Aquí se presenta un protocolo útil para la fijación pulmonar que crea una condición estable para la evaluación histológica de muestras pulmonares a partir de un modelo de ratón de enfisema. La principal ventaja de este modelo es que puede fijar muchos pulmones con la misma presión constante sin colapso pulmonar o deflación.
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Artículo de método
Fijación pulmonar bajo presión constante para la evaluación del enfisema en ratones
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Resumen
Resumen
El enfisema es una característica significativa de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). Los estudios que involucran un modelo de ratón enfisematoso requieren una fijación pulmonar óptima para producir muestras histológicas confiables del pulmón. Debido a la naturaleza de la composición estructural del pulmón, que consiste en gran parte de aire y tejido, existe el riesgo de que colapse o se desinflen durante el proceso de fijación. Existen varios métodos de fijación pulmonar, cada uno de los cuales tiene sus propias ventajas y desventajas. El método de fijación pulmonar presentado aquí utiliza presión constante para permitir una evaluación óptima del tejido para estudios utilizando un modelo de pulmón de ratón enfisematoso. La principal ventaja es que puede arreglar muchos pulmones con la misma condición a la vez. Los especímenes pulmonares se obtienen de ratones crónicos expuestos al humo del cigarrillo. La fijación pulmonar se realiza utilizando equipos especializados que permiten la producción de presión constante. Esta presión constante mantiene el pulmón en un estado razonablemente inflado. Por lo tanto, este método genera un espécimen histológico del pulmón que es adecuado para evaluar el enfisema leve inducido por humo de cigarrillo.
Introducción
La EPOC es una de las principales causas mundiales de muerte1. El humo del cigarrillo es la causa más importante de la EPOC, pero los mecanismos de la patogénesis siguen estando incompletamente definidos. La EPOC demuestra dos características principales, incluyendo la limitación progresiva del flujo de aire y una respuesta inflamatoria anormal del pulmón. El trastorno hemofusostoso ocurre con frecuencia en los pulmones de los pacientes con EPOC2. Los hallazgos patológicos del enfisema se caracterizan por la destrucción de la pared alveolar3. Se han utilizado varias especies animales para generar ....
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Protocolo
Los siguientes métodos han sido aprobados por los Comités de Cuidado y Uso de Animales de la Escuela universitaria de Medicina de Juntendo. Se siguieron las Directrices para la correcta realización de experimentos con animales, Consejo Científico del Japón, 1 de junio de 2006. Hay tres pasos principales en este método: 1) disección del ratón, 2) exsanguinación pulmonar y 3) fijación de tejidos pulmonares asistidos por equipos especializados. Típicamente, los especímenes pulmonares se procesan para su incrustación después de 48 h de fijación12,15,16,
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Resultados
Como se describió anteriormente, el equipo especializado, que genera una presión constante extendida, se puede dividir en tres partes(Figura 3A). La parte inferior es el punto en el que insertar la muestra pulmonar(Figura 4A). El pulmón está conectado a través de una cánula (20 G) a la punta del flujo de formalina utilizando una polla de parada de tres vías(Figura 4B). La presión se.......
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Discusión
El procedimiento de fijación para los pulmones de roedores que se presenta aquí no es novedoso; sin embargo, este sistema tiene varias ventajas. En primer lugar, puede fijar muchos pulmones (máximo de 20) con la misma condición a la vez. La Sociedad de Patología Toxicológica afirma que la presión por la insclasificación de gravedad varía de 22–25 cmH2O22. En particular, varios estudios han realizado fijación pulmonar a una presión de 25 cmH2O13,
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses en competencia que declarar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por JSPS KAKENHI Grant Number 26461199 (T. Sato) y el Institute for Environmental and Gender-Specific Medicine, Juntendo University Graduate School of Medicine, Grant Number E2920 (T. Sato). El fundero no tuvo ningún papel en el diseño de los métodos actuales y en la escritura del manuscrito.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Formalina al 10% (solución tampón neutra en formalina) | Wako | 060-01667 | |
| Pinza doblada | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cánula, tamaño 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Cánula, tamaño 22G | Terumo | SR-OT2225C | Cánula para desangrar pulmón |
| Pinza | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Contenedor inferior (material de vidrio acrílico) | Tokyo Science | Hecho a medida Componente del | equipo a presión |
| Bomba de rodillo | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Máquina de bombeo para desangrar pulmón |
| Bomba de rodillo RP-2000 | Eyela (Tokio Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Bomba de equipo a presión |
| Tubo de silicona y Oslash; 9 mm | Sansyo | 94-0479 Componente de equipo a | presión |
| Somnopentyl (64.8 mg/mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Sodio |
| Tijera quirúrgica | Hammacher | HSB014-11 | |
| Hilo de sutura, tamaño 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Jeringa, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| Jeringa, 1 ml con aguja | Terumo | SS-01T2613S | |
| Jeringa, 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Llave de paso de tres vías | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Contenedor superior (material de vidrio acrílico) | Tokyo Science | Hecho a medida Componente de | equipo a presión |
Referencias
- Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
- Pauwels, R. A., Rabe, K. F.
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Reimpresiones y permisos
