Con el fin de comprender los mecanismos celulares y moleculares que subyacen a la formación de neotejido y el desarrollo de estenosis en las válvulas del corazón de la ingeniería tisular, se desarrolló un modelo murino de trasplante heterotópico de válvula cardiaca. Una válvula cardíaca pulmonar fue trasplantado al receptor mediante la técnica de trasplante cardíaco heterotópico.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
El trasplante de la válvula pulmonar Utilizando un modelo de ratón de heterotópico trasplante cardiaco
En este artículo
Resumen
Resumen
Ingeniería tisular las válvulas del corazón, válvulas especialmente descelularizado, están empezando a cobrar impulso en el uso clínico de la cirugía reconstructiva con resultados mixtos. Sin embargo, los mecanismos celulares y moleculares de la neotejido desarrollo, engrosamiento de la válvula, y el desarrollo de estenosis no son investigados extensivamente. Para responder a estas preguntas, hemos desarrollado un modelo murino heterotópico de corazón Válvula de trasplante. Una válvula de corazón fue cosechada de un ratón donante y se trasplanta a la válvula de un ratón donante corazón. El corazón con una nueva válvula se trasplantó heterotópicamente a un ratón receptor. El corazón trasplantado mostró su propio latido del corazón, independiente de los latidos del corazón del destinatario. El flujo de sangre se cuantificó usando un sistema de ultrasonido de alta frecuencia con un Doppler pulsado. El flujo a través de la válvula pulmonar implantado mostró delante de flujo con regurgitación mínimo y el flujo pico fue cerca de 100 mm / seg. Este modelo murino de trasplante de válvulas cardíacas es highly versátil, por lo que puede ser modificado y adaptado para proporcionar diferentes entornos hemodinámicas y / o se puede utilizar con varios ratones transgénicos para estudiar el desarrollo neotejido en una válvula de corazón de ingeniería tisular.
Introducción
Defectos cardiovasculares congénitos son una de las principales causas de mortalidad infantil en el mundo occidental 1,2. Entre ellos, la estenosis de la válvula pulmonar y defectos en las válvulas aórticas bicúspides son una forma que ocurre con frecuencia 3. La cirugía de reemplazo de válvulas cardíacas es una elección habitual de cirugías reconstructivas; Sin embargo, las complicaciones, incluyendo la estenosis y la calcificación de la válvula del corazón, y la dependencia de por vida con anticoagulantes son una fuente importante de enfermedad crónica y muerte 4-7. Por otra parte, la falta de potencial de crecimiento requiere cirug....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Nota: Todos los animales procedimientos fueron aprobados por el Comité del Hospital Institucional Cuidado de Animales y Uso de los Niños de Nationwide.
1. Válvula pulmonar del corazón de la cosecha de un donante de la válvula del corazón del ratón
- Autoclave todas las herramientas quirúrgicas antes de la cirugía: 1x tijeras finas, 3x fórceps micro, pinzas vasculares micro de 2x, abrazadera 1x fórceps soliciten, sostenedor 1x micro aguja, tijeras de primavera 1x, 1x retractor.
- Un 6-8 semanas de edad hembra C57BL / 6 de ratón se utiliza como un donante de válvula cardíaca pulmonar. Retire el ratón de su jaula y se pesa, ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
La Figura 1 ilustra los esquemas de la modelo de trasplante de válvula de corazón usando el trasplante heterotópico de corazón. La válvula de corazón fue cosechada de un corazón de un donante y se implanta en un corazón de un segundo ratón donante. Entonces el corazón con la nueva válvula cardíaca se implanta en el abdomen de un ratón receptor. La figura 2 muestra una ilustración del corazón implantado en el espacio abdominal (A), justo después de trasplante de corazón .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
La tasa de mortalidad de este procedimiento es cercana al 20%, que se debe principalmente a la hemorragia en el lugar de trasplante de PV y anastomosis en la aorta del donante a la aorta abdominal destinatario. En la mayoría de los casos, la tasa de mortalidad disminuye significativamente después de la cirugía 48 horas. Los ratones de supervivencia mostraron fuertes latidos del corazón y el flujo de sangre a través de la PV implantado. Todo el proceso tarda cuatro horas para un cirujano experimentado micro. Tomará aprox.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por una subvención del NIH (HL098228 SR1) de CKB.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Microscopio | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Femenino | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 semanas |
| Inyección de clorhidrato de ketamina | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Solución estéril de xilacina | Akorn Inc. | NADA # 139-236 | |
| Ketoprofeno | Fort Dodge Salud Animal | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofeno | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Heparina | Sódica Sálmina Productos farmacéuticos | NDC 25021-400 | |
| Solución salina (Cloruro de sodio estéril al 0.9%) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| Inyección de cloruro de sodio al 0,9% | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Ungüento oftálmico de vaselina | Productos veterinarios Dechra | NDC 17033-211-38 | |
| Almohadillas de preparación de yodo | Triad Desechables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Almohadillas de preparación de alcohol | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Aplicadores con punta de algodón | Fisher Sientific | 23-400-118 | |
| Tijera | fina FST | 14028-10 | |
| Micro-Adson Pinza | FST | 11018-12 | |
| Pinza de aplicación de pinza | FST | 00072-14 | |
| S& T Pinza vascular | FST | 00396-01 | |
| Tijeras de muelle | FST | 15008-08 | |
| Retractores Colibrí | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 Pinza | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - Pinza fina | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 Pinza | FST | 11251-35 | |
| Tish Portaagujas/ Pinzas | Micrinas | MI1540 | |
| Sutura de Monofilamento de Poliamida Negra, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | Para suturar el injerto |
| Sutura de Monofilamento de Poliamida Negra, 6-0 | AROSurgido Instruments | SN-1956 | Para la musculatura y el cierre de la piel |
| Esponjas no tejidas | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Hemostático reabsorbible | Ethicon | 1961 | |
| 1 ml Jeringa | BD 309659 | ||
| 3 ml Jeringa | BD | 309657 | |
| 10 ml Jeringa | BD | 309604 | |
| 18 G 1 1/2 in, Aguja | BD | 305190 | |
| 25 G 1 pulg., Aguja | BD | 305125 | |
| 30 G 1 pulg., Aguja | BD | 305106 | |
| Circulador de Agua Caliente | Gaymar | TP-700 | |
| Almohadilla Calentadora | Gaymar | TP-22G | |
| Recortadora | Wahl | 9854-500 | |
| VEVO2100 Ultrasonido de Alta Frecuencia | VisualSonics | http://www.visualsonics.com/vevo2100 | El número de catálogo y el precio se pueden adquirir de los representantes de ventas. |
| Gel de transmisión de ultrasonidos | Parker Laboratories, INC. | 01-02 | |
| Sistema de anestesia de mesa para animales de laboratorio | VetEquip, INC. | ||
| Isoflurano | Baxter | 1001936060 |
Referencias
- Polito, A., et al. Increased morbidity and mortality in very preterm VLBW infants with congenital heart disease. Intens Care Med. 39, 1104-1112 (2013).
- Wren, C., Reinhardt, Z., Khawaja, K. Twenty year trends in diagn....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
