño de PBS.
3. Bajo un microscopio de disección, una pizca de la trompa con pinzas, y luego separar la cabeza del cuerpo si se rompe el cuello con un segundo conjunto de pinzas.
4. Sosteniendo la cabeza de mosca de la trompa, cortado por la mitad a lo largo de la línea media hac....

Discusión

La disección omatidio único que aquí se presenta permite la recolección de información de celda más profunda sobre los procesos biológicos como la neurodegeneración, cuando el modelo en el ojo de Drosophila. Las neuronas fotorreceptoras son más accesibles que otras neuronas y el citoplasma es muy grande, y por lo tanto adecuado para estudiar la dinámica de la vesícula, en las células del mismo utilizado eficientemente en muchos modelos para cuantificar la neurodegeneración en vivo. El aspecto crítico d.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios (opcional)
Dispensador de CO2 portátil	Flystuff	59-150	Recambios disponibles
Pinzas DUMONT n º 5	AGAR Científico	T5034
3-Bueno portaobjetos de vidrio	EMS	71561-01
Micro tijeras	VWR	HAMMHSB516-09
Medio de Schneider	VWR	733-1663
LysoTracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Superfrost Diapositivas	VWR	631-0108
Vectashield con DAPI	Vector de Laboratorios	H-1200
Cubreobjetos	VWR	631-1336