Summary
यहाँ हम एक पार्श्व नजरिए से ड्रोसोफिला वयस्क और लार्वा उत्परिवर्ती phenotypes की उच्च गुणवत्ता वाले डिजिटल वीडियो प्राप्त करने के लिए एक सरल और व्यापक रूप से सुलभ माइक्रोस्कोपी तकनीक का वर्णन.
Abstract
ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर तंत्रिका तंत्र के समारोह के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली प्रयोगात्मक मॉडल प्रणाली है. तंत्रिका तंत्र की शिथिलता का कारण है कि जीन म्यूटेशन अक्सर व्यवहार्य लार्वा और पर्याप्त रूप से पाठ के साथ वर्णन या पूरी तरह से एक भी फोटो छवि के साथ प्रतिनिधित्व करने के लिए मुश्किल हो जाता है कि हरकत दोषपूर्ण phenotypes है कि वयस्कों का उत्पादन. वैज्ञानिक प्रकाशन की वर्तमान मोड, हालांकि, एक पांडुलिपि साथ देने के लिए पूरक सामग्री के रूप में डिजिटल वीडियो मीडिया के प्रस्तुत करने का समर्थन. यहाँ हम एक पार्श्व नजरिए से दोनों ड्रोसोफिला लार्वा और वयस्क phenotypes की उच्च गुणवत्ता वाले डिजिटल वीडियो प्राप्त करने के लिए एक सरल और व्यापक रूप से सुलभ माइक्रोस्कोपी तकनीक का वर्णन. यह न्यायपालिका लोकोमोटिव व्यवहार में अवलोकन और सूक्ष्म भेद और विविधताओं के विश्लेषण की अनुमति देता है क्योंकि एक ओर देखने से लार्वा और वयस्क हरकत का वीडियो फायदेमंद है. हम सफलतापूर्वक कल्पना और aberran यों तकनीक का इस्तेमाल किया हैटी संवारने सहित वयस्क उत्परिवर्ती phenotypes और व्यवहार के अलावा, तीसरे instar लार्वा में व्यवहार रेंगने.
Introduction
आम फल ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर मक्खी तंत्रिका तंत्र 1-3 के समारोह के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली प्रयोगात्मक मॉडल प्रणाली है. विकासवादी संरचना और मनुष्यों के साथ तंत्रिका तंत्र के समारोह के संरक्षण, साथ ही आनुवंशिक हेरफेर की आसानी और आनुवंशिक उपकरणों की एक विशाल सरणी ड्रोसोफिला मानव neurodegenerative रोगों 4 मॉडल के प्रीमियर जीव बनाता है. तंत्रिका तंत्र की शिथिलता का कारण है कि जीन म्यूटेशन अक्सर बिगड़ा हरकत से व्यवहार्य उत्परिवर्ती लार्वा और वयस्क ड्रोसोफिला में परिणाम. तंत्रिका तंत्र दोषपूर्ण म्यूटेंट में मनाया phenotypes हरकत, न्यायपालिका समन्वय, और वयस्कों में मानसिक आंदोलनों की दर है, साथ ही शरीर दीवार मांसलता की क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला संकुचन में घाटे, और लार्वा का आंशिक पक्षाघात कम करना शामिल है. इन phenotypes उच्च throughput आनुवंशिक स्क्रीन और उत्परिवर्ती लार्वा 5 की हरकत assays के विकास में शोषण किया गया है, हरकत हानि बढ़ाता है और तंत्रिका तंत्र के समारोह के लिए आवश्यक जीन की पहचान करने के उद्देश्य से 6 और वयस्क 7-10 ड्रोसोफिला. इन तरीकों लार्वा और वयस्क लोकोमोटिव व्यवहार बढ़ाता के लिए अत्यंत उपयोगी हैं, वे एक विशिष्ट न्यायपालिका व्यवहार के बारे में गुणात्मक जानकारी देने के लिए असफल. उत्परिवर्ती तीसरे instar लार्वा एक व्यवहार परख में बदल हरकत मापदंडों प्रदर्शन कर सकते हैं, जबकि इस रेंगने चक्र के दौरान लयबद्ध क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला संकुचन में परिवर्तन, समन्वय की सामान्य कमी, या पीछे शरीर का आंशिक पक्षाघात का परिणाम है अगर उदाहरण के लिए, यह स्पष्ट नहीं हो सकता है दीवार मांसलता. यहाँ हम एक पार्श्व नजरिए से ड्रोसोफिला वयस्क और लार्वा लोकोमोटिव phenotypes की उच्च गुणवत्ता वाले डिजिटल वीडियो प्राप्त करने के लिए एक सरल और व्यापक रूप से सुलभ माइक्रोस्कोपी तकनीक का वर्णन. एक पार्श्व नजरिए से अधिग्रहीत डिजिटल वीडियो locomotiv में सूक्ष्म भेद का प्रत्यक्ष अवलोकन और विश्लेषण की अनुमति देता हैएक अधिक सूचनात्मक ओर देखने के उन्मुखीकरण से ई व्यवहार.
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Protocol
1 स्टीरियो माइक्रोस्कोप प्रणाली
नोट: इस प्रोटोकॉल आसानी से वीडियो प्राप्त करने की क्षमता के साथ एक डिजिटल कैमरा के लिए मिलकर लगभग किसी भी स्टीरियो माइक्रोस्कोप प्रणाली के लिए अनुकूल है, विवरण (सामग्री / उपकरण की तालिका) हमारी प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता प्रणाली पर प्रदान की जाती हैं.
- एक वाणिज्यिक डिजिटल कैमरा के लिए मिलकर एक trinocular स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग कर डिजिटल वीडियो मोल.
- युगल स्टीरियो माइक्रोस्कोप की trinocular बंदरगाह के लिए वाणिज्यिक डिजिटल कैमरा करने के लिए, स्टीरियो माइक्रोस्कोप के phototube बंदरगाह के ½x सी माउंट हटाने और एक 1X सी माउंट के साथ बदलें.
- 1X सी माउंट करने के लिए एक डिजिटल कैमरा युग्मक (43 मिमी धागा) माउंट.
- कैमरा युग्मक को माउंट दो कदम नीचे के छल्ले, 48 मिमी 58 मिमी, और 43 मिमी 48 मिमी, डिजिटल कैमरे के लिए एक लेंस एडाप्टर किट के लिए डिजिटल कैमरा युग्मक से कनेक्शन पुल करने के लिए.
- लेंस एडाप्टर किट के लिए डिजिटल कैमरा माउंट.
- लगभग 12X की एक संयुक्त बढ़ाई (प्रति सेकंड 30 फ्रेम, 640 x 480 पिक्सल) के लिए माइक्रोस्कोप बढ़ाई और डिजिटल कैमरा सेट की ऑप्टिकल ज़ूम के साथ वीडियो मोल. नोट: स्टीरियो माइक्रोस्कोप की बढ़ाई trinocular बंदरगाह के नव reconfigured 1X सी माउंट के अनुसार मुआवजा दिया जाना चाहिए.
2 इमेजिंग ड्रोसोफिला तीसरे instar लार्वा
- टेप मार्कर टोपी की ओर लगभग रह रहे हैं इतना है कि एक डिजिटल कैमरा के लिए मिलकर एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप की काली चरण थाली करने के लिए एक स्थायी मार्कर ⅓ कैमरा एलसीडी मॉनिटर में मनाया देखने के ऊर्ध्वाधर क्षेत्र की ¼ को. वे रंग कोड के लिए इस्तेमाल किया और imaged किया जा रहा लार्वा की जीनोटाइप अंतर किया जा सकता है कि रंग की एक श्रेणी में आते हैं क्योंकि लार्वा इमेजिंग प्रदर्शन करने के लिए मंच के रूप में मार्कर में सबसे ऊपर का प्रयोग करें.
- एक अच्छी बात के साथ मार्कर शीर्ष की सतह पर डिजिटल कैमरा एलसीडी मॉनिटर में मनाया देखने के क्षेत्र हदबंदीमार्कर.
- छवि के लिए एक तीसरे instar लार्वा का चयन करें. तीसरे instar लार्वा के चयन के लिए मापदंड शरीर की लंबाई, जीवन चक्र के लार्वा चरण, पूर्वकाल और कूल्हों spiracles की उपस्थिति के दौरान खाद्य स्रोत से उद्भव, और मुंह तंत्र 11 के जबड़े हुक की संरचना था. लार्वा पानी में अच्छी तरह से धोने से साफ है सुनिश्चित करें.
- एक फाइबर ऑप्टिक प्रकाश प्रणाली से प्रकाश के साथ ऊपर से स्थायी मार्कर शीर्ष मंच रोशन. इष्टतम रोशनी प्रदान करने के लिए घटना के प्रकाश के कोण समायोजित करें.
- स्थायी मार्कर शीर्ष के किनारे पर खुर्दबीन ध्यान दें. डिजिटल वीडियो प्राप्त करने शुरू करो.
- देखने के क्षेत्र की ओर का सामना करना पड़ लार्वा (चित्रा 1) के पूर्वकाल के साथ, बस देखने के क्षेत्र के बाहर, लगभग 75 डिग्री की दूरी पर खड़ी धुरी से मार्कर कैप की तरफ लार्वा रखें. नोट: मार्कर कैप की तरफ लार्वा की नियुक्ति वीं के रिकॉर्ड आंदोलन करने के लिए कैमरे की अनुमति देता हैएक पार्श्व नजरिए से ई लार्वा. यह वे मार्कर टोपी की ओर गिर नहीं है तो पानी से नम लार्वा रखने में मदद करता है. केयर यह क्षेत्र भर में क्रॉल के रूप में अत्यधिक मात्रा में लार्वा का पालन करना होगा के रूप में बहुत अधिक पानी का उपयोग नहीं करने के लिए, हालांकि, प्रयोग किया जाना चाहिए.
- धीरे प्रहार और देखने के क्षेत्र भर में क्रॉल करने के लिए यह मजबूर करने के लिए एक छोटे तूलिका के साथ लार्वा को ठेस. लार्वा शायद ही कभी सहयोग और वे सीधे मैदान में क्रॉल से पहले अक्सर शुरुआती बिंदु के लिए कई बार लौट सकता है के रूप में धीरज रखो.
- रिकॉर्ड लगभग 10-15 निर्बाध डिजिटल वीडियो फुटेज और फसल का न्यूनतम और डिजिटल वीडियो संपादन सॉफ्टवेयर के साथ सभी अनावश्यक फुटेज के बाद अधिग्रहण को हटा दें.
3 इमेजिंग वयस्क ड्रोसोफिला
- एक डिस्पोजेबल 1.5 मिलीलीटर स्पेक्ट्रोस्कोपी polystyrene क्युवेट में एक भी वयस्क ड्रोसोफिला रखें.
नोट: वयस्क ड्रोसोफिला के सीओ 2 anaesthetization तुरंत एक बिहेव से पहलेioral विश्लेषण प्रोटोकॉल परिणाम 12 समझौता कर सकते हैं. वयस्क ड्रोसोफिला एक व्यवहार परीक्षण 13 में प्रदर्शन से पहले सीओ 2 anaesthetization से उबरने के लिए एक 24 घंटे की अवधि के लिए दिया जाना है कि यह सिफारिश की है. - एक छोटे से कपास की गेंद के साथ क्युवेट के अंत में प्लग करें. कपास की गेंद लार्ज कैप स्थान पर कब्जा करने के लिए पर्याप्त तंग पैक किया जाता है सुनिश्चित करें और क्युवेट की कम मात्रा डिब्बे में मक्खी किनारा.
- एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप की सफेद चरण थाली पर क्युवेट प्लेस और ठीक से डिजिटल कैमरा एलसीडी मॉनिटर में मनाया देखने के क्षेत्र के साथ क्युवेट की कम मात्रा डिब्बे संरेखित.
- एक फाइबर ऑप्टिक प्रकाश प्रणाली से प्रकाश के साथ ऊपर से क्युवेट रोशन. इष्टतम रोशनी प्रदान करने के लिए घटना के प्रकाश के कोण समायोजित करें.
- खुर्दबीन फोकस और डिजिटल वीडियो प्राप्त करने लगते हैं.
- रिकॉर्ड लगभग 30-45 निर्बाध डिजिटल वीडियो फुटेज और फसल का न्यूनतम और सभी अनावश्यक हटानेडिजिटल वीडियो संपादन सॉफ्टवेयर के साथ दृश्य के बाद अधिग्रहण.
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Representative Results
हम सफलतापूर्वक अधिग्रहण और stathmin जीन के समारोह के नुकसान (चित्रा 2) 14 के साथ जुड़े लार्वा व्यवहार फेनोटाइप यों इस तकनीक का इस्तेमाल किया है. stathmin जीन घुलनशील ट्यूबिलिन के पूल से ट्यूबिलिन dimers विभाजन कि एक microtubule नियामक प्रोटीन encodes, और सूक्ष्मनलिकाएं बांध और उनके disassembly 15,16 को बढ़ावा देता है. Stathmin समारोह परिधीय नसों 14 के axons में सूक्ष्मनलिकाएं की अखंडता को बनाए रखने के लिए आवश्यक है. पीछे शरीर खंडों रेंगने चक्र के दौरान मांसपेशियों में संकुचन की प्रत्येक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला लहर के बाद ऊपर की ओर फ्लिप जिसमें एक phenotype में ड्रोसोफिला तीसरे instar लार्वा परिणामों में stathmin गतिविधि का विघटन. यह पीछे पक्षाघात या 'पूंछ फ्लिप' फेनोटाइप दोषपूर्ण axonal परिवहन की एक बानगी है. हम अलग अलग सात के तीसरे instar लार्वा में पीछे पक्षाघात phenotype के penetrance और गंभीरता मात्रा निर्धारित <उन्हें> क्षैतिज पूंछ ऊपर कोण को मापने के द्वारा उत्परिवर्ती जीनोटाइप stathmin रेंगने चक्र (1 टेबल) के दौरान उठाया गया था. लार्वा का प्रदर्शन अगर पूंछ पूंछ क्षैतिज ऊपर कम से कम 40 ° उठाया गया था, तो एक हल्के पूंछ फ्लिप रेंगने, और कोई पूंछ फ्लिप जब क्षैतिज ऊपर से अधिक 40 डिग्री उठाया गया था अगर लार्वा एक मजबूत पूंछ फ्लिप प्रदर्शन करने के लिए निर्धारित किया गया है एक सामान्य रेंगने व्यवहार.
डिजिटल कैमरे के साथ एक बुनियादी स्टीरियो माइक्रोस्कोप प्रणाली का आंकड़ा एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग एक पार्श्व नजरिए से डिजिटल वीडियो के अधिग्रहण के लिए एक स्थायी मार्कर टोपी मंच पर तीसरे instar लार्वा की 1 स्थिति. ओर देखने trinocular बंदरगाह पर मुहिम शुरू की. इनसेट बढ़ाई खुर्दबीन मंच को टेप एक स्थायी मार्कर के उन्मुखीकरण और स्थिति का पता चलता है एक पार्श्व नजरिए से न्यायपालिका व्यवहार की डिजिटल वीडियो के अधिग्रहण के लिए मार्कर टोपी पर तीसरे instar लार्वा. छवि में अंतरिक्ष के तीन आयामों में परिभाषित कर रहे हैं; एक्स अक्ष स्थायी मार्कर की लंबाई चलाता है और खुर्दबीन मंच के समानांतर है, वाई अक्ष खुर्दबीन मंच को एक्स अक्ष और समानांतर करने के लिए खड़ा है, और z-अक्ष के लिए मार्कर टोपी से खड़ी है उद्देश्य लेंस और सूक्ष्मदर्शी मंच को सीधा. एक तीसरे instar लार्वा क्षेत्र की ओर का सामना करना पड़ लार्वा के पूर्वकाल साथ, सिर्फ डिजिटल कैमरा के देखने के क्षेत्र के बाहर, लगभग 75 डिग्री दूर Y-अक्ष की दिशा में खड़ी Z-अक्ष से मार्कर कैप की तरफ रख दिया गया है देखने की. मार्कर कैप की तरफ लार्वा की नियुक्ति स्टीरियो माइक्रोस्कोप का डिजिटल कैमरा एक पार्श्व नजरिए से क्षेत्र भर में लार्वा के आंदोलन रिकॉर्ड करने के लिए अनुमति देता है.
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चित्रा प्रतिनिधि परिणाम के 2 छवियाँ. ड्रोसोफिला लार्वा (ए, बी) और वयस्क की डिजिटल वीडियो से प्रतिनिधि छवियों (सी, डी) phenotypes और व्यवहार एक पार्श्व नजरिए से हासिल कर ली. प्रत्येक छवि एक वीडियो अभी भी अधिग्रहीत डिजिटल वीडियो फ़ाइलों से निकाले फ्रेम है. (ए) wildtype तीसरे instar लार्वा प्रदर्शनी एक फ्लैट शरीर मुद्रा एक सब्सट्रेट साथ रेंगने है. (बी) stathmin जीन प्रदर्शनी एक न्यायपालिका रेंगने में एक परिवर्तन के लिए तीसरे instar लार्वा समयुग्मक पीछे मांसलता के पक्षाघात का संकेत पूंछ फ्लिप व्यवहार,. (सी) wildtype वयस्क ड्रोसोफिला के पंख मक्खी चलता है के रूप में. (डी) वयस्क ड्रोसोफिला, एक अज्ञात उत्परिवर्तन के लिए समयुग्मक, पर उनके पंख पकड़ शरीर के खिलाफ फ्लैट आयोजित कर रहे हैं सामान्य से लगभग 45 डिग्री के कोण. न्यायपालिका लार्वा और वयस्क फेनोटाइप दोनोंवर्णित है सबसे अच्छा मनाया और एक पार्श्व ओर देखने के नजरिए से अधिग्रहीत डिजिटल वीडियो के साथ सूचित कर रहे हैं. पैमाने बार = 1 मिमी पैनल में और बी. यह आंकड़ा डंकन एट अल से संशोधित किया गया है., 2013.
| पोस्टीरियर पक्षाघात phenotype की गंभीरता | ||||
| जीनोटाइप | n | कोई पूंछ फ्लिप | हल्के तेल फ्लिप (<40 डिग्री) | मजबूत पूंछ फ्लिप (> 40 डिग्री) |
| wildtype | 150 | 100.0% (एन = 150) | 0.0% (एन = 0) | 0.0% (एन = 0) |
| stai B200 / + | 130 | 100.0% (एन = 130) | 0.0% (एन = 0) | 0.0% (एन = 0) |
| stai rdtp / + | 140 | 100.0% (एन = 140) | 0.0% (एन =) | 0.0% (एन = 0) |
| DF (2L) Exel6015 / + | 120 | 100.0% (एन = 120) | 0.0% (एन = 0) | 0.0% (एन = 0) |
| stai B200 | 120 | 23.3% (N = 28) | 23.3% (N = 28) | 53.4% (N = 64) |
| stai B200 / DF (2L) Exel6015 | 101 | 10.9% (N = 11) | 21.8% (N = 22) | 67.3% (N = 68) |
| stai rdtp | 125 | 16.0% (N = 20) | 32.0% (N = 40) | 52.0% (N = 65) |
| stai rdtp / DF (2L) Exel6015 | 140 | 7.7% (N = 11) | 23.7% (N = 33) | 68.6% (N = 96) |
तालिका 1 penetrance और की गंभीरता(stai) उत्परिवर्ती ड्रोसोफिला तीसरे instar लार्वा stathmin में मनाया पक्षाघात phenotype के पीछे. उत्परिवर्ती ड्रोसोफिला तीसरे instar लार्वा stathmin के पीछे पक्षाघात phenotype के penetrance और गंभीरता से रन बनाए और एक पार्श्व नजरिए से व्यवहार के डिजिटल वीडियो प्राप्त करने और कोण को मापने के द्वारा मात्रा निर्धारित किया गया था पूंछ रेंगने चक्र के दौरान क्षैतिज रेंगने विमान ऊपर उठाया गया था कि. लार्वा पूंछ कम से कम 40 डिग्री क्षैतिज विमान से ऊपर उठाया गया था अगर पूंछ क्षैतिज विमान और एक हल्के पूंछ फ्लिप ऊपर से अधिक 40 डिग्री उठाया गया था कि अगर एक मजबूत पूंछ फ्लिप होने के रूप में रन बनाए थे. एक सामान्य रेंगने व्यवहार का प्रदर्शन लार्वा कोई पूंछ फ्लिप होने के रूप में रन बनाए थे. कम से कम एक सौ लार्वा के रेंगने व्यवहार का परीक्षण प्रत्येक जीनोटाइप के लिए विश्लेषण किया गया था. इस तालिका में डंकन एट अल से संशोधित किया गया है., 2013.
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Discussion
तंत्रिका तंत्र समारोह के अध्ययन के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर की ताकत को काफी हद तक उपलब्ध शक्तिशाली आनुवंशिक उपकरणों के अभिसरण और विकसित मजबूत व्यवहार assays के व्यापक सरणी से उपजा है. यहाँ हम एक पार्श्व नजरिए से ड्रोसोफिला वयस्क और लार्वा लोकोमोटिव phenotypes की उच्च गुणवत्ता वाले डिजिटल वीडियो प्राप्त करने के लिए एक सरल और व्यापक रूप से सुलभ माइक्रोस्कोपी तकनीक मौजूद है. हम सफलतापूर्वक विशेषताएँ और पीछे पक्षाघात की गंभीरता को यों इस दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया है 'पूंछ फ्लिप' सीधे पूंछ रेंगने चक्र 14 के दौरान क्षैतिज अक्ष से उठाया गया था कि अधिकतम कोण को मापने के द्वारा तंत्रिका संबंधी तीसरे instar लार्वा म्यूटेंट में मनाया phenotypes. यहाँ प्रस्तुत दृष्टिकोण का लाभ वीडियो न्यायपालिका लोकोमोटिव व्यवहार का प्रत्यक्ष अवलोकन और विश्लेषण की अनुमति, एक पार्श्व नजरिए से हासिल कर ली है कि है, अक्सर तंत्रिका संबंधी लार्वा और एक में मनायाdult म्यूटेंट, एक अधिक जानकारीपूर्ण 'ओर देखने' उन्मुखीकरण से. नतीजतन, लार्वा ड्रोसोफिला में क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला मांसपेशियों में संकुचन, और वयस्क ड्रोसोफिला में न्यायपालिका चाल phenotypes के दृश्य और अधिक आसानी से मनाया और विश्लेषण कर रहे हैं. इस तकनीक की एक सीमा यह एक उच्च throughput दृष्टिकोण नहीं है. इसके अलावा, विशिष्ट ड्रोसोफिला लार्वा और वयस्क व्यवहार के कारण ही स्टीरियो माइक्रोस्कोप से देखने के क्षेत्र द्वारा afforded प्रतिबंधात्मक ट्रैकिंग क्षेत्र के लिए समय की छोटी अवधि के लिए विश्लेषण किया जा सकता है. क्युवेट कक्ष की मात्रा स्टीरियो माइक्रोस्कोप से देखने के क्षेत्र की तुलना में काफी बड़ा है, के रूप में वयस्क ड्रोसोफिला व्यवहार की वीडियो प्राप्त जब यह विशेष रूप से समस्याग्रस्त हो सकता है. हम क्युवेट चैम्बर मात्रा को कम करने और वयस्क के आंदोलन को देखने के क्षेत्र के भीतर निहित एक अंतरिक्ष के लिए उड़ान भरने को प्रतिबंधित करने के लिए कपास और गत्ता सम्मिलित का उपयोग करके इस समस्या को संबोधित किया है. जबकि हमारे आईएम का बहुमतउम्र बढ़ने के तंत्रिका संबंधी लार्वा म्यूटेंट पर ध्यान केंद्रित किया है, हम भी तकनीक को आसानी से इस तरह के प्रेमालाप, शयन, और आक्रामकता के रूप में अन्य ड्रोसोफिला व्यवहार का विश्लेषण शामिल करने के लिए विस्तारित किया जा सकता है, सुझाव है कि सौंदर्य सहित वयस्क उत्परिवर्ती phenotypes और व्यवहार, निरीक्षण करने के लिए तकनीक का इस्तेमाल किया है. यह इस तकनीक अन्य Drosophilidae परिवार के सदस्यों, साथ ही समान आकार के अन्य कीड़ों इमेजिंग के लिए उपयोगी हो सकता है कि संभव है. साथ ही, तकनीक की मामूली संशोधन बड़ा कीट प्रजातियों की इमेजिंग की अनुमति होगी.
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Disclosures
लेखकों कोई प्रतिस्पर्धा हितों है कि अस्तित्व की घोषणा की है.
Acknowledgments
लेखकों वीडियो कथन प्रदान करने के लिए तकनीकी सहायता और समर्थन, जेम्स बार्टन के लिए एलेक्जेंड्रा ओपी स्वीकार करने के लिए इच्छा है, और साथ वीडियो में दिखने के लिए रमोना Flatz और Joellen स्वीनी. इस काम एम.जे. Murdock चैरिटेबल ट्रस्ट (JED को अनुदान संख्या 2012205) द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Trinocular Stereozoom Microscope | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ C-mount was removed and replaced with 1X C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| Digital Camera Coupler (43 mm thread) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| 58 mm to 48 mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR5848 | |
| 48 mm to 43 mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR4843 | |
| Lensmate Adapter Kit for Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| Canon PowerShot G10 Digital Camera | Canon U.S.A., Inc. | ||
| 1.5 ml Spectroscopic Polysterene Cuvette | Denville Scientific | U8650-4 |
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