Modelos animales de aterosclerosis son esenciales para comprender el mecanismo e investigar nuevos enfoques para prevenir el desarrollo de la placa o ruptura, una causa principal de muerte en el mundo industrializado. Este protocolo utiliza una combinación de lesión de globo y dieta rica en colesterol para inducir a las placas ateroscleróticas en arteria ilíaca de conejo.
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Artículo de método
El modelo de conejo de ateroesclerosis acelerada: una perspectiva metodológica de la lesión de globo de la arteria ilíaca
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Resumen
Resumen
Síndrome coronario agudo resultante de la obstrucción coronaria después de la ruptura y desarrollo de la placa aterosclerótica es la causa principal de muerte en el mundo industrializado. Conejos Nueva Zelanda blanco (NZB) son ampliamente utilizados como modelo animal para el estudio de la aterosclerosis. Desarrollan lesiones espontáneas cuando alimentados con la dieta aterogénico; sin embargo, esto requiere mucho tiempo de 4 a 8 meses. Para mejorar y acelerar la aterogénesis, se emplea a menudo una combinación de dieta aterogénico y lesión endotelial mecánica. El procedimiento presentado en la inducción de las placas ateroscleróticas en conejos utiliza un catéter con balón para alterar el endotelio en la arteria ilíaca izquierda de NZB conejos alimentados con la dieta aterogénico. Daño mecánico causado por el catéter con balón induce una cadena de reacciones inflamatorias iniciar neointimal acumulación del lípido en una manera dependiente del tiempo. Placa aterosclerótica después de espesamiento de neointimal de mostrar globo lesiones con infiltración extensa de lípidos, contenido de la celda alta del músculo liso y presencia de macrófagos derivados de células de la espuma. Esta técnica es simple, reproducible y produce la placa de longitud controlada dentro de la arteria ilíaca. Todo el procedimiento se completa dentro de 20-30 minutos. El procedimiento es seguro con baja mortalidad y ofrece también gran éxito en la obtención de importantes lesiones intimales. El procedimiento del catéter de balón indujo resultados de lesión arterial en la aterosclerosis dentro de dos semanas. Este modelo puede utilizarse para investigar la patología de la enfermedad, diagnóstico por imágenes y evaluar nuevas estrategias terapéuticas.
Introducción
La ruptura de las placas ateroscleróticas vulnerables es una de las principales causas de muerte en los países industrializados1. Aunque la investigación en las últimas décadas ha desarrollado varios mecanismos moleculares y celulares implicados en la progresión de la placa, continuó todavía se necesitan esfuerzos no sólo para desentrañar el complejo mecanismo de progresión de la enfermedad sino también para probar nuevas terapéuticas se acerca. Se han propuesto varios modelos animales para el estudio de la aterosclerosis. Manipulación genética, lesión de endotelio de alimentación o mecánico de colesterol son las estrategias estándar compartida....
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Protocolo
este protocolo experimental ha sido aprobado por la Oficina veterinaria Cantonal, Fribourg y el suizo Federal veterinario oficina, Suiza (FR 2015/58).
Nota: se utilizaron conejos macho NZB entre 2.8 a 3.2 kg. Los animales fueron alojados bajo condiciones convencionales (12 h de luz y oscuro ciclo, proporcionada alimento y agua ad libitum). Antes de denudación del globo, los animales se aclimataron durante 1 semana durante la cual fueron alimentados con dieta normal chow. Después de una semana de aclimatación, conejos fueron cambiados a aterogénico dieta consistente en grasas (8.6%) y saturan ácidos grasos con 205 mg/kg dieta de colesterol....
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Resultados
Lesiones del globo de la arteria ilíaca fue realizada con éxito sin complicaciones (figura 1). El tiempo quirúrgico total varió de 20 a 30 min de lesiones realizado en sólo una arteria ilíaca y 35 a 45 min para las lesiones en ambas arterias. El conejo se recuperó dentro de 1 h después de lesión de globo. Todos los animales aparecieron sanos sin pérdida significativa de peso. Se ha encontrado ninguna infección, edema o trombosis arterial. El área de la herida.......
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Discusión
El modelo de aterosclerosis de la arteria ilíaca de conejo es ampliamente utilizado en la investigación de la aterosclerosis. Con este protocolo los conejos desarrollaron rápidamente las placas más severas y avanzadas en comparación con las lesiones espontáneas convertidas sólo dieta de colesterol. Lo importante, animales recuperan rápidamente de la cirugía.
El principal estímulo de la aterogénesis es el daño mecánico causado por el catéter de balón que lesiona el endotelio y el buque de pared.......
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Divulgaciones
Los autores no declaran a intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el suizo nacional ciencia Fundación beca 150271.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nueva Zelanda Conejos blancos | Charles River laboratorios,Francia | Cre:KBL(NZW) | |
| Dieta rica en colesterol | Ssniff spezialdiä ten | Ssniff EF K Esterilizador de perlas de vidrio con alto contenido de grasa y colesterol | |
| 500 | VWR, Leicestershire, Reino Unido | 101326-488 | |
| Catéteres de embolectomía con balón Fogarty, 2 franceses | Edwards Lifesciences, Suiza | 120602F | Solo para un solo uso |
| Jeringa Luer Lock | Becton, Dickinson and Company, EE. UU. | 309628 | |
| Thermopad Tipo 226 | Solís, Suiza AG | 397387 | |
| Buprenorfina- Temgesic | Reckitt Benckiser AG, Suiza | 7.68042E+12 | |
| Isoflurano | Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 | 2667-46-7 | |
| Máquina de anestesia-combi-vet Sistema de anestesia base | Rothacher Medical GmbH, Suiza | CV 30-301-A | |
| Monitor de signos vitales veterinario Cardell touch | Midmark, Ohio, EE. UU. | 8013-001 | |
| Pomada oftálmica-Humigel | Virbac, Francia | ||
| Cortapelos de animales | Aesculap AG, Alemania | GT420 | |
| Solución desinfectante-Betadine | MundipharmaMedicalCompany, Suiza | 14671-1203 | |
| Dumont #7 Pinzas | FST Alemania | 11274-20 | |
| Medianas y pequeñas microtijeras | Medline International Suiza Sà rl | UC4337 | |
| Pinzas microvasculares | FST, Alemania | 18051-28 | |
| Papaverine | ESCA chemicals, Suiza | RE 356 803 | |
| Vein Pick | Harvard Apparatus, Cambridge, Reino Unido | 72-4169 | Solo para un solo uso |
| Saline | Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Suiza | 1330055 | |
| Sutura | Polysorb 5-0Covidien AG, Suiza | UL 202 | Monofilamento |
| Sulfadoxina y Trimetoprim-Trimethazol | Werner Stricker AG, Suiza | Swissmedic Nr. 50'361 | |
| Antiséptico- Octenisept | Schü LKE & Mayr AG, Suiza | GTIN: solución | |
| Roth | 1058.1 | ||
| isobutanol-2-metilbutano | Sigma-Aldrich, Suiza | M32631-1L | |
| Compuesto de temperatura óptima de corte-Tissue-Tek | VWR Chemicals, Bélgica | 25608-930 | |
| Cryostat | Leica, Glattbrugg, Suiza | Leica CM1860 UV | |
| Portaobjetos de vidrio- Superfrost Plus | Thermo Scientific | 4951PLUS4 | |
| Hematoxilina de Mayer | Sigma-Aldrich, Suiza | MHS32-1L | |
| Eosina 0,5% aq. | Sigma-Aldrich, Suiza | HT110232-1L Aceite | |
| Rojo O | Sigma-Aldrich, Suiza | O0625-25G | |
| α-anticuerpo de actina de músculo liso | Abcam, Reino Unido. | ab7817 | |
| Anticuerpo del clon de macrófagos RAM11 | DAKO, Suiza | M063301 | |
| Hoechst | Abcam, Reino Unido. | ab145596 | |
| Anticuerpo secundario policlonal de cabra (Chromeo 546) | Abcam, Reino Unido. | ab60316 | |
| Alexa Fluor 488/547 | Abcam, Reino Unido. | ||
| Medio de montaje de glicergel, acuoso | DAKO, Suiza | C056330 | |
| Hematoxilina para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | H3136-25G | |
| Cloruro férrico para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 157740-100G | |
| Yodo para la tinción de Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 207772-100G | |
| Yoduro de potasio para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 60400-100G-F | |
| Azul alcián para la tinción de Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | A5268-10G | |
| Amoníaco fuerte para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 320145-500ML | |
| Croceína brillante MOO para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 210757-50G | |
| Fucsina ácida para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | F8129-50G | |
| Tiosulfato de sodio para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 72049-250G | |
| Ácido fosfotúngstico para la tinción de pentacromo Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 79690-100G | |
| Crocina para pentacromo Movat tinción | Sigma-Aldrich, Suiza | 17304-5G | |
| EUKITT para tinción pentacroma Movat | Sigma-Aldrich, Suiza | 03989-100ML |
Referencias
- Mozaffarian, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2015 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 131, e29-e322 (2015).
- Boone, L. R., Brooks, P. A., Niesen, M. I., Ness, G. C. Mechanism of resistance to dietary cholesterol. J Li....
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