Evaluación de la viabilidad de la inyección de grasa humana en ratones desnudos con micro-tomografía computarizada

Resumen

El injerto de grasa es una técnica esencial para reconstruir los déficits de tejidos blandos. Sin embargo, sigue siendo un procedimiento impredecible caracterizado por una supervivencia variable del injerto. Nuestro objetivo era diseñar un modelo de ratón que utilizara un nuevo método de imagen para comparar la retención de volumen entre diferentes técnicas de preparación y administración de injertos de grasa.

Resumen

Trasplante de grasa es una herramienta vital en el arsenal del cirujano para el tratamiento de los déficits de los tejidos blandos de todo el cuerpo. La grasa es el relleno de tejido blando ideales, ya que es fácilmente disponible, fácil de obtener, de bajo costo, e inherentemente biocompatible. ¹ Sin embargo, a pesar de su creciente popularidad, el injerto de grasa se ​​ve obstaculizada por resultados impredecibles y la supervivencia variable de injerto, con tasas de retención publicados que van desde 10 -80%. ^1-3

Para facilitar las investigaciones sobre el injerto de grasa, por lo tanto, hemos desarrollado un modelo animal que permite el análisis en tiempo real de la retención de volumen de grasa inyectada. Brevemente, una pequeña incisión en el cuero cabelludo de un CD-1 de ratón desnudo y 200-400 l de lipoaspirado procesado se coloca sobre el cráneo. El cuero cabelludo es elegido como el sitio receptor debido a su ausencia de grasa subcutánea nativo, y debido a la excelente contraste de fondo proporcionada por la bóveda craneal, que ayuda enel proceso de análisis. La tomografía computarizada de Micro (micro-CT) se utiliza para explorar el injerto al inicio del estudio y cada dos semanas a partir de entonces. Las imágenes de TC se reconstruyen, y un software de imagen se utiliza para cuantificar los volúmenes de injerto.

Tradicionalmente, las técnicas para evaluar el volumen de grasa injerto han necesitado la eutanasia del animal estudio para proporcionar una sola evaluación del peso del injerto y el volumen de medición física ex vivo. Comparaciones bioquímicos e histológicos han requerido igualmente el animal estudio que ser sacrificados. Esta técnica de imagen descrito ofrece la ventaja de visualizar y cuantificar objetivamente el volumen en múltiples momentos después del injerto inicial sin tener que sacrificar el animal estudio. La técnica está limitada por el tamaño del injerto capaz de ser inyectado como la piel injertos más grandes riesgos y necrosis grasa. Este método tiene utilidad para todos los estudios que evalúan la viabilidad del injerto de grasa y retención de volumen. Es particularmente bien adaptado a providing de una representación visual de los injertos de grasa y después de los cambios de volumen en el tiempo.

Introducción

Los defectos de los tejidos blandos surgen de una variedad de causas que incluyen traumatismos, resección de tumores, envejecimiento y anomalías congénitas. Pueden ser debilitantes para los pacientes y representan uno de los problemas más comunes, pero desafiantes, para los cirujanos reconstructivos. Existen muchos métodos para tratar las deficiencias de los tejidos blandos, como los colgajos locales y libres, las inyecciones de colágeno y los rellenos sintéticos. ^4-8 Sin embargo, desde su primer uso documentado por Neuber en 1893¹, la transferencia de grasa autóloga sigue siendo el estándar de oro para la reparación de los déficits de tejidos bl....

Protocolo

NOTA: Los protocolos experimentales y formularios de consentimiento de los pacientes para la obtención de grasa fueron revisados ​​y aprobados por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad de Stanford (Protocolo # 2188). Todos los animales procedimientos fueron aprobados por el grupo administrativo de Stanford en Laboratorio Animal Care (APLAC) en virtud del protocolo # 9999. Todos los experimentos se llevaron a cabo con estricto apego a la seguridad de los animales y las directrices cuidado humano.

1. Fat cosecha

1. Usando el procedimiento Coleman ^17-19, obtener tejido adiposo humano desde el abdomen, flanco....

Resultados

Injertos de grasa disminuyeron progresivamente en volumen durante el curso de estudio, resultando en 62.2% de supervivencia media en la Semana 8. (Figura 4A) ²⁴ A la finalización de la exploración Semana 8, cada injerto de grasa se ​​extrajo en una sola pieza. Se utilizó una prueba Wilcoxan suma de rangos para comparar la diferencia entre las mediciones de volumen de los injertos de grasa obtenidos por cualquiera de las micro-CT o calculados a partir de la masa física. No se encontraron difer.......

Discusión

Hasta este punto, la mayoría de los investigadores se han basado en modalidades no de imagen para cuantificar la supervivencia a largo plazo de los injertos de grasa, pero estos métodos requieren el sacrificio del animal estudio y producir una sola medición. ^3,10-12 Nuestro estudio representa un método de análisis mejorado que permite objetivo, la cuantificación en tiempo real de grasa supervivencia del injerto en un modelo de ratón.

Crítico en este proceso es garantizar que los r.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
lipoaspirada
	Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA
Tubos cónicos de 50 ml	BD Biosciences, San José, CA
Ratones desnudos CD-1 (Crl:CD1-Foxn1nu)	Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA
Isoflurano	Henry Schein, Dublín, OH
2.5% Betadine	Purdue Pharma, L.P., Stamford, CT
70% Solución de etanol	Gold Shield, Hayward, CA
Jeringa Luer-Lock de 1 cc	BD Biosciences, San José, CA
Cánula de calibre 14	Shippert Medical, Centennial, CO
Pinzas	Fine Science Tools, Heidelberg, Alemania
Tijeras de tenotomía	Fine Science Tools, Heidelberg, Alemania
6-0 sutura de nailon	Ethicon, Blue Ash, OH
Solución salina tamponada con fosfato	Gibco, Carlsbad, CA
escáner de micro-CT	Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Phantom	TriFoil Imaging, Northridge, CA
Software de análisis de imágenes	IRW, Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Scale	Mettler-Toledo International, Inc., Columbus, OH

Centrífuga SAL