El estudio muestra un método endoscópico exitoso de células estromales derivadas de tejido adiposo (ADSC)-hoja de trasplante para la prevención de la estenosis esofágica después de una disección endoscópica submucosa extendida (ESD) en un modelo porcino.
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Artículo de método
ADSC-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa
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Resumen
Resumen
En los últimos años, la construcción de la ficha técnica célula ha estimulado un gran interés en la medicina regenerativa, especialmente para procedimientos de cirugía reconstructiva. El desarrollo de tecnologías diversificadas que combinan las células del estroma derivadas de tejido adiposo (ADSC) con diversos biomateriales ha llevado a la construcción de numerosos tipos de sustitutos de la ingeniería tisular, tales como hueso, cartílago, y tejido adiposo de roedores, porcinos, o ADSC humanos. Extendido de esófago disección endoscópica de la submucosa (ESD) es responsable de la formación de estenosis esofágica. la prevención de la estenosis sigue siendo un reto, sin tratamientos eficaces disponibles. Anteriores estudios informaron la eficacia de la mucosa trasplante de lámina de células en un modelo canino y en los seres humanos. ADSC se atribuyen propiedades anti-inflamatorias, efectos de modulación inmune local, la inducción de neovascularización, y capacidades de diferenciación en linajes mesenquimales y no mesenquimales. Este estudio original describe el tra endoscópicansplantation de un constructo de tejido ADSC para prevenir la estenosis esofágica en un modelo porcino. El constructo ADSC se compone de dos hojas ADSC alogénicos en capas una sobre la otra en una membrana de soporte del papel. Los ADSC fueron marcadas con el fluoróforo PKH67 para permitir la monitorización basada en sondeos endomicroscopía láser confocal (pCLE). En el día del trasplante, se realizó una 5-cm y ESD hemi-circunferencial conocido para inducir estenosis esofágica. Los animales fueron inmediatamente endoscópicamente trasplantados con 4 construcciones ADSC. Se obtuvo el completa adhesión de las construcciones ADSC después de 10 min de aplicación suave. Los animales se sacrificaron el día 28. Todos los animales se trasplantaron con éxito. El trasplante se confirmó en el día 3 con una evaluación positiva pCLE. En comparación con los animales trasplantados, los animales de control desarrollaron estenosis severas, con un desarrollo importante tejido fibrótico, problemas alimentario más frecuente, y el aumento de peso reducido. En nuestro modelo, el trasplante de allogenic ADSC, organizadas en láminas de células dobles, después de la EDS extendida fue un éxito y fuertemente asociada con una tasa de estenosis esofágica inferior.
Introducción
El manejo de los tumores de esófago superficiales ha cambiado con el desarrollo de nuevas técnicas endoscópicas. Hoy en día, la resección endoscópica es el tratamiento de primera línea. De hecho, se asocia con menores tasas de morbilidad y mortalidad que una cirugía con resultados oncológicos iguales 1, 2, 3. La resección endoscópica de la mucosa (REM) y la resección endoscópica de la submucosa (ESD) son las técnicas más utilizadas. En el caso de un tumor superficial extendida, se prefiere ESD. En comparación con EMR, EDS permite la resección en bloque, independient....
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Protocolo
Todos los animales fueron tratados de acuerdo con el Comité de Ética de Investigación de Animales (directrices del Ministerio de Agricultura de Francia). El protocolo recibió la aprobación del comité de ética local autorizado para la experimentación con animales en la Universidad de París Descartes (número de registro MESR 2.035,02; Facultad de Medicina de París Descartes, París, Francia).
1. ADSC cultura y Etiquetado
- Obtener ADSC confirmadas de una institución privada. Cultura ADSC alogénicas a 37 ° C y 5% de CO 2 con un mínimo de medio esencial alfa incluyendo 10% de suero de ternera fetal y 1% de antibióticos (penicilina y estreptomic....
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Resultados
La cultura de ADSC y el procedimiento para obtener la hoja de ADSC se muestra en la Figura 1. La Figura 2 muestra la construcción del injerto, compuesto de dos hojas ADSC en capas una sobre la otra en su membrana de soporte del papel. ADSC se marcaron previamente con el fluoróforo PKH67 para permitir el seguimiento del injerto en vivo con pCLE. La Figura 3 muestra los diferentes pasos de extendido disección endoscópica de la sub.......
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Discusión
En este modelo de cerdo, el trasplante de hojas ADSC se realizó con éxito, y la evaluación in vivo en pCLE permitido para el monitoreo injerto de células. Las evaluaciones clínicas, endoscópicas, radiológicas, histológicas y demostraron la eficacia de la hoja de ADSC endoscópica en la prevención de la estenosis esofágica después de la EDS extendida.
El trasplante endoscópica de una solución de glicerol ADSC que contiene una hoja de tinte índigo carmín es un enfoque innovador en la m.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado y financiado por la Fundación Avenir (Fondation de l'Avenir, 255 rue de Vaugirard, 75719 Paris cedex 15, París, Francia). Este estudio nunca se habría llevado a cabo sin la valiosa ayuda del equipo veterinario del Laboratorio de Investigación Bioquirúrgica de la Fundación Alain Carpentier.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Capuchón endoscópico transparente compatible con Q180 | Olympus Optical Co | ||
| GIF-Q180 gastroscopio | Olympus Optical Co | ||
| Exera II | Olympus Optical Co | ||
| Aguja de inyección 18 G | Olympus Optical Co | ||
| ERBE ICC 350 | Tecnología | ||
| Índigo carmín 1% | Life | ||
| Bisturí híbrido endoscópico | Life | ||
| Minisonde Z pCLE sonda verde | Mauna Kea Technology | Debes aprender a usar la sonda. La manipulación podría ser difícil. | |
| Suero fetal bovino | Sigma Aldrich | 12105C | |
| Tripsina | Sigma Aldrich | T146 | |
| Alpha medio esencial mínimo | Thermo Fisher | 22561-021 | |
| Salinas tamponadas con fosfato | Thermo Fisher | 10010-023 | |
| PKH67 kit de colorantes | Sigma Aldrich | Mini67-KT | |
| Célula sensible a la temperatura de 12 pocillos placa de cultivo | Upcell Thermo Scientific | 174900 | Sienta el bienestar con 4 mL de cultivo medio estándar 30 min antes de sembrar las células |
| Esomeprazol 40 mg | Biogaran | ||
| Moprhine sulfato 50 mg/mL | Lavoisier | ||
| Amoxicilina 1 g | Biogaran | ||
| Ketamina 250 mg/5 mL | Panpharma | ||
| Propofol 10 mg/mL | Fresenius | ||
| Papel hidrofóbico | Carrefour |
Referencias
- Ono, S., Fujishiro, M., et al. Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms. Gastrointestinal endoscopy. 70 (5), 860-866 (2009).
- Pech, O., May, A., et al.
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Reimpresiones y permisos
