Un método para visualizar y cuantificar la estructura 3-dimensional de la vena portal hepática del ratón o del conducto biliar intrahepático se describe. Esta técnica de colada de resina también se puede aplicar a otros sistemas de conductos o vascular y permite In situ Visualización o cuantificación de arquitectura intacta la comunicación de un sistema.
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Artículo de método
3-Dimensional resina de moldeo e Imagen de la vena portal del ratón o Sistema vías biliares intrahepáticas
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Resumen
Resumen
En los órganos, la arquitectura correcta de las estructuras vasculares y ductal es indispensable para la función fisiológica adecuada, y la formación y el mantenimiento de estas estructuras es un proceso altamente regulado. El análisis de estos complejos, 3-dimensional estructuras ha dependido en gran medida en cualquiera de examen 2-dimensional en la sección o en estudios de inyección de tinte. Estas técnicas, sin embargo, no son capaces de proporcionar una representación completa y cuantificable de las estructuras ductales o vascular que están destinados a elucidar. Alternativamente, la naturaleza de la 3-dimensional moldes de resina de plástico genera una instantánea permanente del sistema y es una técnica novedosa y muy útil para visualizar y cuantificar 3-dimensional estructuras y redes.
Una ventaja fundamental del sistema de colada de resina es la capacidad de determinar la intactos y conectados, o comunicando, la estructura de un vaso sanguíneo o conducto. La estructura de vascular y ducredes ambientales son cruciales para la función del órgano, y esta técnica tiene el potencial de contribuir a al estudio de las redes vasculares y ductal de varias maneras. La resina de moldeo se puede utilizar para analizar la morfología normal y la arquitectura funcional de una estructura luminal, identificar cambios en el desarrollo morfogenéticas, y descubrir diferencias morfológicas en la arquitectura del tejido entre los estados normales y de enfermedad. El trabajo previo ha utilizado resina de colada para estudiar, por ejemplo, defectos arquitectónicos y funcionales en el sistema de ratón conducto biliar intrahepático que no se reflejaron en 2-dimensional análisis de la estructura 1,2, alteraciones en la vasculatura del cerebro de un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer 3 , anomalías de la vena porta en el portal de ratones hipertensos y cirróticos 4, etapas de desarrollo en la maduración de los pulmones de ratas linfático entre inmaduros y adultos 5 e inmediatos cambios microvasculares en el hígado de la rata, el páncreas y el riñón en respuesta a una lesión en la química6.
Aquí presentamos un método para generar un molde de resina 3-dimensional de una red vascular o ductal ratón, se centra específicamente en la vena porta y el conducto biliar intrahepático. Estos moldes se pueden visualizar en la limpieza o la maceración del tejido y luego se puede analizar. Esta técnica se puede aplicar prácticamente a cualquier sistema vascular o ductal y sería directamente aplicable a cualquier estudio investigando el desarrollo, función, mantenimiento, o lesión de una estructura 3-dimensional ductal o vascular.
Protocolo
1. Preparar Cánula
- Calentar una larga sección de 1 pulgada de tubería PE10 con los dedos y estirar de manera que la tubería se adelgaza.
Nota: el tamaño del vaso o conducto a ser canulado determinará el grado de estiramiento requerido. La cánula debe estar bien estirado por conducto biliar echa pero sólo puede ser requerido para ser moderadamente estirado para caber dentro de la vena portal mayor. - Cortar el tubo estirado en diagonal para generar una punta biselada.
- Cortar el otro borde de la tubería para crear un segmento de 5-6 cm.
- Inserte un calibre 32, una aguja hipodérmica ½ pulgada en el borde no biselado ....
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Discusión
Hemos descrito ejemplos específicos de cómo la vena porta y sistemas de conductos intrahepáticos biliares del hígado se puede convertir, pero esta técnica se puede aplicar a prácticamente cualquier otro sistema ductal o vascular con ligeras adaptaciones. Trabajos anteriores han demostrado la viabilidad de esta técnica en varias especies, incluyendo ratón 1,2,7-9, Patito, conejo 10,11 12,13, 14 perro y el cerdo 15, y en muchos órganos, incluyendo la glándula nasal 14, corazón <.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por becas de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) a SSH (R01-DK078640), del Howard Hughes Medical Institute (HHMI) a través del Programa de Certificación HHMI / Vanderbilt University de Medicina Molecular para TJW (GRDOT56006779), el Vanderbilt Diabetes Centro de Investigación y Capacitación (P30-DK020593) y la Digestive Disease Research Vanderbilt Center (P30-DK058404) la prestación de servicios básicos.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre de reactivo | Empresa | El número de catálogo | Comentarios |
| PE10 tubo de polietileno | Fisher Scientific | 1417012P | |
| 5-0 quirúrgico seda trenzado negro | Roboz quirúrgica | SUT-15-1 | |
| Steriject 32 x 13 mm aguja G | Air-Tite | TSK3213 | |
| Tijeras de primavera | Herramientas Artes Ciencias | 15000-08 | |
| Número 5 fórceps | Herramientas Artes Ciencias | 91150-20 | |
| Mercox II kit | Ladd Investigación | 21247 | |
| Alcohol bencílico | Fisher Scientific | 1816-04 | Oólo necesario para BABB de equilibrio |
| Benzoato de bencilo | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Sólo se requiere para BABB de equilibrio |
| Salina tamponada con fosfato (PBS) | |||
| Modelado de la arcilla | |||
| Escala | |||
| Laboratorio de tijeras | |||
| 15 ml tubos de tapón de polipropileno | |||
| 4% paraformaldahyde | |||
| 15% de hidróxido de potasio (KOH) | Sólo es necesario para la maceración | ||
| Hoja de afeitar | |||
| 100% de metanol | |||
| 3 ml jeringa luer lock |
Referencias
- Sparks, E. E., Perrien, D. S., Huppert, K. A., Peterson, T. E., Huppert, S. S. Defects in hepatic Notch signaling result in disruption of the communicating intrahepatic bile duct network in mice. Dis. Model Mech. 4, 359-367 (2011).
- Vanderpool, C.
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Reimpresiones y permisos
