Inyección intramiocárdica percutánea guiada por ecocardiografía representa una modalidad eficiente, fiable, y objeto de orientación para la entrega de agentes de transferencia de genes o células en el corazón murino. Siguiendo los pasos descritos en este protocolo, el operador puede convertirse rápidamente competente en esta técnica versátil, mínimamente invasivo.
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Artículo de método
Guiada por ecografía transtorácica intramiocárdica inyección en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Los modelos murinos de enfermedad cardiovascular son importantes para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos y la exploración de potenciales terapias regenerativas. Los experimentos que implican la inyección miocárdica se llevan a cabo actualmente por el acceso quirúrgico directo a través de una toracotomía. Aunque esto es conveniente cuando se realiza en el momento de otra manipulación experimental como la ligadura de la arteria coronaria, la necesidad de un procedimiento invasivo para la entrega intramyocardial limita posibles diseños experimentales. Con cada vez mejor resolución ultrasonido y técnicas de imagen no invasivas avanzadas, ahora es factible realizar rutinariamente guiada por ecografía, la inyección intramiocárdica percutánea. Esta modalidad ofrece eficiente y fiable agentes a una región específica del miocardio. Las ventajas de esta técnica son evitar la morbilidad quirúrgica, la facilidad para las regiones objetivo de miocardio selectivamente bajo control ecográfico, y la oportunidad de ofrecer a inyectar a la myocardium en múltiples intervalos de tiempo, predeterminadas. Con técnica practicada, complicaciones de la inyección intramiocárdica son raros, y los ratones regresar rápidamente a la actividad normal en la recuperación de la anestesia. Siguiendo los pasos descritos en este protocolo, el operador con experiencia básica ecocardiografía puede convertirse rápidamente competente en esta técnica versátil, mínimamente invasivo.
Introducción
La enfermedad cardíaca es la principal causa de muerte tanto para hombres y mujeres en los Estados Unidos, lo que representa 600.000 muertes al año 1. Los modelos murinos de enfermedad cardiovascular son de importancia crítica para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos y para explorar posibles terapias. Infarto de entrega de vectores de terapia génica, las células, los ARN modificados, y otros agentes terapéuticos permisos de investigación de su potencial terapéutico para la enfermedad cardíaca 2-7 tallo. En la actualidad, hay opciones limitadas para la entrega infarto de agentes terapéuticos en modelos de ratón 6. Inyec....
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Protocolo
Todos los pasos descritos se realizaron bajo los protocolos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional del Hospital Infantil de Boston.
1. Preparación
- Realizar la evaluación anatómica y funcional cardiaca por ecocardiografía línea de base antes de comenzar el protocolo de inyección, ya que la posición del transductor fijo óptimo para la inyección intramiocárdica puede no producir las vistas estándar óptimas para delinear la anatomía y la evaluación de la función.
- La configuración de la inyección se muestra en las Figuras 1A-1C. Coloque una jeringa vacía con una aguja enfundada,....
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Resultados
Inyección intramiocárdica murino con colorante azul o microesferas fluorescentes
La inyección de colorante azul de Evan es útil para fines de capacitación. Pronto después de la inyección, la eutanasia el ratón y quitar el corazón para visualizar la ubicación de la inyección de colorante azul. Figura 5 muestra un ejemplo de una inyección de éxito, con colorante azul de infiltrarse en el miocardio a nivel muscular mediados papilares (Figura 5A, región encerrada p.......
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Discusión
Los biológicos se pueden entregar al miocardio por inyección intramiocárdica directa, inyección intrapericárdica, o administración indirecta a través del torrente sanguíneo. Ensayos de terapia basados en células recientes en modelos de infarto de miocardio han descrito un enfoque de toracotomía abierta a la entrega de la sustancia inyectada 12-14. Un factor importante en el éxito de una intervención terapéutica de miocardio depende de la elección de la ruta de entrega. La dosis más alta de locales biológico.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
TWP fue financiado por la Beca de Viaje Brian McGovern de la Sociedad Irlandesa de Cardiología. WTP fue financiado por R01 HL095712 y un Premio al Investigador Establecido de la AHA.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Sistema de imágenes de ultrasonido Vevo 2100 | Visualsonics | ||
| Vevo Integrated Rail System III | Transductor Visualsonics | ||
| Microscan MS400 | Transductor Visualsonics | ||
| Microscan MS550D | Visualsonics | ||
| PrecisionGlide Agujas BD | 305128 | 30 G x 1 pulgada/2,5 cm | |
| Jeringa de punta deslizante de 1 cc | Exel International | 26048 | o equivalente |
| Gastight 50 μ l jeringas de vidrio | Hamilton | 1705 | |
| Tinción azul tripán (0.4%) | Gibco | 15250 | o equivalente |
| Isoflurano | Baxter | AHN3640 | o equivalente |
| Aquasonic 100 | Parker Laboratories | (01-08) | o |
| equivalente Microesferas de poliestireno (fluorescente rojo) | Life Technologies | F-8842 | o equivalente |
Referencias
- Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-117 Forthcoming.
- Strauer, B. E., Steinhoff, G. 10 years of intracoronary and intramyocardial bone marrow stem cell therapy of the heart: fro....
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Reimpresiones y permisos
