El establecimiento de un modelo de tumor de vejiga ortotópica para evaluar los efectos antitumorales de SARNA intravesical entrega y el control del crecimiento tumoral mediante ecografía y bioluminiscente.
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Artículo de método
Un modelo de tumor vesical ortotópica y la Evaluación de tratamiento intravesical SARNA
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En este artículo
Resumen
Resumen
Se presenta un nuevo método para el tratamiento de cáncer de vejiga con intravesical entregado activación pequeño ARN (Sarna) en un modelo de xenoinjerto de tumor vesical ortotópico del ratón. El modelo de ratón se establece mediante cateterismo uretral por debajo inhalado anestesia general. Quemadura química se introduce entonces a la mucosa de la vejiga utilizando solución intravesical nitrato de plata para perturbar la capa de glicosaminoglicano vejiga y permite a las células para unir. Tras varios lavados con agua estéril, cáncer de vejiga humano KU-7-luc2-GFP células son inculcados a través del catéter en la vejiga para vivir durante 2 horas. Posterior crecimiento de los tumores de vejiga se confirma y monitoreado por ultrasonido de vejiga en vivo e imágenes bioluminiscentes. Los tumores se tratan a continuación intravesical con SARNA formulado en nanopartículas lipídicas (LNPs). El crecimiento del tumor se controla con el ultrasonido y la bioluminiscencia. Todos los pasos de este procedimiento se demuestra en el vídeo adjunto.
Protocolo
Los procedimientos que implican temas de los animales han sido aprobados por el Cuidado de Animales institucional y el empleo (IACUC) de la Universidad de California en San Francisco.
1. Preparación de la célula
- El cáncer de vejiga humano línea de células KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) se cultiva en medio RPMI-1640 suplementado con suero fetal bovino al 10% y 50 gentamicina g / ml.
- Los cultivos se mantuvieron a 37 ° C, 5% de CO 2 con los medios cambia cada dos o tres días.
- Las células fueron cosechadas por digestión con tripsina y se contaron utilizando un hemocitómetro. Una ....
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Discusión
Se presenta un protocolo para el establecimiento de un modelo de ratón del tumor vesical ortotópico xenoinjertos seguido por el tratamiento intravesical de los tumores con SARNA LNP formulado que se dirige el promotor de p21 CIP1/WAF1 (p21) para la activación transcripcional. 2, 3 Los tumores resultantes pueden ser confirmación y seguimiento con imágenes bioluminiscentes y la ecografía de vejiga. Modelos ortotópico puede ser superior a intraperitoneal, subcutánea, intravenosa o modelos, proporciona.......
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Divulgaciones
LCL es un inventor llamado de solicitudes de patentes pendientes relacionadas con SARNA que han sido presentadas por la Universidad de California en San Francisco y con licencia para Alnylam Pharmaceuticals.
Agradecimientos
Esta investigación está financiada por la AACR Henry Shepard cáncer de vejiga beca de investigación (09-60-30-LI).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios (opcional) |
| KU-7-luc-GFP células | Caliper | 128091 | |
| tímicas ratones desnudos (nu / nu) | Simonsen Laboratorios | 6-7 semanas de edad | Sim: (NCR) nu / nu FISOL |
| Ultrasonido unidad | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 de la sonda |
| La bioluminiscencia unidad | Caliper | IVIS Spectrum | |
| Exel safelet catéter | Pescador | 14-841-21 | 24G x ¾ " |
| Nitrato de plata | Sigma | S8157 | |
| Hamilton jeringa | Hamilton company | 80301 | |
| LNP-SARNA | Alnylam Pharmaceuticals |
Tabla 1. Reactivos específicos y equipos.
Referencias
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
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Reimpresiones y permisos
