In vivo MRI de 19F para el seguimiento de la célula

Resumen

Se describe un protocolo general para el seguimiento de las células in vivo mediante resonancia magnética en un modelo de ratón con ex vivo las células marcadas. Un protocolo típico para el etiquetado de células, el procesamiento de adquisición de imágenes y la cuantificación se incluye.

Resumen

In vivo ¹⁹ F MRI permite el seguimiento cuantitativo de células sin el uso de la radiación ionizante. Es una técnica no invasiva que se puede aplicar a los seres humanos. Aquí se describe un protocolo general para el etiquetado de células, formación de imágenes y procesamiento de imágenes. La técnica es aplicable a diversos tipos de células y modelos animales, aunque en este caso nos centramos en un modelo típico de ratón para el seguimiento de las células inmunes murinos. Los temas más importantes para el etiquetado de las células se describen, ya que son relevantes para todos los modelos. Del mismo modo, los parámetros clave de formación de imágenes se enumeran, aunque los detalles pueden variar dependiendo del sistema de resonancia magnética y la configuración individual. Por último, se incluye un protocolo de tratamiento de la imagen para la cuantificación. Variaciones para esta y otras partes del protocolo, se evalúan en la sección de Discusión. Basándose en el procedimiento detallado se describe aquí, el usuario tendrá que adaptar el protocolo para cada tipo específico de células, etiqueta celular, modelo animal, y la configuración de imágenes. Tenga en cuenta que la pROTOCOLO también se puede adaptar para el uso humano, siempre y cuando se cumplan las restricciones clínicos.

Introducción

En el seguimiento de células in vivo es esencial para la optimización y la supervisión de la terapia celular ^1. Debido a su naturaleza no invasiva, tratamiento de imágenes ofrece excelentes oportunidades de observar las células in vivo. Imagen de Resonancia Magnética (IRM) es independiente de la radiación ionizante y permite una resolución de imagen superior y el contraste intrínseco de tejido blando. Seguimiento de células basada en RM ya se ha utilizado clínicamente para seguir las células dendríticas en pacientes con melanoma ^2. MRI clínica convencional se lleva a cabo en el núcleo ¹ H, presentes en el ag....

Protocolo

Nota: Todos los experimentos y procedimientos con animales deben llevarse a cabo de conformidad con las normas éticas pertinentes y se ajustan con el cuidado animal estándar y los requisitos humanos.

1. Etiquetado celular (Protocolo Estándar con coincubación)

1. Añadir ¹⁹ F etiqueta ⁸ a países en desarrollo inmaduro a una concentración de 4 mg/10 ⁶ células (en el medio 2 ml). Agitar suavemente para mezclar.
2. Se incuban las células con la etiqueta durante 3 días antes de la maduración y la cosecha de los países en desarrollo.
3. Recoge los centros de datos y eliminar el exceso de eti....

Resultados

Aquí se muestran los resultados típicos de un protocolo que implica la transferencia de ¹⁹ células marcadas con F mensajeras a un ganglio linfático de drenaje. Figura 2 muestra un espectro de RMN de ¹⁹ F 10 ⁶ células marcadas utilizando una referencia TFA. La configuración de formación de imágenes se llevó a cabo como se describe en el protocolo (Figura 3). Para la formación de imágenes in vivo, se utilizó una referencia consistente en un cilind.......

Discusión

El protocolo descrito aquí describe el procedimiento general para el seguimiento in vivo de células ¹⁹ F resonancia magnética. A pesar de el método de co-incubación descrito, hay varios protocolos diferentes para etiquetar las células con un agente de ¹⁹ F. Sin embargo, la co-incubación se usa con más frecuencia y puede optimizarse por ejemplo, mediante la adición de agentes de transfección ^6. El protocolo de etiquetado real de células dependerá del tipo de célula. Sólo.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
REACTIVOS
PBS	Sigma-Aldrich	MFCD00131855
TFA	Sigma-Aldrich	76-05-1
Ketamina (Ketavet)	Pfizer	778-551
Xilacina (Rompun)	Bayer	QN05 cm92
Ophtosan	Produlab Pharma	2702	ungüento oftálmico
Nombre del material
escáner de resonancia magnética	Bruker Biospec

Espectrómetro de RMN Bruker Biospec