En este trabajo se describe el modelo de trombosis inducida por FeCl3 en ratones. Se presenta un método para monitorizar el crecimiento de trombos mediante la observación de microscopía intravital en un vaso mesentérico y mediante la medición del flujo sanguíneo en la arteria carótida.
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Artículo de método
Trombosis modelo de ratón de la arteria carótida y Mesenterio Embarcaciones inducida por cloruro férrico-
En este artículo
Resumen
Resumen
La trombosis grave y sus consecuencias isquémicas, como el infarto de miocardio, la embolia pulmonar y el accidente cerebrovascular, son importantes problemas de salud en todo el mundo. La lesión por cloruro férrico es ahora una técnica bien establecida para inducir de forma rápida y precisa la formación de trombos en venas o arterias expuestas de pequeño y gran diámetro. Este modelo ha desempeñado un papel clave en el estudio de la fisiopatología de la trombosis, en el descubrimiento y validación de nuevos fármacos antitrombóticos y en la comprensión del mecanismo de acción de estos nuevos agentes. En este trabajo se presenta la implementación de esta técnica en un vaso mesentérico y una arteria carótida en ratones. El método describe cómo marcar los leucocitos circulantes y las plaquetas con un tinte fluorescente y observar, mediante microscopía intravital en el mesenterio expuesto, su acumulación en la pared del vaso lesionado, lo que conduce a la formación de un trombo. En la arteria carótida, la oclusión causada por la formación de coágulos se mide mediante el monitoreo del flujo sanguíneo con una sonda Doppler.
Introducción
El estudio de los mecanismos implicados en el desarrollo de la trombosis y la evaluación de la eficacia de los fármacos anti-trombóticos requiere bien establecido modelos animales experimentales. Modelos animales grandes fueron los primeros en ser utilizados ya que proporcionan grandes vasos más similar a los humanos que los roedores 1. Sin embargo, el alto costo, las grandes instalaciones requeridas y la dificultad para manipularlos genéticamente son los principales inconvenientes para su uso y animales grandes ahora se limitan a estudios preclínicos finales una vez que las pruebas preliminares sobre roedores han dado resultados concluyentes 2.....
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Protocolo
Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Medical Research Alfred y Comité de Educación del Distrito Electoral Animal Ética (E / 1534/2015 / B). Todas las manipulaciones quirúrgicas se realizaron bajo anestesia total y los animales no experimentan dolor en cualquier etapa. Todos los experimentos descritos son la no recuperación.
1. Preparación
- Cortar bandas delgadas de papel de filtro (1 mm x 2 mm).
- Recién preparar 2 soluciones de cloruro férrico de 4% (w / v) y 6% (w / v) diluido en agua desionizada. Prepare la solución de rodamina 6G 0,3% en PBS, se filtra a través de 0,22 micras.
- Corte u....
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Resultados
El fluorescente observación microscopía intravital del mesenterio revelará la acumulación de Rodamina 6G etiquetado plaquetas y leucocitos lo largo de la pared de los vasos lesionados por FeCl3. La formación progresiva de un trombo parcial se supervisa en un recipiente mesenterio 200 micras (Figura 1). Un trombo aparece lentamente y es claramente identificable después de la primera minutos de exposición a FeCl 3 (Figura 1, t = 60 seg). 40 seg después de la eliminac.......
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Discusión
El modelo de trombosis inducida por cloruro férrico es una excelente herramienta de investigación. Como se muestra en este estudio, es extremadamente fácil de implementar y cuando se utiliza en combinación con microscopía intravital o medidor de flujo Doppler, que proporciona un buen seguimiento en tiempo real de la formación de trombos. Ajuste del tiempo de exposición y la concentración de FeCl 3, sino que también ofrece la posibilidad de producir ya sea trombos no oclusivos o oclusivos.
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer el apoyo técnico de la Alegría Yao y el Dr. Karen Alt, así como la financiación de la NHMRC y NHF.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Papel de cromatografía Whatman | GE Healthcare 3030917 | ||
| Cloruro de hierro (III) 40% (p/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rhodamine 6G | Sigma | R4127 | |
| Microscopio invertido | Cámara digital Olympus | IX81 | |
| blanco y negro | Olympus | XM10 | |
| Caudalímetro Doppler | Transonic | TS420 | |
| Sonda de flujo Nano-doppler | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamina | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xilacina (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Placa de Petri | Sarstedt | 82.1472 | |
| Jeringa de insulina (29 G) | BD Ultrafino | 326103 | |
| Aplicadores con punta de algodón | BSN medical | 211827A | |
| Dynek | Pty Ltd | CS30100 | |
| solución salina tampón de fosfato de Dulbecco (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Almohadilla térmica | Kirchner | T60 |
Referencias
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L.
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Reimpresiones y permisos
