En este trabajo, nuestro objetivo es describir el funcionamiento de la técnica de centrifugación del gradiente de densidad y su aplicación en la investigación de fisiología de la esperma.
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Artículo de método
Recogida de esperma de calidad diferencial mediante centrifugación de gradiente de densidad
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
En reproducción sexual, un gameto masculino o espermatozoide se fusiona con un gameto femenino para lograr la fertilización. Sin embargo, un gran número de espermatozoides con capacidad de fertilización está obligado a interactuar con un gameto femenino para fertilización. Como tal, la capacidad fecundante de los espermatozoides individuales es fundamental para la reproducción acertada. Centrifugación de gradiente de densidad se ha utilizado durante décadas como un método reproducible, rápido, eficiente, eficaz y extremadamente adaptable para recoger sólo alta calidad esperma para ser utilizado en reproducción asistida. Los protocolos que hemos descrito en este documento se centran en la utilización de la técnica de gradiente de centrifugación (PDGC) de densidad discontinua de Percoll para aislar a tres poblaciones distintas de la esperma de gallo por su calidad. Hemos podido recoger espermatozoides de calidad, medio y bajo. También describimos protocolos reproducibles que implican determinación potencial de fertilidad de los espermatozoides mediante la evaluación de su viabilidad, movilidad y penetración. Colección de esperma por su calidad técnica PDGC sería útil con precisión y caracterizar bien esperma con diferencial fertilidad potencial.
Introducción
En los vertebrados, gametos masculinos someterse a intensa presión selectiva; por lo tanto la aptitud reproductiva de un hombre es fundamental para lograr la fertilización exitosa. Los machos de cualquier especie vertebrado dado deben ser capaces de producir espermatozoides en grandes cantidades y calidad suficiente para satisfacer las necesidades de fertilización. Células de la esperma, con una cabeza del espermatozoide y un flagelo, son las células más polarizadas en el cuerpo. También son muy heterogéneos en la calidad de los espermatozoides (vivo y muerto, morfológicamente normal y anormal e inmóvil, poco móvil y alta móvil), que se revela a través de la amplia va....
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Protocolo
Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el cuidado institucional del Animal y el Comité uso (IACUC) de la Universidad de Georgia.
1. lavado mediante centrifugación tradicional
- Preparar la solución amortiguadora de fosfatos (PBS). Añadir 8,0 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,44 g de Na2HPO4 y 0,24 g de KH2PO4 a 800 mL de agua destilada (dH2O). Ajustar el pH a 7.4 con 0.1 N HCl y llevar la solución a 1 L con dH2O.
- Preparar el tampón de motilidad. Añadir 6,5 g de NaCl, 4,5 g de glucosa, 0,444 g de CaCl2 y 11,5 g de N - tris-[hidroximetil] ....
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Resultados
La técnica PDGC resultó en separación distinta de tres capas de esperma por grado de calidad a través de todos los parámetros. Esperma se separa en una capa de alta calidad por debajo de la mayor solución de densidad, una capa de calidad media entre la mayor y una solución de menor densidad y una capa de baja calidad por encima de la solución de menor densidad. Estas diferencias en calidad se evidencian mediante claras diferencias en la viabilidad (figura 4),.......
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Discusión
Fertilidad no sólo determina la rentabilidad de la producción animal, sino que también actúa como un medio de selección natural de especies de existencia. Es de la última función de una célula de la esperma fertilizar un óvulo. El oviducto de una hembra selecciona sólo los espermatozoides más aptos para asegurar la fertilización del óvulo23,24. In vitro los estudios también han revelado una estrecha correlación entre rasgos cualitativos espermatozoides y.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Accudenz | Precise Chemical and Scientific Corporation, Westbury, NY, EE. UU | AN7050 | |
| Percoll | Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, EE. UU | P7828 | |
| Schiff' s reactivo | Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, EE. UU | . 3952016 | |
| TES | Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, EE. UU | T1375 | |
| Eosin Y | Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, EE. UU | E4009 | |
| Nigrosin | Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, EE. UU | . 198285 | |
| Centrífuga ST 40R | Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU | . 75004524 | |
| DU 530 Life Sciences Espectrofotómetro UV/Vis | Beckman Coulter, Brea, CA, EE. UU | No se ha encontrado ningún catálogo | |
| Microscopio de fluorescencia invertida y contraste de fase Olympus IX 71 | Olympus America Inc., PA, EE. UU | No se ha encontrado ningún catálogo |
Referencias
- Spargo, S. C., Hope, R. M. Evolution and nomenclature of the zona pellucida gene family. Biology Reproduction. 68, 358-362 (2003).
- Okamura, F., Nishiyama, H. The passage of spermatozoa through the vitelline membrane in the domestic fowl, Gall....
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Reimpresiones y permisos
