El Modelo Invertido del Corazón para la Colección de Transudado Intersticial del Corazón de la Rata Aislada

Resumen

Este protocolo describe un método para recoger fluido intersticial cardíaco del corazón de rata perfundido aislado. Para separar físicamente el transudato intersticial del perfusado de efluente venoso coronario, se invierte el corazón perfundido de Langendorff y se recoge el transudato (líquido intersticial) formado en la superficie cardiaca usando un tapón de látex blando.

Resumen

El presente protocolo describe un enfoque único que permite la recolección de transudado cardíaco (TC) del corazón de rata aislado, con solución salina perfundida. Después del aislamiento y la perfusión retrógrada del corazón de acuerdo con la técnica de Langendorff, el corazón se invierte en una posición invertida y se estabiliza mecánicamente mediante un catéter de balón insertado en el ventrículo izquierdo. Luego, se coloca una tapa delgada de látex - previamente moldeada para que coincida con el tamaño promedio del corazón de la rata - sobre la superficie epicárdica. La salida de la tapa de látex está conectada a tubos de silicio, con la abertura distal 10 cm por debajo del nivel de base del corazón, creando una ligera succión. La TC producida continuamente en la superficie epicárdica se recoge en viales enfriados con hielo para un análisis posterior. La tasa de formación de TC varió de 17 a 147 μL / min (n = 14) en los corazones control y en infarto, lo que representa 0,1-1% del perfusato de efluente venoso coronario. Análisis proteómico y alto perfoLa cromatografía líquida de rmance (HPLC) reveló que la CT recogida contiene un amplio espectro de proteínas y metabolitos purinérgicos.

Introducción

La insuficiencia cardíaca (IC) es la principal causa de muerte en humanos en todo el mundo ¹ . La IC suele producirse a causa de miocarditis, inseminación isquémica al miocardio y remodelado ventricular izquierdo, lo que lleva al deterioro progresivo de la función contráctil cardíaca ya la calidad de vida de los pacientes. Aunque los avances en cardiología y cirugía cardíaca han reducido notablemente la mortalidad por HF, sirven meramente como "retardadores" transitorios de un proceso de enfermedad inevitablemente progresivo que tiene una morbilidad significativa. Por lo tanto, la falta actual de tratamiento efectivo subraya la necesidad de id....

Protocolo

Todos los experimentos fueron aprobados por la agencia reguladora local ( LANUV de Nordrhein-Westfalen, Alemania) y se realizaron de acuerdo con las directrices de uso animal. Los animales fueron alimentados con una dieta estándar de chow y recibieron agua del grifo ad libitum . Todos los equipos y productos químicos necesarios para cada paso del experimento están disponibles en la Tabla de Materiales .

1. Preparación de la Caperuza de Látex y del Balón Intraventricular

1. Haga un molde de aluminio usando una fresadora que coincida con el tamaño promedio del corazón de la rata (peso corporal de 3....

Resultados

El modelo de corazón invertido permite la recolección de transudado intersticial cardíaco en un corazón de rata aislado, retro-perfundido ( Figura 1A- C ). Cuando se perfundía a una presión constante de 100 cmH $ _₂ $ O, la velocidad de formación de líquido intersticial varió entre 17 y 147 μL / min, llegando a 0,1-1% del efluente venoso coronario en el corazón aislado.

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Discusión

El modelo de corazón invertido se basa en la bien establecida técnica de perfusión de corazón de Langendorff ¹² y se realiza simplemente invirtiendo el corazón en una posición invertida y manteniendo esta posición usando un catéter de balón intra-ventricular rígido. De esta manera, el transudato intersticial cardíaco puede separarse físicamente del perfusado de efluente venoso coronario, goteando por gravedad desde la base del corazón ⁹ . El CT se puede recoger continuamen.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Solución de látex	ProChemie	Z-Latex LA-TZ	http://kautschukgesellschaft.de/%E2%80%A8z-latex-la-tz
molde de aluminio	en	casa-Modelo de	corazón inverso
Hornos universales	Memmert	UNB 400	Modelo de corazón inverso
Globo de látex	Hugo Sachs	tamaño 4	Modelo de corazón inverso
Fresadora	Proxxon	MF70	Modelo de corazón inverso
Cloruro de sodio	Sigma	SZBD0810V	productos químicos
Carbonato de hidrógeno de sodio	Roth	68852	Productos químicos
Cloruro de potasio	Merck	49361	Productos químicos
Sulfato de magnesio Heptahidratado	Merck	58861	Productos químicos
Dihidrógeno fosfato de potasio	Merck	48731	Productos químicos
D(+)-Glucosa anhidra	Merck	83371	Productos químicos
Cloruro de calcio dihidratado	Fluka	21097	Productos químicos
Balanza	VWR	SE 1202	Productos químicos de pesaje
Agua bidestilada	químicos que disuelven	poros de molino
Transductor de presión médico		Gold-Langendorff	aparato
Sonda de flujo médico	Transonic	3PXN	Aparato Langendorff
Calefacción Baño circulante	Haake	B3 ; DC1	Aparato Langendorff
Tubos de laboratorio y vacío	Tygon	R-3603	Aparato Langendorff
Caudalímetros de experimentación	animal Transonic	T206	Aparato Langendorff
PowerLab Dispositivo de adquisición de datos AD	Instruments	Gráfico 7.1	Aparato Langendorff
LabChart Software de adquisición de datos	AD Instruments	Gráfico 7.1	Aparato Langendorff
Bomba peristáltica	Glison	MINIPULS 3	Aparato Langendorff
Columna de agua de vidrio Aparato	Langendorff	hecho en casa	de
agua Agente protector	VWR	462-7000	Aparato Langendorff
Filtros desechables estériles (0,2 y micro; m)	Thermo Scientific	595-4520	Aparato Langendorff
Analizadores de gases en sangre	Radiometer	ABL90 FLEX PLUS	Analizador de gas
70% etanol	VWR	UN1170	Limpieza de tubos
100% etanol	Merck	64-17-5 Tubos de	limpieza
Wistar Rats	Janvier-Animals
Tijeras de acero inoxidable	AESCULAP	BC702R	Instrumentos quirúrgicos
Tijeras de acero inoxidable	AESCULAP	BC257R	Instrumentos quirúrgicos
Pinzas grandes	AESCULAP-Instrumentos		quirúrgicos
8m/m Pinzas de acero inoxidable	F.S.T	11052-10	Instrumentos quirúrgicos
Superfino (10/0) papel de lija	3M	051111-11694	Modelo de corazón inverso