La hemorragia incontrolada, una importante causa de mortalidad entre los pacientes con traumatismo, puede ser modelada usando una laceración hepática estándar en un modelo murino. Este modelo resulta en pérdida de sangre consistente, supervivencia, y permite la prueba de agentes hemostáticos. Este artículo proporciona el proceso paso a paso para realizar este valioso modelo.
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Artículo de método
El shock hemorrágico no controlado se modela a través de la laceración hepática en ratones con monitorización hemodinámica en tiempo real
En este artículo
Resumen
Resumen
La hemorragia no controlada es una causa importante de muertes evitables entre los pacientes traumatizados. Hemos desarrollado un modelo murino de hemorragia no controlada a través de una laceración hepática que da como resultado pérdida de sangre consistente, alteraciones hemodinámicas y supervivencia.
Los ratones se someten a una resección normalizada del lóbulo medio izquierdo del hígado. Se les permite sangrar sin intervención mecánica. Los agentes hemostáticos se pueden administrar como terapia de pretratamiento o de rescate dependiendo del interés del investigador. Durante el tiempo de la hemorragia, se realiza monitorización hemodinámica en tiempo real a través de una línea arterial femoral izquierda. Luego se sacrifican los ratones, se cuantifica la pérdida de sangre, se recoge sangre para un análisis posterior y se recogen los órganos para el análisis de la lesión. El diseño experimental se describe para permitir la prueba simultánea de múltiples animales.
Existe hemorragia hepática como modelo de hemorragia incontroladaN en la literatura, principalmente en modelos de ratas y porcinos. Algunos de estos modelos utilizan la monitorización hemodinámica o cuantifican la pérdida de sangre pero carecen de consistencia. El presente modelo incorpora la cuantificación de la pérdida de sangre, monitoreo hemodinámico en tiempo real en un modelo murino que ofrece la ventaja de usar líneas transgénicas y un mecanismo de alto rendimiento para investigar más a fondo los mecanismos fisiopatológicos en la hemorragia no controlada.
Introducción
El trauma es la principal causa de muerte y discapacidad entre los jóvenes de todo el mundo. 1 La hemorragia incontrolada sigue siendo una de las principales causas de mortalidad entre los pacientes traumatizados gravemente heridos. 2 El tratamiento del paciente con trauma hemorrágico es doble: control de la hemorragia quirúrgica y reanimación y reemplazo de sangre perdida.
Los modelos animales de choque hemorrágico han sido la piedra angular en la investigación de trauma y pueden ser utilizados en la evaluación de la fisiopatología y el tratamiento del shock traumático / hemorrágico.
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Protocolo
Los ratones se alojaron de acuerdo con las pautas de cuidado de animales de la Universidad de Pittsburgh (Pittsburgh, PA, EE.UU.) y de los Institutos Nacionales de Salud (NIH, Bethesda, MD, EUA) en condiciones libres de patógenos específicos con ciclos de luz y oscuridad de 12 h y libre acceso a Alimentación estándar y agua. Todos los experimentos con animales fueron aprobados y llevados a cabo de acuerdo con las directrices establecidas por el Animal Research and Care Committee en la Universidad de Pittsburgh.
1. Campo quirúrgico y configuración del instrumento
- Esterilice todos los instrumentos quirúrgicos, sutura, gas....
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Resultados
El modelo de laceración hepática produce una pérdida de sangre reproducible y consistente en ratones. La Figura 1A demuestra el peso consistente del hígado lacerado que se puede obtener con una desviación estándar de sólo 0,02 g. Esta consistencia en el peso del hígado lacerado permite la capacidad de reproducir el modelo entre los ratones y en diferentes configuraciones experimentales tales como diferentes protocolos de resucitación. Además, el peso reproducible del híg.......
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Discusión
El modelo de laceración de hígado murino descrito aquí proporciona un modelo fiable y consistente de hemorragia no controlada. Este modelo es sencillo de realizar, pero hay pasos importantes que requieren consideración meticulosa. La parte más difícil técnicamente del modelo es la canulación de los vasos femorales para la monitorización hemodinámica y la administración de fluidos / fármacos. Se debe tener cuidado durante la disección del nervio y la arteriotomía / venotomía. Es importante no tocar el nervio durante la d.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses financieros que compitan para declarar.
Agradecimientos
El trabajo de este manuscrito fue apoyado por el financiamiento al Dr. Neal por el Programa de Proyecto Piloto del Instituto de Medicina Vascular en Hemostasia y Biología Vascular (P3HVB) y la AAST Research Fellowship. Este trabajo es apoyado por los Institutos Nacionales de Salud de los EE.UU. concede 1 R35 GM119526-01 y UM1HL120877-01.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| tijeras quirúrgicas | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| hemostáticos | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microtijeras | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| pinza curva de 0,8 mm | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| carrete de sutura 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| sutura 4-0 seda con aguja | Owens Minor | K188H | |
| gasa 4 x 4 | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| aplicador de punta de algodón | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| aguja de 30 G | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| Aguja | de 23 Gse puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| La jeringa de 10 cc | se puede comprar a través de cualquier proveedor global El | ||
| tubo cónico de 50 cc | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| Jeringa de 1 cc con aguja de 25G | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Tubo de polietileno 10 100' (PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Tubo de polietileno 50 100'(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| llave de paso de 3 vías | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| almohadilla quirúrgica azul | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Apósitos de campo estériles | Rollos | ||
| 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| Lado recto frascos de boca ancha | VWR | 159000-058 | |
| bandeja de acero inoxidable 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| cerradura leur macho-macho 3 vías | VWR | 20068-909 | |
| bolsa de esterilización 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| bolsa de esterilización 5" x 10" | Triángulos | 24010 | |
| Fine Science Tools | 18105-03 | ||
| aplicador de clip enrollado de 7 mm | Fisher Scientific | E0522687 | |
| 1,000 clips para heridos | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| guantes estériles | se pueden comprar a través de cualquier proveedor | ||
| eppendorfs | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| Jeringa de insulina Lo-Dose de 1/2 cc El bote de peso | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| se puede comprar a través de cualquier proveedor | |||
| Los timbres lactatados | se pueden comprar a través de cualquier | ||
| (.1 y microL; hep + 9.9 y microL; NaCl) | se puede comprar a través de cualquier solución | ||
| se puede comprar a través de cualquier proveedor | |||
| pentobarbital | se puede comprar a través de cualquier proveedor | ||
| Microscopio Wild M650 con soporte de brazo | Leica | ||
| Digi-Med BPA-400 e integrador de sistemas | Micro-Med | SYS-400 | |
| TXD-310 (Transductor Digi-Med) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computadora | Dell | ||
| esterilizador de instrumentos de microperlas | VWR | 11156-002 | |
| Maquinillas Oster A5 con hoja de tamaño 40 | VWR | 10749-020 | |
| almohadilla térmica de circulación 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| termómetro rectal | Kent Scientific | RET-3 |
Referencias
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto,....
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Reimpresiones y permisos
