Parabiotic unión de dos organismos conduce al desarrollo de un sistema circulatorio compartido. En este protocolo, se describen los pasos quirúrgicos para formar una conexión parabiotic entre un ratón de tipo salvaje y un ratón que expresa GFP constitutiva.
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Artículo de método
Parabiosis en ratones: un protocolo detallado
En este artículo
Resumen
Resumen
Parabiosis es una unión quirúrgica de dos organismos que permiten el intercambio de la circulación sanguínea. Colocación de la piel de dos animales promueve la formación de la microvasculatura en el sitio de la inflamación. Socios parabiotic comparten sus antígenos circulantes y por lo tanto están libres de la reacción inmunitaria adversa. Descrita por primera vez por Paul Bert en 1864 1, la cirugía parabiosis fue refinado por Bunster y Meyer en 1933 para mejorar la supervivencia de los animales 2. En el protocolo actual, dos ratones se unen quirúrgicamente tras una modificación de la técnica de Bunster y Meyer. Los animales están conectados a través de la articulación del codo y de la rodilla, seguido de la unión de la piel permitiendo un apoyo firme que impide que la tensión en la piel suturada. En este documento, se describe en detalle el parabiotic unión de un GFP ubicua expresando ratón a una de tipo salvaje (WT) de ratón. Dos semanas después del procedimiento, el par se separa y células positivas para GFP se puede detectar por análisis de citometría de flujo en la sangre circulanteion del ratón PESO. El quimerismo de la sangre permite examinar la contribución de las células circulantes de un animal en el otro.
Introducción
Parabiosis, uniéndose a la cirugía de dos organismos, fue descrita por primera vez en 1864 por Paul Bert como una manera de desarrollar un modelo para estudiar los sistemas circulatorios compartidos y consistió en la unión de la piel y paredes musculares de dos ratas 1. Parabiosis promueve la formación de la microvasculatura en el sitio de la inflamación 3 y ha tenido varias aplicaciones en estudios fisiológicos, tales como la comunicación hormonal entre la glándula pituitaria y de las gónadas, así como la función del riñón en la hipertensión 4. Se ha empleado más para investigar la contratación y la integración de las células progeni....
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Protocolo
Todos los estudios con animales se realizaron de acuerdo con las directrices de cuidado de los animales y el uso comité de la UCLA y los Institutos Nacionales de Salud de Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. La duración del procedimiento que se describe a continuación es de aproximadamente 45 a 60 minutos de principio a fin.
1. Preparación de campo quirúrgico
- Realice el procedimiento en una sala de cirugía animal limpio.
- Equipamiento: isoflurano vaporizador, Gaymer Bomba T con almohadilla térmica.
- Herramientas estériles: dos pinzas curvas, tijeras finas, porta agujas.
- Guantes esté....
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Resultados
El resultado anticipado de parabiosis de dos organismos es la contribución igual de sistema circulatorio de cada animal a una circulación de la sangre común (Figura 2). Se puede verificar fácilmente el equilibrado exitoso de la sangre de la parabiosed WT y ratones GFP positivos por análisis de citometría de flujo. Aquí, la sangre venosa se obtuvo de las colas de ambos parabionts a las 2 semanas después de la cirugía y se fraccionó para las células de sangre periférica (para excluir eritrocitos). La frac.......
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Discusión
El método parabiosis discutido aquí presenta dificultades técnicas mínimas y los resultados de las tasas de mortalidad bajas. La unión de las articulaciones de rodilla y de codo es una mejora significativa de la Bunster y la técnica Meyer. Sin embargo, el procedimiento sigue siendo invasiva así el mantenimiento de las condiciones estériles durante toda la cirugía es imperativo. Para prevenir una infección del sitio quirúrgico, es importante que los animales parabiosed reciben una combinación de antibióticos y ser contro.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Adriane Mosley y Libuse Jerabek (Stanford) para obtener ayuda con la técnica quirúrgica.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Isoflurano-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 | |
| de inducción Posi-Seal | Productos de imágenes moleculares | AS-01-0530-SM | |
| Sistema de anestesia portátil | imágenes moleculares | AS-01-0007 | |
| Bomba Gaymer T | Gaymar Industries, Inc | TP650 | |
| Manta térmica (almohadilla térmica) | Kent Scientific Corp | TP-22G | |
| Pinza curva | Roboz | RS-5101 | |
| Tijeras | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 | |
| Portaagujas | FST FST | 12501-13 | |
| Afeitadora eléctrica | Oster | Golden A5 |
Referencias
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C.
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Reimpresiones y permisos
