Muchos tipos de tumores cerebrales humanos se localizan en regiones específicas dentro del cerebro y son difíciles de cultivar en cultivo. Este protocolo aborda el papel del microambiente tumoral e investiga nuevos tratamientos farmacológicos mediante el análisis de células tumorales cerebrales primarias fluorescentes que crecen en un corte de cerebro de ratón organotípico.
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Artículo de método
Un tumor cerebral / organotípicos rebanada Co-cultura del sistema para estudiar microambiente tumoral y dirigida Medicamentos Terapias
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Resumen
Resumen
Los tumores cerebrales son una causa importante de morbilidad y mortalidad relacionadas con el cáncer. El desarrollo de nuevas terapias para estos cánceres es difícil, ya que muchos de estos tumores no se cultivan fácilmente en condiciones de cultivo estándar. Los cultivos de neurosfera en condiciones sin suero y los xenoinjertos ortotópicos han ampliado la gama de tumores que se pueden mantener. Sin embargo, muchos tipos de tumores cerebrales siguen siendo difíciles de propagar o estudiar. Esto es particularmente cierto para los tumores cerebrales pediátricos, como los astrocitomas pilocíticos y los meduloblastomas. Este protocolo describe un sistema que permite cultivar tumores cerebrales humanos primarios. Este ensayo cuantitativo se puede utilizar para investigar el efecto del microambiente en el crecimiento tumoral y para probar nuevas terapias farmacológicas. Este protocolo describe un sistema en el que se cultivan células tumorales cerebrales marcadas con fluorescencia en un corte de cerebro organotípico de un ratón juvenil. La respuesta de las células tumorales a los tratamientos farmacológicos se puede estudiar en este ensayo, mediante el análisis de los cambios en el número de células en el corte a lo largo del tiempo. Además, este sistema puede abordar la naturaleza del microambiente que normalmente fomenta el crecimiento de los tumores cerebrales. Este ensayo de cocultivo de cortes organotípicos de tumores cerebrales proporciona un sistema propicio para probar nuevos fármacos en células tumorales humanas dentro de un microambiente cerebral.
Introducción
La investigación reciente cáncer ha hecho avances significativos en la identificación de mutaciones genéticas, cambios moleculares y posibles tratamientos para una variedad de tumores cerebrales. A pesar de este progreso, los tumores cerebrales siguen siendo una de las principales causas de la mortalidad relacionada con el cáncer para adultos y niños. Los factores limitantes en la investigación tumor cerebral incluyen la disponibilidad limitada de muestras de pacientes primarios y líneas celulares y la dificultad en replicar el microambiente cerebro única y heterogénea en sistemas experimentales accesibles. Para muchos tumores cerebrales las condiciones necesarias pa....
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Protocolo
Declaración de Ética: El siguiente procedimiento en seres animales se realizaron de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud y fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional cáncer Dana-Farber. Todos los seres humanos trabajo fue revisado por los Comités de Revisión Institucional de la Junta del Hospital Brigham y de Mujeres y Dana-Farber Cancer Institute, y por la Universidad de Stanford para el uso apropiado, que el consentimiento informado se obtuvo de todos los sujetos cuando se requiera, y renuncia apropiada de los requisitos de consentimiento se obtuvo de los estudios de riesgo mínimo.
Cronología de ....
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Resultados
Esta sección ejemplifica el tipo de resultados que cabe esperar de la utilización del tumor cerebral / rebanada de co-cultivo organotípico para investigar la preferencia microambiente regional, así como para probar nuevas terapias. Se demuestra que el ensayo está diseñado para replicar el microambiente de los tumores cerebrales, ya que la organización del tejido y el estado proliferativo de la rodaja se mantiene (Figura 3). También demuestran que un aumento en el número de células tumorales en la rebana.......
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Discusión
Este protocolo describe cómo las células tumorales del cerebro pueden ser etiquetados con fluorescencia y se sembraron en una sección sagital del cerebro de un ratón P6 y luego monitoreados durante una semana en la cultura. Este / ensayo rebanada co-cultivo organotípico tumor cerebral se puede utilizar para determinar el efecto del microambiente regional en el número de células tumorales y también puede ser utilizado como un sistema para medir la eficacia de nuevos tratamientos farmacológicos sobre el crecimiento del tu.......
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Divulgaciones
Ninguno de los autores tiene intereses contrapuestos o intereses contrapuestos.
Agradecimientos
Este trabajo está respaldado por subvenciones de los NIH (P01CA142536 a RAS, T32CA009361 a DPY) y la Fundación de Astrocitoma Pediátrico de Bajo Grado.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| HEPES | Invitrogen | ||
| Glucosa | Invitrogen | 17502048 | |
| Penicilina Estreptomicina Tecnologías | de Vida | 15140-122 | |
| HBSS | Tecnologías | de Vida 14185-052 | |
| B-27 | Tecnologías | de Vida 17504-044 | |
| N2 | Tecnologías de Vida | 17502-048 | |
| Vida Glutamax | Tecnologías | 35050061 | |
| Neurobasal-A- Medio sin rojo de fenol | Invitrogen | ||
| Promega | V2111 | bajo punto de fusión | |
| Milipore | PICM0RG50 | ||
| laminina | Invitrogen | 23017015 | |
| Cm-DiI | Invitrogen | V22888 | |
| EDU (Etiquetado y Detección) | Life Technologies | c10337 | |
| Microesferas | Life Technologies | F-21010 | |
| Vibratome | Leica | ||
| Nikon Eclipse Ni C2si | |||
| ImageJ software | |||
| Cubreobjetos de 5 mm | Fisher Scientific | 64-0700 (CS-5R) |
Referencias
- Heddleston, J. M., et al. Glioma stem cell maintenance: the role of the microenvironment. Curr Pharm Des. 17 (23), 2386-2401 (2013).
- Sasai, K. Shh pathway activity is down-regulated in cultured medulloblastoma cells: implications fo....
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