Describimos un protocolo quirúrgico para inducir consistentemente aneurismas de la aorta torácica descendentes robustos en ratones. El procedimiento consiste en la toracotomía izquierda, la exposición a la aorta torácica y la colocación de una esponja empapada en elastasa pancreática porcina en la pared aórtica.
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Artículo de método
Modelo Quirúrgico Murino de Aneurisma aórtico torácico descendente fortuito tópico
En este artículo
Resumen
Resumen
Según el Centro para el Control de Enfermedades, los aneurismas aórticos (AA) fueron considerados una de las principales causas de muerte en todas las razas y ambos sexos de 1999 a 2016. Se forma un aneurisma como resultado del debilitamiento progresivo y la dilatación eventual de la aorta, que puede romperse o desgarrarse una vez que alcanza un diámetro crítico. Los aneurismas de la aorta descendente en el pecho, llamados aneurismas de la aorta torácica descendente (dTAA), conforman una gran proporción de casos de aneurisma en los Estados Unidos. La ruptura dTAA no contenida es casi universalmente letal, y la reparación electiva tiene una alta tasa de morbilidad y mortalidad. El propósito de nuestro modelo es estudiar dTAA específicamente, dilucidar la fisiopatología de dTAA y buscar dianas moleculares para detener el crecimiento o reducir el tamaño de dTAA. Al tener un modelo murino para estudiar la patología torácica con precisión, se pueden desarrollar terapias dirigidas para probar específicamente la dTAA. El método se basa en la colocación de la elastasa pancreática porcina (EPP) directamente en la pared aórtica murinosexterna después de la exposición quirúrgica. Esto crea una reacción destructiva e inflamatoria, que debilita la pared aórtica y permite la formación de aneurisma durante semanas o meses. Aunque los modelos murinos poseen limitaciones, nuestro modelo dTAA produce aneurismas robustos de tamaño predecible. Además, este modelo se puede utilizar para probar objetivos genéticos y farmacéuticos que pueden detener el crecimiento de dTAA o prevenir la ruptura. En pacientes humanos, intervenciones como estas podrían ayudar a evitar la ruptura del aneurisma y la difícil intervención quirúrgica.
Introducción
El propósito de este método es estudiar el desarrollo, la fisiopatología y los cambios estructurales en la aorta torácica descendente murina durante la formación del aneurisma aórtico. Nuestro modelo ofrece un método reproducible y consistente para inducir aneurismas de la aorta torácica (dTAA) en ratones permitiendo así la prueba de diversos inhibidores genéticos y farmacológicos. Este trabajo puede ayudar a identificar fármacos y terapias génicas que podrían traducirse en una estrategia de tratamiento viable para los seres humanos con enfermedad de dTAA.
los dTAa se forman cuando la pared de la aorta torácica se debilita y se dilata con e....
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Protocolo
Los protocolos animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Virginia (núm. 3634).
1. Inducción de anestesia e intubación
- Coloque un ratón C57BL/6 macho de 8-10 semanas de edad en una cámara cerrada con flujo continuo de 5% de isoflurano y mezcla de oxígeno durante 5 minutos, hasta que las respiraciones se desaceleren visiblemente.
NOTA: Se pueden utilizar diferentes cepas, géneros y edades de los ratones dependiendo del protocolo experimental. Los ratones hembras pueden ser más difíciles de intubar debido a un tamaño más pequeño y, por lo tanto, a las vías respiratorias....
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Resultados
La aplicación de nuestro protocolo da como resultado un dTAA robusto en ratones en comparación con los controles salinos. Los TAA desarrollados tienen forma fusiforme y se producen únicamente en la parte tratada de la aorta (Figura1 y Figura 2)11. La Figura 2 muestra un ejemplo de una medición de micrometría de vídeo en la cosecha de tejidos. Usando la Ecuación 1, la dilatación aórtica es 130% en este ejemplo.......
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Discusión
La aorta torácica y abdominal son celular y embrionariamente distintas, lo que es relevante para la enfermedad aneurisma14,15,16. Por lo tanto, se necesita un modelo animal específico para estudiar TAA. Aunque otros modelos de dTAA murinos se han publicado8, el nuestro es el único modelo para crear dilatación aórtica torácica descendente que puede considerarse verdaderamente aneurisma (más del 50% de dila.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por las subvenciones de la Subvención de Desarrollo Científico de la AHA 14SDG18730000 (M.S.), NIH K08 HL098560 (G.A.) y RO1 HL081629 (G.R.U.). Este proyecto fue apoyado por la Beca de Investigación de la Fundación de Cirugía Torácica para la Investigación y la Educación (TSFRE) (PI: G. Ailawadi). El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa necesariamente las opiniones de la NHLBI o del TSFRE. Agradecemos a Anthony Herring y Cindy Dodson por su conocimiento y experiencia técnica.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Angiocatéter (22G) | Utilizado para | ||
| pinzas Dumont de tubo ET; Patrón #7 x2 | Roboz | RS-4982 | |
| Graefe Pinzas de tejido | Roboz | RS-5158 | |
| Pinzas Harms x2 | Roboz | RS-5097 | |
| Portaagujas Intracardíacas; Extra delicado; mordazas de carburo; 7" de longitud | Roboz | RS-7800 | |
| KL 1500 Fuente de luz LED | Leica | 150-400 | |
| M205A Microscopio de disscción | Leica | CH 94-35 | |
| Tijeras de iris, 11 cm, carburo de tungsteno | World Precision Instruments | 500216-G | |
| clip de metal | Uso con el juego de retractores de ratón | ||
| Juego de retractores de ratón | Kent | SURGI-5001 | Necesita 2 fijadores cortos y 1 alto |
| Ventilador de ratón MiniVent tipo 845, 115 V, fuente de alimentación con conector de EE. UU | Aparato Harvard | 73-0043 | Ventilador MiniVent para ratones (modelo 845), animal individual, |
| Sigma Aldrich | de páncreas porcino | E0258-50MG | Se puede comprar en botellas de varios tamaños |
| Recipiente pequeño Kit de cauterizador | Fine Science Tools | 18000-00 | Se recomienda utilizar pilas AA recargables |
| Tijeras de resorte, 10,5 cm | World Precision Instruments | 14127 | |
| Hisopos estériles (esponjas) | Sugi | 31603 | Se puede cortar a medida |
| Plataforma quirúrgica Surgi Suite Kent | Fijar al tablero de clips | ||
| Tech IV Isoflurano Vap | Jorgensen Laboratorios | J0561A Vaporizador | de anestesia |
Referencias
- Coady, M. A., et al. What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).
- Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A.
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Reimpresiones y permisos
