Summary
Presentert her er en nyttig protokoll for lunge fiksering som skaper en stabil tilstand for histologiske evaluere lunge prøver fra en mus modell av emfysem. Den største fordelen med denne modellen er at den kan fikse mange lunger med samme konstante trykk uten lunge kollaps eller deflasjon.
Abstract
Emfysem er et viktig trekk ved kronisk obstruktiv lungesykdom (KOLS). Studier som involverer en emphysematous musemodell krever optimal lunge fiksering for å produsere pålitelige histologiske prøver av lungene. På grunn av innholdet i lunge strukturelle sammensetning, som hovedsakelig består av luft og vev, er det en risiko for at det kollapser eller deflates under fikseringsprosessen. Ulike lunge fiksering metoder finnes, som hver har sine egne fordeler og ulemper. Den lunge fiksering metoden som presenteres her utnytter konstant press for å muliggjøre optimal vevs evaluering for studier ved hjelp av en emphysematous mus lunge modell. Den største fordelen er at den kan fikse mange lunger med samme tilstand på en gang. Lunge prøver er innhentet fra kroniske sigarettrøyk-eksponert mus. Lung fiksering utføres ved hjelp av spesialisert utstyr som muliggjør produksjon av konstant trykk. Dette konstante trykket opprettholder lungene i en rimelig oppblåst tilstand. Dermed genererer denne metoden en histologiske prøve av lungene som er egnet til å evaluere sigarettrøyk-indusert mild emfysem.
Introduction
KOLS er en av de ledende verdensomspennende årsakene til dødsfall1. Sigarettrøyk er den viktigste årsaken til KOLS, men mekanismene for patogenesen forblir ufullstendig definert. KOLS demonstrerer to hoved egenskaper, inkludert progressiv begrensning av luftstrøm og en unormal betennelsesreaksjon i lungene. Emphysematous lidelse forekommer ofte i lungene til KOLS-pasienter2. Den patologiske funn av emfysem er preget av alveolære vegg ødeleggelse3. Flere dyrearter har blitt brukt til å generere KOLS-modeller i vivo (dvs. hunder, marsvin, aper og gnagere)4. Imidlertid har musen blitt den mest brukte i konstruksjonen av KOLS-modeller. Dette har mange fordeler, inkludert lave kostnader, evne til å være genetisk modifisert, omfattende genomisk informasjon tilgjengelighet, tilgjengelighet av antistoffer, og evne til å bruke en rekke mus stammer5. For øyeblikket er det ingen musemodell som kan etterligne alle funksjonene til humant KOLS; enkelte forskere må derfor velge hvilken modell som egner seg best for den spesifikke KOLS-forskningen6. Den emphysematous muse modellen er en av mange KOLS-musemodeller som er tilgjengelige for øyeblikket. Flere modeller inkluderer forverring musemodell, systemisk Co-morbidities modell, og KOLS mottakelighet modell7.
Den emphysematous muse modellen kan genereres av flere typer eksogene agenter, inkludert kjemiske stoffer og sigarettrøyk eksponering4. Kjemisk eksponering (f.eks. til elastase) gir en alvorlig type emfysem, mens sigarettrøyk resulterer i mild emfysem8,9. Sigarettrøyk antas å være den viktigste årsaken til patogenesen av KOLS; Derfor er valget av sigarettrøyk som et middel til å opprette en Kols musemodell rimelig10. Mange studier har brukt sigarettrøyk for å skape emfysem i musen. For eksempel, Nikula et al. hell skapt en emphysematous musen modell fra B6C3F1 kvinner mus av utsette seg å sigarett Smoke for 7 eller 13 måneder11. Vi har også etablert en emphysematous musemodell via senescence markør protein/SMP-30 KO mus12. Det er avgjørende å utføre en lunge fiksering metode som kan riktig visualisere denne milde emfysem modell av sigarettrøyk eksponering.
Det er opprettet ulike metoder for lunge fiksering13. Men det er ingen gull standard metode for lunge vev fiksering for å evaluere emfysem14. Flere studier fra denne laben har vist at fikserings systemet som presenteres her, er nyttig ved å skape en stabil tilstand for å evaluere emfysem12,15,16,17,18. Den største fordelen med dagens system er at det kan løse mange lunger med samme tilstand på en gang uten lunge kollaps eller deflasjon. Den nåværende lunge fiksering systemet bruker noe spesielt utstyr som gjør at lunge prøver å bli oppblåst ved et passende konstant trykk for en gitt periode. Dette spesialutstyret består av tre deler, inkludert en lavere container, øvre beholder og pumpe. Lunge prøver er plassert i den nedre beholder som er koblet til trykksatt festemidler, noe som resulterer i en 25 cmH2O trykkforskjell i nivået av agentene mellom de øvre og nedre beholdere19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Det fulgte metoder ha blitt anerkjent av det dyr bekymre og bruk komiteer av Juntendo universitet skolen av medisin. Retningslinjene for forsvarlig gjennomføring av dyre eksperimenter, Science Council of Japan, 1 juni, 2006 ble fulgt. Det er tre viktigste trinnene i denne metoden: 1) mus disseksjon, 2) lunge exsanguination, og 3) fiksering av lunge vev assistert av spesialisert utstyr. Vanligvis behandles lunge prøver til forankrings etter 48 h av fiksering12,15,16,17,18.
1. mus disseksjon
- Mål kroppsvekten av musen, og deretter bestemme mengden av pentobarbital å administrere.
- Injiser pentobarbital intraperitonealt med en dose på 70 mg/kg kroppsvekt og Bekreft anestesi ved fravær av reaksjon på tå knipe.
- Injiser nålen i en 45 ° vinkel til den trenger inn i huden og muskelen. Tegn stempelet og bekreft et luft vakuum, og Injiser deretter pentobarbital.
- Bekreft anestesi ved fravær av refleks bevegelse.
Merk: bruk av anesthetized mus i motsetning til en euthanized mus anbefales for fullt lunge exsanguination. - Skjær musen hud og magemuskler på midtre linje, satsing for cephalic området.
- Klipp sideveis for å gi et bredere arbeidsområde.
2. lunge exsanguination
- Utsett membranen laget og punktering det med tang.
- Åpne bryst plass og kutt sternal området, slik at lungene og hjertet å bli sett klart.
- Skjær hjertet i venstre Atrium og høyre ventrikkel.
- Sett inn en kanyle (24 G) i høyre ventrikkel området og direkte til cephalic området til den når lungearterien, som vist i figur 1.
- Slå på pumpen og la 1x fosfat-bufret saltvann (PBS) å sirkulere (ca 200 mL/h) til alle lunge vev endres til en hvit farge.
3. fiksering av lunge vev
- Fjern luftrøret, lungene og hjertet.
- Frigjør alle tre organene ved å kutte de omkringliggende bindevev.
- Bind høyre hoved bronkie med en Sutur tråd og skjær alle fliker av høyre lunge.
- (Valgfritt): de fliker av høyre lunge består av fire deler. Skjær disse delene fra høyre hoved bronkie og dele deler for behandling som frosne vevsprøver.
- Sett inn hjertet og fliker av venstre lunge til festemidler, som ligger inne i en 10 mL sprøyte.
FORSIKTIG: festemidler er farlige. Bruk riktig verneutstyr (f.eks. lange gummi hansker) og arbeid i et godt ventilert rom. - Opprett en vakuum betingelse ved hjelp av en 10 mL sprøyte for å blåse opp lungene, som vist i figur 2.
- Sett en kanyle (20 G) inn i luftrøret og knyt en knute.
- Pump opp lungene med festemidler for å sjekke med for lekkasjer, ved hjelp av en 1 mL sprøyte.
- Overfør til lunge fiksering trykk utstyr, som illustrert i Figur 3.
- Etter å ha fikset punktum, Fjern lunge prøven og ta av luftrøret med en knute.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Som beskrevet tidligere, kan det spesialiserte utstyret, som genererer utvidet konstant trykk, deles inn i tre deler (Figur 3A). Den nedre delen er punktet der du skal sette inn lunge prøven (Figur 4A). Lungene er koblet via en kanyle (20 G) til tuppen av formalin Flow ved hjelp av en tre-veis stopp kuk (Figur 4B). Trykket er generert fra de ulike overflate nivåer av festemidler mellom de nedre og øvre beholdere (figur 5). Trykkforskjellen er 25 cmH2O; ved hjelp av høyde justeringsknotten kan imidlertid trykket justeres i området 25 – 30 cmH2O (figur 5). En pumpe forbinder de nedre og øvre beholdere via rør (Figur 3A), bevare en 25 cm forskjell i innfesting agent overflate høyde. Retningen på agent flyten er beskrevet i Figur 3B.
Presentert neste er et representativt resultat av histologiske funn i lungene, etter 48 h av fiksering. Seks måneder gamle mannlige SMP30-KO mus ble utsatt for sigarettrøyk eller frisk luft (som kontroll) i 8 uker. Begge vevsprøvene ble farget med hematoksylin og eosin. Figur 6 A viser histologiske funn fra luft-eksponert mus, som ikke viser merket luftrom utvidelse. I kontrast, figur 6B avslører betydelig luftrom utvidelse og alveolære vegg ødeleggelse i mus som ble utsatt for kronisk sigarettrøyk.
Gjennomsnittlig lineær avskjærer (MLI) ble bestemt i henhold til metoden beskrevet av Thurlbeck et al. 20 for å få tilgang til luftrom størrelse. Den destruktive indeksen (DI) var fast bestemt på å evaluere ødeleggelsen av alveolære veggen i henhold til metoden beskrevet av Saetta et al. 21. disse morphometric undersøkelser av lunge prøven AVSLØRTE at di og MLI var signifikant større i røyk utsatte SMP30-ko-mus enn i luft eksponerte mus (figur 6C, D).
Figur 1: lunge exsanguination. En kanyle ble satt inn ved plasseringen av høyre ventrikkel og rettet mot lungearterien. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: vakuum sprøyte lunge inflasjon. Vakuum tilstand inne i 10 mL sprøyten inneholder festemidler for å blåse opp lungene. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: utstyr for lunge fiksering. (A) akryl utstyr tillot en 25 cmH2O trykkforskjell å blåse lungene kontinuerlig for 48 h, utnytte en pumpe maskin. (B) retningen til festemiddel flyten indikeres av piler. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: nedre beholder. (A) muse lunge prøven ble plassert inne i feste midlene i den nedre beholderen. (B) inne i den nedre beholder, er det et eksempel plassering boks, på toppen av hvilke formalin renner gjennom en tre-veis stopcock og kanyle. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: øvre beholder og høyde justeringsknapp. Den øvre beholder genererte et trykk på 25 cmH2O. Det er to par høyde justerings knotter som kan brukes til å justere høyden på den øvre beholderen; som et resultat, kan trykket som genereres settes innenfor rekkevidde av 25-30 cmH2O. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6: mus lunge histologic og morphometric funn. Representative histologic bilder av lunge-seksjoner fra 8-ukers sigarettrøyk-eksponert eller luft-eksponert SMP30-KO mus (6 mnd-gammel, male), beiset med hematoksylin-eosin. Scale bar = 100 μm. (A) den luft eksponerte gruppen viste ikke signifikant utvidelse eller andre funn. (B) sigarettrøyk-eksponert gruppe viste merket luftrom utvidelse og alveolære vegg ødeleggelse. (C) gjennomsnittlig lineær AVSKJÆRER (MLI). I lungene av sigarettrøyk-eksponert mus, MLI var betydelig større enn luft-eksponert mus (* p < 0,001). (D) den destruktive INDEKSEN (di). I lungene av sigarettrøyk-eksponert mus, DI ble betydelig økt i forhold til lungene av luft-eksponert mus (* p < 0,001). Verdier presenteres som gjennomsnittet ± SD (n = 6 for hver gruppe). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fiksering prosedyre for gnager lungene som presenteres her er ikke romanen; imidlertid har dette systemet flere fordeler. For det første, den kanne fastsette mange lungen (maksimum av 20) med det likt forfatning i sin tid. The Society of toxicologic patologi fastslår at presset for tyngdekraften drypping varierer fra 22 – 25 cmH2O22. Spesielt har flere studier utført lunge fiksering ved et trykk på 25 cmH2O13,19,23,24,25,26,27 , som har blitt vedtatt i laboratoriet vårt ved hjelp av dagens system12,15,16,17,18.
Dernest kan det fikse lunge vev ved et konstant trykk for ulike perioder av gangen. I vårt laboratorium er lunge prøver vanligvis løst for 48 h. Mange etterforskere bruker en relativt kort tidsperiode (f. eks, 5 – 20 min)13,28,29,30,31,32, deretter tie av oppblåst lunge og dyppe i formalin i lengre perioder etter ønske. Det er ingen data eller forskning som indikerer en gull standard for lengden av varighet for lunge fiksering. Imidlertid beskriver uttalelsen av American bryst Society (ATS)/European respiratory Society (ERS) den "sølv standarden", hvor lufttrykket må opprettholdes i minst 24 timer14. Den japanske Society of patologi også anbefalt fiksering ganger ikke lenger enn 1 uke for å produsere konsistent immunhistokjemiske lysbilder; Selv om, er deres anbefaling basert på analyse ved hjelp av menneskelige prøver33. Relativt korte feste perioder kan ikke være gjeldende for det aktuelle systemet, fordi hver prøve er ment å være individuelt plassert i den nedre beholderen. Dette er en begrensning av det gjeldende systemet. Avslutningsvis er riktig lang tid for mus lunge fiksering fortsatt ukjent.
Kritiske skritt i denne metoden er knyttet til risikoen for lunge formalin lekkasje under formalin fiksering prosessen. Lunge formalin lekkasje kan føre til krymping av lunge størrelse. Denne risikoen kan deles inn i to deler. Den første delen oppstår under offer trinnet. Når du åpner bryst buret, er det viktig å ikke forårsake skade på lunge overflaten. Nøkkelen til forebygging er å nærme seg dette fra membranen og fortsette å kutte bryst ribbeinet buret etter at lungene er løsrevet fra parietal pleura. Denne metoden unngår lungeskade forårsaket av kirurgisk utstyr. Et annet viktig skritt oppstår når du binder den rette hoved bronkie. Det er viktig å identifisere som er musen rett fliker. Plassere lungene i en posisjon hvor de kan sees fra en rygg visning muliggjør enklere identifisering av plasseringen av lungene.
Den andre delen er under lunge fiksering prosessen ved hjelp av spesialisert utstyr. Et kritisk trinn oppstår når du setter inn lunge prøven i den nedre beholder formalin port. Det bør bekreftes at innsetting er tett sikret for å hindre lunge prøve avløsning fra formalin porten under konstant trykksetting prosessen. Et annet aspekt å markere er slange forbindelsen mellom de tre delene av spesialisert utstyr (nedre beholder, øvre container og pumpe). Alle rørtilkoblinger skal være tett tilkoblet. Hvis det oppstår lekkasje, vil det formalin volumet i den øvre beholderen avta, og dermed redusere konstant trykk.
Ifølge anbefalinger fra Society of toxicologic patologi, intratrakeal drypping av formalin har fordeler for gnager lunge modell, som råder over sine ulemper22. De har foreslått bruk av en intratrakeal formalin fiksering metode når du utfører kvantitative studier av alveolære lunge morphometry. Intratrakeal lunge drypping har to fordeler, inkludert bevaring av luftveiene og alveolære vegg, samt visualisering av lunge parenchyma22. En studie av Braber et al. avslørte at den intratrakeal formalin drypping metoden er overlegen når det gjelder å bevare lunge strukturen sammenlignet med vakuum inflasjonen og hele kroppen-metoder13. Den nåværende metoden benytter intratrakeal drypping i en musemodell for å optimalisere visualisering av alveolære området.
Når det gjelder festemidler, 10% formalin, som inneholder formaldehyd, er konvensjonelt brukt. Formaldehyd er mye brukt som et festemiddel for immunopathological undersøkelser fordi det ikke helt ødelegge protein immunogenisitet. Imidlertid anbefaler ATS/ERS uttalelsen ikke formalin fiksering, fordi den ikke tilstrekkelig stabilisere vev struktur14. Glutaraldehyde anbefales for luftveis drypping i stedet; Det er imidlertid gjenstand for å ødelegge protein immunogenisitet, noe som resulterer i en uegnet festemiddel for immunhistokjemi. Flere bevis har rapportert at den faste lungene kan gis for morphometric evaluering (f. eks, betyr lineære avskjærer, indre overflateareal, og destruktiv indeks) etter formalin fiksering ved hjelp av gjeldende fiksering system12 , 15 priser og , 16 flere , 17 i , 18. gjerne, glutaraldehyde kan adoptert for det aktuelle system; Dermed kan forskerne velge både agenter i dagens system i henhold til eksperimentelle behov.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen konkurrerende interesser å erklære.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet delvis av JSP KAKENHI Grant Number 26461199 (T. Sato) og Institutt for miljø-og Kjønnsspesifikk medisin, Juntendo University Graduate School of Medicine, Grant Number E2920 (T. Sato). Funder hadde ingen rolle i utformingen av dagens metoder og skriftlig manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% formalin (formalin neutral buffer solution) | Wako | 060-01667 | |
| Bent forceps | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cannula, size 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Cannula, size 22G | Terumo | SR-OT2225C | Cannula to exsanguinate lung |
| Forceps | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Lower container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
| Roller pump | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Pump machine to exsanguinate lung |
| Roller pump RP-2000 | Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Pressure equipment pump |
| Silicone tube Ø 9 mm | Sansyo | 94-0479 | Pressure equipment component |
| Somnopentyl (64.8 mg/mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Sodium |
| Surgical scissor | Hammacher | HSB014-11 | |
| Suture thread, size 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Syringe, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| Syringe, 1 ml with needle | Terumo | SS-01T2613S | |
| Syringe, 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Three-way stopcock | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Upper container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
References
- Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
- Pauwels, R. A., Rabe, K. F. Burden and clinical features of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Lancet. 364 (9434), 613-620 (2004).
- Spurzem, J. R., Rennard, S. I.
- Vlahos, R., Bozinovski, S., Gualano, R. C., Ernst, M., Anderson, G. P.
- Vlahos, R., Bozinovski, S. Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD. Clinical Science (Lond). 126 (4), 253-265 (2014).
- Stevenson, C. S., Belvisi, M. G. Preclinical animal models of asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Expert Review of Respiratory Medicine. 2 (5), 631-643 (2008).
- Stevenson, C. S., Birrell, M. A. Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance. Pharmacology and Therapeutics. 130 (2), 93-105 (2011).
- Vandivier, R. W., Ghosh, M. Understanding the Relevance of the Mouse Cigarette Smoke Model of COPD: Peering through the Smoke. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 3-4 (2017).
- Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (1), L1-L15 (2008).
- Rennard, S. I., Togo, S., Holz, O. Cigarette smoke inhibits alveolar repair: a mechanism for the development of emphysema. Proceedings of the American Thoracic Society. 3 (8), 703-708 (2006).
- Nikula, K. J., et al. A mouse model of cigarette smoke-induced emphysema. Chest. 117, 246S-247S (2000).
- Sato, T., et al. Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).
- Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), L843-L851 (2010).
- Hsia, C. C., et al. An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).
- Kasagi, S., et al. Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).
- Koike, K., et al. Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).
- Koike, K., et al. Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).
- Suzuki, Y., et al. Hydrogen-rich pure water prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in SMP30 knockout mice. Biochemical and Biophysical Research Communications. 492 (1), 74-81 (2017).
- Saad, M., Ruwanpura, S. M. Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).
- Thurlbeck, W. M. The internal surface area of nonemphysematous lungs. The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).
- Saetta, M., et al. Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers. The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).
- Renne, R., et al. Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies. Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).
- Schneider, J. P., Ochs, M. Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).
- Wright, J. L. Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema. Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).
- Wright, J. L., Churg, A. Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig. The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).
- Thurlbeck, W. M. Internal surface area and other measurements in emphysema. Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).
- Wright, J. L., et al. Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model. Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide. Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).
- Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice. Journal of Visualized Experiments. (95), 52236 (2015).
- Nakanishi, Y., et al.
- Maeno, T., et al. CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice. Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).
- Sato, M., et al. Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays. Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).
