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Artículo de método

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

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DOI:

10.3791/61865

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12 de noviembre de 2020

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* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Resumen

Diversas enfermedades vasculares como la retinopatía diabética, la oclusión de venas o arterias retinianas y el síndrome isquémico ocular pueden conducir a isquemia retiniana. Para investigar los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana, es necesario desarrollar modelos experimentales relevantes. Anatómicamente, un vaso principal de suministro de sangre de retina es la arteria oftálmica (OpA) y OpA se origina en la arteria carótida interna de la arteria carótida común (CCA). Por lo tanto, la interrupción de la CCA podría causar efectivamente isquemia retiniana. Aquí, establecimos un modelo de ratón de isquemia retiniana mediante oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común (tBCCAO) para atar la CCA derecha con suturas de seda 6-0 y ocluir la CCA izquierda transitoriamente durante 2 segundos a través de una abrazadera, y demostramos que tBCCAO podría inducir isquemia retiniana aguda que conduce a disfunción retiniana. El método actual reduce la dependencia de los instrumentos quirúrgicos utilizando únicamente agujas quirúrgicas y una abrazadera, acorta el tiempo de oclusión para minimizar la muerte inesperada de animales, que a menudo se ve en modelos de ratón de oclusión arterial cerebral media, y mantiene la reproducibilidad de los hallazgos isquémicos retinianos comunes. El modelo se puede utilizar para investigar la fisiopatología de las retinopatías isquémicas en ratones y más se puede utilizar para la detección de fármacos in vivo.

Introducción

La retina es un tejido neurosensorial para la función visual. Dado que se necesita una cantidad sustancial de oxígeno para la función visual, la retina se conoce como uno de los tejidos más exigentes de oxígeno en el cuerpo1. La retina es susceptible a enfermedades vasculares, ya que el oxígeno se administra a través de los vasos sanguíneos. Varios tipos de enfermedades vasculares, como la retinopatía diabética y la oclusión de los vasos sanguíneos retinianos (venas o arterias), pueden inducir isquemia retiniana. Para investigar los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana, se consideran necesarios modelos experimentales reproducibles y ....

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Protocolo

Todos los métodos descritos aquí han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Escuela de Medicina de la Universidad keio.

1. Preparación de instrumentos quirúrgicos y animales

  1. Autoclave instrumentos quirúrgicos y mantenerlos en 70% alcohol etílico. Antes de cada nuevo procedimiento quirúrgico, limpie los instrumentos quirúrgicos cuidadosamente usando un 70% de alcohol etílico.
  2. Preparar ratones MACHO BALB/cAJc1 (6 semanas de edad, 26-28 kg) en un espacio específico libre de patógenos (SPF) para mantener condiciones estériles antes, durante y después de la cirugía.

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Resultados

Después de la circulación sistémica de FITC-dextran durante 2 minutos, se examinaron las vasculaturas retinianas de las retinas izquierda y derecha en ratones operados por sham y ratones operados por tBCCAO(Figura Suplementaria 1). Fitc-dextran era totalmente visible en las dos retinas en los ratones operados por sham y la retina izquierda en los ratones operados por tBCCAO, mientras que era parcialmente detectable en la retina derecha en los ratones operados por tBCCAO.

Despu.......

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Discusión

En el estudio, hemos demostrado que la tBCCAO, utilizando suturas simples y una abrazadera, podría inducir isquemia retiniana y disfunción retiniana que lo acompaña. Además, hemos demostrado que nuestro protocolo actual para el desarrollo de un modelo de ratón de isquemia retiniana es más fácil y rápido en comparación con otros protocolos anteriores para el desarrollo de modelos de lesiones isquémicas retinianas2,3,7.

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por grants-in-aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 a Toshihide Kurihara y 20K18393 a Yukihiro Miwa) del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología (MEXT).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Clorhidrato de atipnamezolZenoaqAntisedanPara antianestésico
Applied Biosystems 7500 FastApplied Biosystems-ParaqPCR
Tartrato de butorfanolMeiji Seika PharmaVetorphalePara anestesia
Analizador BZ-IIKEYENCE-Parauna combinación de imágenes
BALB/cAJc1CLEA-Mouse cepa
β-actina (8H10D10) mAb de ratónCST3700Para Western blot
Pinza de pinzaWorld Precision InstrumentsWPI 500451Para cirugía
Pinzas Dumont #5Fine Science Tools11251-10Para cirugía
Solución DAPIDojindo340-07971Para IHC
Envisu SD-OCT sistemaLeicaR4310Para PTU
FITC-dextranoMerkFD2000SPara la perfusión sanguínea en la retina
Microscopio de fluorescenciaKEYENCEBZ-9000Para la detección de fluorescencia
Hidrato de gatifloxacinaSenju PharmaceuticalGachifuroPara la infección antibacteriana
GFAP Anticuerpo monoclonal (2.2B10)Thermo13-0300Para IHC
Almohadilla térmicaMarukanRH-200Para cirugía
HIF-1 y alfa; (D1S7W) XP Rabbit mAbCST36169Para Western blot
ImageQuant LAS 4000 miniGEHealthcare-Paraquimioluminiscencia
MidazolamSandoz K.KSANDOZPara anestesia
Microtomo Tissue-Tek TEC 6Sakura-Paraseccionar
MedetomidinaOrion CorporationDomitorPara anestesia
Aguja soporteHandayaHS-2307Para cirugía
PuRECMAYOCorporation-ParaERG
TijeraFine Science Tools91460-11Para cirugía
Hialuronato de sodioSanten PharmaceuticalHyaleinPara lubricación ocular
Tropicamida/Clorhidrato de penilefrinaSanten PharmaceuticalMydrin-PPara midriasis
Sutura de seda 6-0NatsumeE12-60N2Para cirugía

Referencias

  1. Anderson, B. Ocular effects of changes in oxygen and carbon dioxide tension. Transactions of the American Ophthalmological Society. 66, 423-474 (1968).
  2. Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O.

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Reimpresiones y permisos

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