Un método de dos etapas para establecer la enfermedad renal crónica (ERC) en ratas Lewis mediante la extirpación quirúrgica 5/6th de masa renal se describe. Combinación de la intervención quirúrgica, NOS-inhibición y una dieta alta en sal conduce a un modelo parecido a ERC humana, permitiendo el estudio de los mecanismos causales y el desarrollo de nuevas intervenciones terapéuticas.
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Artículo de método
5/6th nefrectomía en combinación con dieta alta en sal y el óxido nítrico sintasa inhibición para inducir la enfermedad renal crónica en la rata Lewis
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Resumen
Resumen
La enfermedad renal crónica (ERC) es un problema global. Retardar la progresión de la ERC es una prioridad de la salud. Desde ERC se caracteriza por alteraciones de la homeostasis de complejos, modelos animales de integración son necesarias para estudiar el desarrollo y la progresión de la ERC. Para estudiar el desarrollo de las intervenciones terapéuticas con ERC y novedoso en la ERC, se utiliza el modelo de ablación nefrectomía 5/6th, un modelo experimental bien conocido de la enfermedad renal progresiva, se asemeja a varios aspectos de la enfermedad renal crónica humana. La reducción bruta de masa renal causa glomerular progresiva y lesiones túbulo-intersticial, la pérdida de nefronas remanentes y el desarrollo de la hipertensión arterial sistémica y glomerular. También se asocia con la pérdida progresiva intrarrenal capilar, la inflamación y la glomeruloesclerosis. Factores de riesgo de ERC invariablemente impacto en la función endotelial. Para imitar este, combinamos eliminación de 5/6th de masa renal con óxido nítrico (NO) y el agotamiento de una dieta alta en sal. Después de la llegada y aclimatación, los animales vuelvenceive un inhibidor de la NO sintasa (NG-nitro-L-arginina) (L-NNA), complementado con el agua potable (20 mg / L) durante un período de 4 semanas, seguido de uninefrectomía lados derecho. Una semana más tarde, una nefrectomía subtotal (SNX) se lleva a cabo en el lado izquierdo. Después SNX, los animales se les permitió recuperar durante dos días seguidos de LNNA en el agua potable (20 mg / L) para un período de 4 semanas. Una dieta alta en sal (6%), complementada en suelo chino (ver línea de tiempo Figura 1), se continúa durante todo el experimento. La progresión de la insuficiencia renal es seguida en el tiempo por la medición de urea en el plasma, la presión arterial sistólica y la proteinuria. A las seis semanas después de SNX, insuficiencia renal ha desarrollado. La función renal se mide con inulina 'estándar de oro' y el ácido para-amino hipúrico (PAH), la tecnología de liquidación. Este modelo de ERC se caracteriza por una reducción en la tasa de filtración glomerular (TFG) y el flujo plasmático renal efectivo (FPRE), hipertensión (presión arterial sistólica> 150 mmHg), proteinuria (> 50 mg/24 h) Y la uremia leve (> 10 mM). Características histológicas incluyen daño túbulo-intersticial reflejada por la inflamación, atrofia tubular y fibrosis y glomeruloesclerosis focal que conduce a la reducción masiva de glomérulos sanos dentro de la población remanente (<10%). Seguimiento hasta 12 semanas después de SNX muestra la progresión de la ERC.
Introducción
Debido a su naturaleza progresiva, extremo posterior enfermedad renal en estado terminal, y la morbilidad cardiovascular y mortalidad asociadas, la ERC es un problema creciente de salud pública 1. Retardar la progresión de la ERC por lo tanto, es una prioridad de la salud. Desde ERC se caracteriza por alteraciones de la homeostasis de complejos, modelos animales de integración son necesarias para estudiar el desarrollo y la progresión de la ERC. El riñón se compone de una amplia gama de diferentes tipos de células que interactúan entre sí. Esta complejidad no puede ser imitado in vitro.
Para el estudio de nuevas interv....
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Protocolo
Todos los experimentos se realizan con arreglo a los animales de experimentación pautas éticas del comité animal experimental Utrecht. El protocolo se lleva a cabo bajo la dirección y aprobación del cuidado de los animales de la institución del autor y el empleo.
ERC se induce en ratas Lewis macho endogámicas (Charles River, Sulzfeld, Alemania) a la edad de 8 semanas. Las ratas están alojados en condiciones normales en un ambiente de luz, temperatura y humedad controladas.
1. Preparación para la Cirugía
- Esterilizar los instrumentos quirúrgicos:
- 1 tejido estudiante fórceps 1-2 dientes de 12 ....
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Resultados
Después de la nefrectomía subtotal, aproximadamente 1/6o de la masa total renal se deja. Figura 4 muestra el peso de la pieza extraída del riñón derecho con media y desviación estándar de dos experimentos anteriores. Se debe tener en cuenta que en la semana después de UNX, hipertrofia del riñón izquierdo se produce, lo que indica que el peso que debe ser eliminado calcula en función del peso del riñón derecho siempre se traduce en menos de extracción 5/6th. Sin embargo, ya que no es posible determinar e.......
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Discusión
La extirpación quirúrgica de 5/6th de masa renal en la rata Lewis, combinada con una dieta alta en sal y la inhibición de la NOS temporal conduce a un modelo de enfermedad renal crónica que se asemeja a ERC humana y permite el estudio de los mecanismos causales y la eficacia de las intervenciones terapéuticas en enfermedad renal crónica.
El modelo de nefrectomía 5/6th es un modelo bien conocido y ampliamente descrito para el CKD. Sin embargo, la simple eliminación de 5/6th de masa renal no c.......
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Divulgaciones
Los autores tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Damos las gracias a Krista den Ouden por su excelente asistencia técnica. Esta técnica ha sido financiado por la fundación holandesa de riñón, donación C06.2174. MCV es apoyada por la Organización Holandesa para la Investigación Científica (NWO) Vidi-grant 016.096.359.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| reactivo | |||
| L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
| Spongostan dental: almohadillas de espuma de gel 1x1x1 cm | Johnson& Johnson | Ms0005 | |
| Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
| Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
| Buprenorfina (0,3 mg/ml) | A través de un farmacéutico local ordenado por Reckitt Benckiser pharmaceuticals | desconocido | |
| Equipo | |||
| Pinza de Tejido para Estudiantes - 1x2 Dientes 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
| Pinzas de patrón estándar para estudiantes | FST | 91100-12 | |
| Tijeras de mayo | FST | 14010-15 | |
| 2X Pinza Semken FST | 11008-13 | ||
| Tijeras de iris para estudiantes | FST | 91460-11 | |
| Portaagujas Olsen-Hegar | FST | 12002-14 | |
|
Referencias
- AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351 (13), 1296-1305 (2004).
- Fleck, C., Appenroth, D., et al.
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Reimpresiones y permisos
