Artículo de método
Una modificación en 3-D in vitro sistema se presenta en el que las características del crecimiento de varias líneas de células tumorales en la membrana basal reconstituida se correlacionan con el comportamiento inactivo o proliferativa de las células tumorales en un sitio secundario metastásico In vivo.
La recurrencia de cáncer de mama a menudo sigue a un período de latencia en el que no hay signos de cáncer y las metástasis pueden no ser clínicamente evidentes hasta muchos años después de la extirpación del tumor primario y la terapia adyuvante. Una probable explicación de este fenómeno es que las células tumorales han sembrado los sitios de metástasis, son resistentes a las terapias convencionales, y permanecer latente durante largos períodos de tiempo 1.4.
La existencia de las células del cáncer latente en sitios secundarios se ha descrito previamente como reposo celdas de aislamiento que no proliferan ni la apoptosis 5-7. Además, estas celdas de aislamiento se ha demostrado que la difusión del tumor primario en una etapa temprana de la progresión de la enfermedad 80-10 y residir crecimiento detenido de nuevo en la médula ósea del paciente, la sangre y los ganglios linfáticos 1,4,11. Por lo tanto, comprender los mecanismos que regulan la latencia o el salto hacia un estado proliferativo es fundamental para el descubrimiento de nuevos objetivos y las intervenciones para prevenir la recurrencia de la enfermedad. Sin embargo, desentrañar los mecanismos que regulan el paso de la latencia del tumor de crecimiento metastásico se ha visto obstaculizada por la falta de sistemas de modelos disponibles.
in vivo y ex vivo sistemas modelo para estudiar la progresión metastásica de las células tumorales se han descrito anteriormente 1,12-14. Sin embargo estos sistemas no han proporcionado el modelo en tiempo real y en una visión de alto rendimiento en forma mecánica lo que desencadena la aparición de células tumorales latentes solitario a proliferar como la enfermedad metastásica. Recientemente hemos desarrollado un sistema in vitro 3D para modelar el crecimiento en las características in vivo de células que presentan un comportamiento metastásico o latente (D2.OR, MCF7, K7M2-AS.46) o proliferativa (D2A1, MDA-MB-231, K7M2) en vivo. Hemos demostrado que las células tumorales que exhiben latencia en vivo en el lugar de la metástasis permanecer en reposo cuando se cultivan en un niño de 3 dimensiones (3D) el extracto de la membrana basal (BME), mientras que las células altamente metastásico in vivo fácilmente proliferan en la cultura 3D después de variables, pero relativamente corto períodos de inactividad. Es importante destacar que mediante la utilización del 3D en el sistema de modelo in vitro se demostró por primera vez que la composición ECM desempeña un papel importante en la regulación de las células tumorales inactivas si se cambia a un estado proliferativo y lo han confirmado en estudios in vivo 15-17. Por lo tanto, el sistema de modelos descritos en este informe proporciona un método in vitro a la latencia modelo de tumor y el estudio de la transición hacia un crecimiento proliferativo inducido por el microambiente.
1. Mantenimiento de los cultivos de células de líneas celulares tumorales metastásicas latentes y
2. Ensayo de proliferación celular de las células tumorales inactivas (en reposo) y metástasis (proliferación) cultivadas en un sistema 3D-BME
Cultivo late....
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Los mecanismos subyacentes que mantienen difundido las células tumorales en un estado latente o como resultado de su transición hacia un crecimiento metastático siguen siendo desconocido. Este fenómeno ha sido muy difícil de estudiar en pacientes humanos 4,12 y pocos modelos preclínicos se han desarrollado para abordar esta cuestión. Sin embargo, algunos en vivo y ex vivo modelos de sistemas de latencia del tumor se han caracterizado (revisado en 1,12). Sin embargo, los modelo.......
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No hay conflictos de interés declarado.
Esta investigación fue financiada en parte por el Programa de Investigación Intramural del Instituto Nacional del Cáncer.
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| DMEM altos de glucosa | Invitrogen | 11965-118 | |
| DMEM bajos de glucosa | Invitrogen | 11885-092 | |
| De suero fetal bovino (SFB) | Invitrogen | 10091-148 | |
| El factor de crecimiento reducido en 3-D Sótano Cultrex extracto de membrana | Trevigen Inc. | Concentración de proteínas entre 14-15mg/ml | |
| D2.0R D2A1 y líneas celulares | 5,19 | ||
| K7M2 y K7M2AS1.46 células | 20 | ||
| MCF-7 y MDA-MB-231 células de cáncer de mama | ATCC | ||
| Un vaso de 8 cámara de diapositivas del sistema | (Lab-Tek, Thermo Scientific) | 177402 | |
| Celular Titer 96 Una célula acuosa Solución proliferación kit de ensayo | Promega | G3580 | |
| Vectashield medio de montaje con DAPI | Vector Laboratories Inc. | H-1200 | |
| Suero normal de burro | Jackson ImmunoResearch | 017-000-121 | |
| Lector de placas ELISA | Bio-Tec | 490nm registro | |
| Microscopio confocal | Zeiss-LSM-510 | Ampliación x63 |
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