Aquí, presentamos un protocolo para estudiar la inmunología del rechazo. El modelo quirúrgico presentado reporta un tiempo quirúrgico corto y una técnica concisa. Dependiendo de la combinación de cepa donante-receptor, el riñón trasplantado puede desarrollar rechazo celular agudo o daño crónico del injerto, definido por fibrosis intersticial y atrofia tubular.
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Artículo de método
Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
El rechazo del riñón trasplantado en humanos sigue siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad. El modelo murino de trasplante renal reproduce fielmente los procesos técnicos y patológicos que ocurren en el trasplante renal humano. Aunque existen modelos murinos de rechazo alogénico en órganos distintos del riñón, y son técnicamente más factibles, hay pruebas de que diferentes órganos provocan modos y dinámicas de rechazo dispares, por ejemplo, el curso temporal del rechazo en el aloinjerto cardíaco y renal difiere significativamente en ciertas combinaciones de cepas. Este modelo es una herramienta atractiva por muchas razones, a pesar de sus desafíos técnicos. Dado que los haplotipos de cepas endogámicas de ratón están bien caracterizados, es posible elegir combinaciones de donante y receptor para modelar el rechazo agudo del injerto mediante el trasplante a través de loci MHC de clase I y II. Por el contrario, al trasplantar entre cepas con haplotipos similares, se puede provocar un proceso crónico en el que el riñón del aloinjerto desarrolla fibrosis intersticial y atrofia tubular. Hemos modificado la técnica quirúrgica para reducir el tiempo quirúrgico y mejorar la facilidad de la cirugía, sin embargo, aún queda por superar una curva de aprendizaje para poder replicar fielmente el modelo. Este estudio proporcionará puntos clave en el procedimiento quirúrgico y ayudará en el proceso de establecimiento de esta técnica.
Introducción
El trasplante renal con éxito para el tratamiento de la insuficiencia renal fue descrita por primera vez en 1955 entre los gemelos monocigóticos 1, desde entonces se ha convertido en un revolucionario tratamiento para los pacientes con insuficiencia renal terminal en todo el mundo, ofreciendo mejoras en duración y calidad de vida 2. Sin embargo la supervivencia del injerto a largo plazo se ha visto obstaculizada por una multitud de procesos patológicos que resultan en daños crónica del injerto 3.
El rechazo del riñón trasplantado en el ser humano sigue siendo una causa importante de morbilidad, a pesar de ....
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Protocolo
Ética institucionales nacionales y locales apropiados deben estar en su lugar antes de realizar los experimentos con animales. Específicamente en el Reino Unido se llevaron a cabo los siguientes experimentos bajo los Animales (Procedimientos Científicos) de la Ley de 1986 Cuando dos microcirujanos están disponibles para funcionar a la vez que el cirujano donante debe realizar los pasos 1.1 a 1.16 luego 3.1 a 3.5, mientras que el cirujano realiza receptor 2.1 a 2.8 . Para un solo operador los pasos pueden ser seguidos secuencialmente.
1. Donantes Preparación
Nota: El procedimiento que aquí se presenta es un donan....
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Resultados
Rechazo de aloinjerto renal puede ser evaluada por análisis histológico de parafina embebido en secciones de tejido fijadas con methacarn del riñón trasplantado (Figura 2). El trasplante de riñones entre isoinjerto resultados ratones singénicos en la lesión por reperfusión isquémica renal, sin embargo por 4 semanas, los túbulos se han recuperado y son histológicamente comparables a los riñones nativos. El rechazo agudo puede ser modelado por C57BL / 6 trasplante de riñón en receptores BALB / c, dentro d.......
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Discusión
La manera más bien descrito para realizar la anastomosis arterial es utilizar la aorta distal del donante, con la arteria renal en la continuación, de una manera de extremo a lado a la aorta destinatario. Se describe el uso de un parche de aorta, similar a la creación de reflejo 'Carrell parche' que lleva a cabo en el trasplante de riñón humano que creemos que es más conveniente. Aunque los informes en la literatura de donante y receptor operativo de tiempo son escasos creemos que la utilización de un parche aór.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
La financiación procedente del riñón Research UK, el Colegio Real de Cirujanos de Edimburgo y de la Sociedad Europea de Trasplante de Órganos apoyó este estudio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Instrumentos quirúrgicos | |||
| Tijeras de disección romas Herramientas de | ciencia fina | 14072-10 | Para el corte de piel |
| Tijeras curvas Castoviejo | Herramientas de ciencia fina | 15017-10 | Para corte de tejidos |
| Tijeras de resorte y ndash; rectas | Herramientas de ciencia fina | 15000-08 | suturas |
| Pinzas dentadas 1x2 dientes | Herramientas de ciencia fina | 11021-12 | |
| 2 x Pinzas de punta fina (Dumont No.5) | Herramientas de ciencia fina | 11251-20 | |
| Pinzas angulares de punta fina (Dumont n.º 5/45) | Fine Science Tools | 11253-25 | Para disección roma |
| Pinza curva de punta fina (Dumont n.º 7) | Fine Science Tools | 11273-22 | Útil para pasar alrededor de los vasos |
| Crile Curveed Haemostat | Fine Science Tools | 1300-04 | |
| Aplicador de microclip con bloqueo | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| 2 x Micro serrefines, ancho del resorte 2 mm, longitud de la mordaza 4 mm | Fine Science Tools | 18055-04 | Pinzas microvasculares |
| 2 x Retractor de alambre Colibri de 3 cm | Fine Science Tools | 17000-03 | |
| Portaagujas Castroviejo con cerradura | Fine Science Tools | 120660-01 | |
| Aplicador de pinzas para heridas | Fine Science Tools | 12031-07 | |
| Pinzas para heridas de 7 mm | Fine Science Herramientas | 12032-07 | Retirar de 7 a 10 días después de la cirugía |
| Equipo | |||
| Microscopio óptico OPMI | Carl Zeiss | S100 | |
| Unidad de cauterización térmica con punta fina | Geiger | 150A | |
| Almohadilla electrónica de calor | Cozee Cumfort | n/a | |
| Euroklav 23-S | Melag | n/a | Autoclave |
| Desechable equipo | |||
| 7/O Sutura trenzada de seda | Pearsall | 30514 | |
| 10/O Sutura de Dafilon (poliamida) | B-Braun | ||
| 6/O Vicryl (plygalectin) | Ethicon | W9537 | |
| Aguja biselada regular, 1 pulgada, 21G | Bection, Dickinson and Company | 305175 | Para anastamosis ureteral |
| Aguja biselada regular, 5/8 pulgadas, 25G | Bection, Dickinson and Company | 305122 | |
| Aguja biselada regular, 1/2 pulgada, 30G | Bection, Dickinson and Company | 304000 | |
| Aguja de insulina 1 ml, 29 G | Bection, Dickinson and Company | 324827 | |
| Aguja de insulina 0,3 ml, 30 G | Bection, Dickinson and Company | 324826 | |
| 1 ml punta deslizante de jeringa | Bection, Dickinson and Company 300184 | ||
| 5 ml punta deslizante de jeringa | Bection, Dickinson and Company 302187 | ||
| hisopos de papel Wypall | Kimberley-Clark | L40 | esterilizado en autoclave |
| Yemas de algodón | Johnson and Johnson n | /a | esterilizadas en autoclave |
| Cortinas lisas | Guardian | CB03 | esterilizadas en autoclave |
| Placa de cultivo celular 60mm x 15mm | Corning Incorporated | ||
| Pin dispensador | B-Braun | DP3500L / 413501 | Utilizado con NaCl 0.9% |
| Reactivos y Medicamentos | |||
| (Lacri-Lube) Parafina blanda blanca 57,3%, aceite mineral 42,5% y alcoholes de lanolina 0,2% | Allergan Ltd | 21956GB10X | |
| (Videne) Povidona yodada 10% | Ecolab Ltd | PL 04509/0041 | |
| (Vetalar V) Clorhidrato de ketamina | Pfizer Animal Health | Vm 42058/4165 | solución de 100 mg/ml (dosis 200 mg/kg) |
| (Domitor) Clorhidrato de medetodidina | Orion Pharma | Vm 06043/4003 | 1 mg/ml (dosis 0,5 mg/kg) |
| (Vetergesic) Clorhidrato de bupernorfina | Alsto Animal Health | Vm 00063/4002 | 0,3 mg/ml (dosis 0,05 mg/kg) |
| (Antisedán) Hidrochorro de atipazol | Orion Pharma | Vm 06043/4004 | 5 mg/ml (dosis 2 mg/kg) |
| Solución de la Universidad de Wisconsin | Belzer Bridge to Life | n/a | dosis aproximada 500 microlitros/ratón |
| NaCl 0,9% | Baxter | FKE1323 | |
| sulfato de heparina | no patentado | N/A | 5000 unidades/ml (dosis 5 unidades/ratón) |
Referencias
- Guild, W. R., Harrison, J. H., Merrill, J. P., Murray, J. Successful homotransplantation of the kidney in an identical twin. Trans. Am. Clin. Climatol Assoc. 67, 167-173 (1955).
- Wolfe, R. A., et al.
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Reimpresiones y permisos
