Dos técnicas se pueden utilizar para establecer este modelo: la inyección de una suspensión de células de cáncer en la pared del ciego o el trasplante de un trozo de tumor subcutáneo en el ciego. Este modelo es útil para el estudio de la evolución natural del cáncer colorrectal y ensayo de nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer colorrectal.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal
En este artículo
Resumen
Resumen
El modelo tradicional por vía subcutánea tumor es menos que ideal para estudiar el cáncer colorrectal. Ortotópico modelos de ratón de cáncer colorrectal, que cuentan con las células cancerosas que crecen en su ubicación natural, reproducir enfermedades humanas con alta fidelidad. Dos técnicas se pueden utilizar para establecer este modelo. Ambas técnicas son similares y requieren de anestesia del ratón y la laparotomía para la exposición del ciego. Una técnica consiste en la inyección de una suspensión de células cancerosas de colon en la pared del ciego. Las células cancerosas son los primeros en cultivo, cosecha cuando subconfluentes y preparada como una suspensión de células individuales. Un pequeño volumen de las células se inyectaron lentamente para evitar fugas. La otra técnica consiste en el trasplante de un trozo de tumor subcutáneo en el ciego. Un ratón con un tumor establecido con anterioridad por vía subcutánea colorrectal es la eutanasia y el tumor se extirpa mediante una técnica estéril. La pieza del tumor se divide en trozos pequeños para el trasplante a otro ratón. Antes del trasplante, la pared del ciego está ligeramente dañado para facilitar la infiltración de células tumorales. El tiempo necesario para el desarrollo de los tumores primarios y metástasis hepáticas pueden variar dependiendo de la técnica, la línea celular, y las especies de ratón utilizada. Este modelo de ratón ortotópico es útil para estudiar la evolución natural del cáncer colorrectal y ensayo de nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer colorrectal.
Protocolo
I. Preparación de la célula
- Las células de cáncer colorrectal en un cultivo y cosecha, cuando subconfluentes.
- Una suspensión de células individuales se prepara en tampón fosfato salino y mantener en hielo.
II. Preparación del tumor
- Un ratón con un tumor establecido con anterioridad por vía subcutánea colorrectal es la eutanasia.
- El tumor se elimina por vía subcutánea mediante una técnica estéril y se divide en trozos 2-3 mm
- Las piezas de tumor se mantienen en solución salina de fosfato en el hielo.
III. Preparación del ratón
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Aunque los modelos de ratón de tumores subcutáneos son fáciles de establecer y supervisar, está claro que este modelo no se puede replicar el sitio anatómico original de cáncer colorrectal. Debido a la diferencia en el microambiente de las células de cáncer colorrectal que crecen bajo la piel se ha demostrado que un cambio de fenotipo y casi siempre fallan en el progreso y la metástasis 1,2. De hecho, la respuesta del tumor a la terapia puede variar enormemente dependiendo de si las células cancerosas se implantan en un embarazo .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Agradecimientos
Departamento de Cirugía, Universidad de California en San Francisco
Raymond Shaheen, MD
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Medios y componentes para cultivo celular | variarán según la línea celular utilizada | ||
| Solución salina tamponada con fosfato | BioWhittaker | 17-512F | también vendida por varios otros proveedores |
| Tubos cónicos de 15 mL, polipropileno | Corning | 430790 | |
| Placas de 6 pocillos con tapa | BD Biosciences | 353046 | |
| Pinzas de iris, rectas, con puntas dentadas | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | es recomendable tener un par de estos instrumentos |
| Tijeras de disección de iris, rectas, afiladas | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| Portaagujas (regular) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| Portaagujas (Castroviejo) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | los instrumentos deben esterilizarse periódicamente en autoclave, pero también pueden esterilizarse mediante inmersión en Cidex |
| Sutura 6-0 o 7-0 | para ciego; cortesía del Departamento de Cirugía, UCSF | ||
| Sutura 3-0 o 4-0 | para pared abdominal; cortesía del Departamento de Cirugía, UCSF | ||
| Máquina de anestesia / Isoflurano | J.A. Baulch and Associates | 3206 | también vendida por varios otros proveedores |
| Almohadilla térmica desechable, 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| Cinta, naranja, 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | para inmovilizar al ratón anestesiado |
| Afeitadora Pro-Cord/Sin cable | Oster Professional Products | 78997-010 | para afeitar el pelaje del ratón |
| Betadine | Fisher Scientific | 19-027132 | también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos |
| Gasa 2 x 2, de 3 capas | Johnson & Johnson | 7635 | también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos |
| Campo estéril, barrera, 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos |
| Aplicadores con punta de algodón, 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos |
| Jeringa, 10 cc, punta Luer lock | BD Biosciences | 309604 | |
| Jeringa, 1 cc, tuberculina, punta deslizante | BD Biosciences | 309602 | |
| Aguja 27 1/2 G | BD Biosciences | 305109 | |
| Aguja 30 G | BD Biosciences | 305106 |
Referencias
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in r....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
