Summary
Många gnagare modeller av endometrios begränsas av teknisk komplexitet, reproducerbarhet och/eller behov av immunkomprometterade djur eller speciella reportermöss. Vi presenterar ett förenklat system av lesion induktion med hjälp av någon experimentell mus med ett oberoende verifierbart, objektiva poängsystem och utan krav på ovariectomy eller överlevnad kirurgi.
Abstract
Endometrios är en ledande orsak till bäckensmärta och infertilitet. Det definieras av förekomsten av endometrievävnad på extrauterin platser. Utvecklingen av nya terapier och diagnostiska verktyg för endometrios har begränsats delvis på grund av utmaningar i att studera sjukdomen. Utanför primater menstruerar få däggdjur, och ingen utvecklar spontan endometrios. Gnagare modeller är populära men kräver konstgjord induktion av endometrios, med många använder antingen immunkomprometterade möss eller kirurgiskt inducerad sjukdom. Nyligen har mer uppmärksamhet lagts på modeller som involverar intraperitoneal injektion. Vi presenterar en murinmodell av endometrios som integrerar flera funktioner i befintliga endometriosmodeller i ett nytt, förenklat system som förlitar sig på mikroskopisk kvantifiering i stället för subjektiv gradering. I denna modell utför vi hormonell stimulering av donatormöss, intraperitoneal injektion, systematisk bukundersökning och vävnadsskörd och histologic kvantifiering som kan utföras och verifieras när som helst efter obduktion. Denna modell kräver minimala resurser och utbildning. kräver inte expertis från labbtekniker vid murinöverlevnadskirurgi eller vid identifiering av grova endometriotiska lesioner, kan användas i immunkomprometterade, immunkompetenta och/eller muterade möss, och på ett tillförlitligt sätt skapar endometriotiska skador som är histologiskt förenliga med mänskliga endometriotisk sjukdom.
Introduction
Endometrios är en gåtfull sjukdom i det kvinnliga reproduktionssystemet med betydande ekonomiska och hälsomässiga bördor på kvinnor1,2. Etiologin av endometrios är inte helt klarlagt, och flera förklaringar har föreslagits inklusive coelomic metaplasi, embryonala Müllerian vilar, rekrytering av benmärg härledda stamceller och bakåtsträvande menstruation3. Medan flera aspekter av dessa föreslagna mekanismer kan vara inblandade, och ingen enskild förklaring kan förklara alla former av sjukdomen, är den ledande modellen av endometrios patogenes retrograd menstruation. Retrograd menstruation är passagen av menstruationsutflöde genom äggledarna och in i peritonealhålan; det uppskattas att 90% av menstruerande kvinnor regelbundet genomgår retrograd menstruation4,5. Med tanke på detta vanliga fenomen av bakåtsträvande menstruation, varför endometrios utvecklas endast i en delmängd av kvinnor är oklart5. För att bättre förstå etiologin av denna sjukdom är direkta mänskliga studier inte genomförbara och djurstudier är motiverade.
Endometrios är en utmaning både att behandla och studera. Prevalensen av sjukdomen är inte känd men uppskattas till 10%1. Medan vissa avancerade typer av endometrios kan identifieras noggrant genom noninvasive imaging, uppnås en slutgiltig diagnos endast genom histopatologisk analys av kirurgiskt erhållna biopsi exemplar. lesioner som visuellt verkar vara sjuka, kan i själva verket vara fibros eller ärrbildning från andra orsaker6. Sjukdomens svårighetsgrad och omfattning korrelerar inte med symptomatologi7.
Endometriosskador består av heterogena celltyper och populationer som interagerar på komplexa sätt inom mikromiljön, vilket begränsar nyttan av cellulära modeller8,9. In vivo-modeller finns, men dessa har inneboende utmaningar ochbegränsningar 10,11,12. Primatmodeller är idealiska men är ofta integenomförbara 13,14,15. Få icke-primat däggdjur menstruerar och utvecklar endometrios spontant16. Gnagare modeller av endometrios finns men var och en har begränsningar17. Många av dessa modeller kräver överlevnadskirurgi för sutur eller implantat endometrievävnad i donatormottagaren vägg eller tarm, lägger till teknisk komplexitet, behov av anestesi och förvirrar immunfaktorer från själva operationen18,19,20. Dessutom kräver många modeller ovariectomy och östrogen tillskott; samtidigt öka lesion avkastning, detta lägger tid, kostnader och ytterligare överlevnad kirurgi. Intraperitoneal (IP) injektionsmodeller kräver inte anestesi eller överlevnad kirurgi, och dessa modeller simulerar logiskt bakåtsträvande menstruation bättre än suturing modeller21,22,23. De flesta IP-modeller, dock, är föremål för mer variation i lesion plats på grund av slumpmässig spridning av livmodercancer fragment efter injektion och därför för att mer partiskhet i lesion identifiering och mätning.
Här presenterar vi en murinmodell av endometrios som integrerar flera funktioner i befintliga endometriosmodeller i ett nytt, förenklat och effektivt system som förlitar sig på mikroskopisk kvantifiering i stället för subjektiv gradering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OBS: Användningen av djur i denna studie godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Cleveland Clinic Lerner Research Institute. Alla allmänt tillgängliga standarder för djurvård och användning utfördes enligt riktlinjer från National Institutes of Health. Denna procedur använder aseptiska tekniker. Petriskålen är steril. Pbs/saltlösningen som används är steril. De kirurgiska instrumenten för obduktion och vävnad dissekering steriliseras via autoklav. Vi använder 70% EtOH på instrumenten mellan djurfall (om mer än en per session) för att minska kontamineringen.
1. Beredning av donatormöss och mottagarmöss (se figur 1)
- Se till att lämpligt godkännande finns på plats för att arbeta med försöksdjur.
- Bestäm musstammen. I dessa experiment användes vildtyp och mutanta möss med en C57BL/6J-bakgrund, men utredare som använder liknande modeller rapporterar framgång med andra musstammar som BALB / c möss10. Dessutom kan donator- och/eller mottagarmöss använda reportersystem, såsom GFP- eller RFP-möss (se figur 2 och figur 3).
- För timing av livmodercancer vävnad transplantation, se till att donator möss är mellan 22-24 dagar gamla vid tidpunkten för gonadotropin injektion. Detta säkerställer att de är reproduktivt naiva, t.ex.
- Se till att mottagarmössen är reproduktions intakta (ingen tidigare ovariektomi) mellan 2 och 4 månaders ålder. Även om det inte krävs, rekommenderas att placera urinindränkta sängkläder från en manlig mössbur regelbundet i mottagarens bur för att underlätta pågående estrisk cykling och igen vid 72 h före endometrievävnadstransplantation.
OBS: Detta säkerställer inte synkronisering av mottagarnas estriska cykel, eftersom placeringen urinindränkta sängkläder är mycket beroende av mängden manliga sängkläder som används och har varierande resultat. Om synkronisering av eströscykeln önskas, kommer tre på varandra följande subkutana injektioner på 100 ng/100 μL estradiol att föra alla djur till estriska fasen. Medan vi fann ingen skillnad i lesion induktion baserat på fas av estrous cykel, andra grupper har funnit cykel fasen vara viktig10. - Subkutant injicera gravida Mare Serum Gonadotropin (PMSG, 2 IE utspädd i 200 μL) i donatormöss subkutant med en fin nål (25-27 G rekommenderas). Ge inte PMSG till mottagarmöss, eftersom det kommer att utlösa ägglossning och efterföljande hög progesteronmiljö, vilket är mindre mottagligt för endometriosbildning.
OBS: Tidigare musmodeller har använt antingen PMSG eller östrogen för att stimulera endometrieproliferation hos donatormössen före endometrieskörd23. PMSG rekommenderas av följande skäl: Halveringstid för PMSG är 40 h medan halveringstid på 17-beta-estradiol bara är 2 h. Användning av en enda subkutan injektion av PMSG i givarna 40 h före upphandling av endometrievävnad ger en ihållande varaktighet av exponering för gonadotropin stimulering, som verkar för att stimulera endogen östrogen. Många preparat av exogen östrogen kräver flera injektioner för att tillräckligt prime endometrium. - Efter PMSG injektion, schema obduktion, upphandling och transplantation till mottagaren mellan 38-42 h. Tid för endometrievävnadsskörden efter gonadotropininjektion för att säkerställa insamling av vävnad före ägglossning, som uppträder vid 42 timmar efter injektionen. Ägglossning producerar en hög progesteron (P4) miljö, som skulle minska lesion etablering.
2. Upphandling av donatormusen endometrievävnad
- Efter dödshjälp av donatormus (med CO2-kammare följt av livmoderhalscancer förskjutning), spraya buken med 70% etanollösning; Detta bidrar till att minska kontamineringen av den anskaffade vävnaden från hudfloran och från lossade hårstrån. Med dissekerande sax, gör en ytlig tvärgående klipp vid mittlinjen genom huden och subkutan vävnad. Ta sedan tag i varje sida av hudsnittet, använd trubbig dragkraft för att öppna buken.
- Identifiera livmodern. Innan du tar bort livmodern, trimma bort intilliggande bindväv. Transect varje livmoderhorn strax under deras respektive äggledare och transect sedan livmoderhalsen för att ta bort hela livmodern i blocket.
- Efter avlägsnande från bukhålan, inspektera livmodern noggrant och ta bort eventuellt extra perifert fett eller bindväv. Placera livmodern i en droppe kall PBS på en petriskål. Bestäm och dokumentera hela livmoderns kombinerade massa.
- Transect varje horn från livmodern fundus, vilket gör transection så nära fundus som möjligt för att maximera längden på varje horn. Använd hjälp av ett dissekerande mikroskop, placera ett blad av den dissekerande saxen inuti lumen i det första hornet och skär sedan längs rörets huvudaxel. Öppna försiktigt röret, tänk på vilken sida som är serosa och vilken sida som är epitel.
- Lägg 500 ml saltlösning eller PBS på en ny Petri-maträtt; vätskan kommer att hålla ihop på grund av ytspänning.
- Utför sedan fragmentering av livmodern på ett enhetligt sätt. Det är bättre att ha färre större skador än många mindre skador. Börja med att separera epitelet från myometriumet genom att ta tag i livmodercancerskiktet och skala bort det.
- Alternativt fragmenterar helt enkelt vävnaden utan att separera myometrium (så länge epitelsidan är helt exponerad), men att behålla myometrium minskar den fysiologiska relevansen av denna modell för mänsklig sjukdom. Se till att fragmenten är så stora som möjligt men tillräckligt små för att passera genom en 18 G nål; (1 mm x 1 mm rekommenderas).
- Samla 10-12 av dessa 1 mm x 1 mm fragment från det första hornet (vilket ungefär motsvarar 40 mg vävnad i C57BL/6J möss). Placera insamlade fragment i vätskeuppsamlingen.
- Utför samma steg för det andra livmoderhornet för totalt cirka 24 fragment per mus. Dokumentera det totala antalet fragment.
3. Peritoneal injektion av vävnadsfragment i mottagarmusen
- Aspirera de upphängda 1 mm x 1 mm fragmenten med den trubbiga änden av en 1 cc spruta; Den totala volymen ska vara 1 ml.
- Fäst en 18 G nål på hela sprutan och ladda vätskan i nålen. Överväg en falsk injektion tillbaka i Petri-skålen för att säkerställa att all vävnad kommer att passera genom nålen.
- Ta mottagarmusen. Antingen före eller efter IP-injektion, få ett vaginalt utstryk av mottagarmusen för estrisk cykeldokumentation (10 μL saltlösning med glödlampans spruta vid vaginalöppningen och pläterad på glasglaset med täckglaset).
- Utför intraperitoneal injektion av fragmenten med sprutan i 45 graders vinkel, var noga med att inte injicera subkutant.
- Om fragmenten kvarstår efter injektionen, dra ytterligare 200 μL av vätskan i sprutan för injektion för att säkerställa att alla fragment injiceras framgångsrikt intraperitoneally.
- När du är säker på inga blödningar eller komplikationer, placera mottagarmössen tillbaka i sina burar och mata en normal diet.
4. Skörd av endometriotiska lesioner
- Avliva mottagarmöss ungefär 21 dagar efter fragmentinjektion efter transplantation.
OBS: Av erfarenhet och från diskussion med samarbetspartners med liknande modeller inträffar den maximala lesionsstorleken och antalet vid cirka 3 veckor efter transplantation; efter 3 veckor börjar skador att gå tillbaka i storlek. Den IACUC-godkända dödshjälpsmetoden används. - Efter dödshjälp och livmoderhalsförskjutning, spraya djurets buk med 70% etanol och tält huden för att skära ytligt med dissekerande sax. Inhys huden och det subkutana utrymmet med sax för att trubbigt öppna buken.
- Innan ytterligare dissekering utförs utförs en fullständig undersökning för bruttoskador, med storlek mätt med kalipipers och dokumenterad om deras anatomiska region (se nedan).
- Utför fullständig samling av tre distinkta anatomiska regioner en block (oavsett om skador kan uppskattas grovt eller inte). Om lesioner ses i andra regioner (t.ex. tarmarna), bör dessa ignoreras och inte samlas in om inte lesionen korsar ett av de tre områdena nedan.
- A = bukvägg/bukhinnan (kan antingen plattas till i en kassett eller rullas upp, så länge som det är förenligt mellan proverna).
- B = bukspottkörtel och mesenteriiskt fett.
- C = parauterin bindväv och fett (vit glittrande vävnad som omger livmodern men inte involverar några andra organ än blåsan; var noga med att inte missta blåsan för en lesion).
- Placera varje dissekerat område i en kassett, lämpligt märkt, och placera det i formalin och process enligt labbprotokoll för histologic sektionering.
- Sektion formalinblock i två diabilder (D1 och D2) per vävnadsområde på två enhetliga djup.
5. Poängsättning av endometriotiska lesioner
- Skanna (vid 40x förstoring) och arkivera bilder.
- Använd digital bildavläsningsprogramvara, definiera det längsta avståndet (X) mellan kanterna på en endometriotisk lesion - oavsett om kanten består av körtlar eller stroma-och markera den. En kontinuerlig lesion definieras av körtlar omgiven av stroma; Linjen färdas inte nödvändigtvis endast genom endometriotisk vävnad (som vid bestämning av effektmått på ett oregelbundet format eller böljande fokus på endometrios) men de två slutpunkterna måste anslutas genom kontinuerlig stroma och/eller körtlar (se figur 4).
- Gör en andra rad (Y) 90 grader över den första raden, med längden på den andra raden bestämd enligt reglerna ovan.
- Om flera icke-sammanhängande skador påträffas, ge var och en sina egna X- och Y-mätningar.
- Beräkna slutresultatet för varje bild som summering av områden (X*Y) för varje lesion.
- Ta det större av poängen från de två bilderna (D1 vs D2) som slutresultat för den regionen (A, B, C).
- Summera poängen från varje region för att ge den slutliga mikroskopiska poängen för det djuret.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För ett första bevis på konceptexperiment injicerades donatorendometrium från RFP möss i wildtype mottagare möss. H&E färgning visade histopatologisk bekräftelse av klassisk arkitektur av endometrios lesion (Figur 3A). Fluorescerande mikroskopi bekräftade att den observerade lesionen i fråga härrörde från givaren (figur 3B).
Det andra experimentet utfördes med hjälp av 10 wildtype C57BL/6J givare och 10 mottagare. Ytterligare 5 mottagare fick skenbehandling (injiceras med PBS och inte endometriefragment) och tilldelade ett slumpmässigt identifieringsnummer. granskare var blinda före obduktion och histopatologisk översyn.
Alla mottagare fick donator endometrievävnad inom 42 h efter PSMG donator behandling. det fanns ingen korrelation mellan denna tidsintervall och slutliga livmoderns vikt eller lesion storlek. Vid tidpunkten för givarupphandling var den genomsnittliga totala livmodervikten 54 ± 9,5 mg. Genomsnittligt fragmentnummer var 22,4 ± 5,2, vilket resulterade i en genomsnittlig fragmentvikt på 2,5 ± 0,5 mg. Endpoint kirurgi inträffade vid antingen dag 20 eller dag 22 för alla mottagare.
Med ett genomsnittligt antal lesioner på 1,5 och genomsnittlig brutto total lesion diameter på 3,7 mm, liknar dessa slutpunkter andra studier som använder musmodeller med en liknande vikt av injicerade endometriefragment (Figur 2)10. Prevalensen av skador för alla möss var 80%. Möss utan skador hade betydligt större endometriefraktion jämfört med möss med lesioner (30, 5 totala fragment jämfört med 20, 3, respektive; genomsnittliga totala fragment för alla möss var 22,4) vilket resulterade i under genomsnittlig fragmentstorlek vid injektionsstället (1, 9 mg vs 2, 6 mg). Som förväntat hade falska kontroller (injiceras med saltlösning och inte endometriefragment) ingen grov eller mikroskopisk sjukdom. I en efterföljande studie med ett utökat antal möss var estrous fasen av mottagarmusen inte associerad med lesion nummer eller mikroskopisk sjukdom poäng.
Brutto lesion nummer verkar vara en dålig surrogat markör för totala lesion börda, eftersom det fanns oenighet mellan makroskopiska och mikroskopisk sjukdom finns i vävnaderna. I 60% (n = 6) av fallen fanns det enighet mellan makroskopisk och mikroskopisk poängsättning (avtal definierat som både visar närvaro eller frånvaro och skillnaden i total storlek var inom 3 mm). I 40 % (n = 4) av fallen det fanns oenighet, med 10% (n = 1) av tiden var makroskopisk sjukdom frånvarande men mikroskopisk sjukdom var närvarande genom histologi, 10% (n = 1) makroskopisk sjukdom sågs trots ingen avsaknad av endometrios på bekräftande histologi (figur 5), och de återstående 20% (n = 2) det fanns enighet i närvaro men inte omfattningen av lesion storlek. Således är makroskopisk undersökning för enbart skador inte tillräcklig för kvantifiering av endometrios sjukdomsbörda.
Bild 1: Översikt över modellen. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2: Undersökta regioner för kvantifiering av lesioner. Medan tarm och andra intraperitoneal platser kan hysa skador, det är mer utmanande att skilja dessa grovt och en uttömmande undersökning av buken skulle vara mer tidsintensiv med minskande avkastning. Därför utförs ett konsekvent, systematiskt tillvägagångssätt för att skörda hela vävnaden (oavsett om bruttosjukdom är närvarande) i de tre vanligaste regionerna av endometriosbildning: bukväggen/bukhinnan (A),bukspottkörteln och mesenterifettet (B) och det parauterina fettet (C). Märkta är representativa bilder av mikroskopiska resultaten av skador från var och en av de tre regionerna. 40x förstoring. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 3: Induktion av endometrios med donatormöss endometrium som uttrycker rött fluorescerande protein. A)H&E-sektionen av lesionen. B)Fluorescerande mikroskopi med DAPI-färgning. 40x förstoring. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 4: Representativa bilder av programvaran som används för att mäta lesionsdimensionerna och kvantifiera lesionsbördan. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 5: Representativa prover av "lesioner" brutto som inte är endometrios genom histopatologisk undersökning. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vår studie visar att endometrios kan induceras tillförlitligt hos möss utan att kräva användning av ovariectomy och/eller överlevnad kirurgi, och att ectopic endometrial skador kan identifieras och kvantifieras med hjälp av en standardiserad undersökning av buken och histologic analys.
Många murin studier av endometrios använder kirurgiskt inducerad endometrios där givaren endometrium sutured på plats till tarmen, bukväggen eller annan intraperitoneal plats12,20. Detta har fördelen att standardisera storleken och platsen för den transplanterade vävnaden. Men förutom extra logistiska utmaningar med överlevnad kirurgi, detta kan införa förvirrande variabler från själva operationen, med tanke på att endometrios är en inflammatorisk sjukdom och att i en klinisk miljö, endometrios utvecklas vanligtvis före något kirurgiskt ingrepp. Intraperitoneal injektion, å andra sidan, mer exakt modellerar den bakåtsträvande menstruationen som tros orsaka majoriteten av endometrios organskador.
Ovariektomi utförs ofta i gnagaremodeller för att minska variationen som införs av eströscykeln; och eftersom endometrios är en hormonberoende sjukdom, administreras suprafysiologiska doser av estradiol i dessa fall. Denna praxis begränsar utan tvekan tillämpligheten av en musmodell till mänsklig sjukdom. Vår studie visar att ovariectomy inte är nödvändigt att tillförlitligt skapa endometrios organskador och att fasen av estrous cykel inte påverkar förmågan att fastställa skador.
En brist på andra intraperitoneal injektion modeller är beroendet av subjektiva åtgärder av lesion storlek eller börda. Även om användning av bromsok eller andra instrument kan ge objektiva åtgärder registreras dessa mätningar vid tidpunkten för lesionsskörden och kan därför inte verifieras senare och kan vara föremål för variabilitet inom observatören. I vår modell kan histologic kvantifiering utföras och verifieras långt efter obduktionen, vilket innebär att de som utför obduktionen inte behöver ha expertis för identifiering av grova skador och är lättare förblindade om den mottagna interventionen. Dessutom, som vårt arbete visar, kan en del av sjukdomen missas när man bara förlitar sig på grov sjukdom. Dessutom kan många misstänkta skador faktiskt vara fysiologiska (t.ex. lymfoid vävnad) eller fibros. Slutligen, att ta standardiserade delar av hela anatomiska regioner i varje mus ytterligare minskar variabiliteten. Detta tillvägagångssätt för att skaffa samma mängd vävnad per mus förhindrar den oundvikliga underskolning som skulle uppstå med små prover och överbedömning av stora prover, särskilt eftersom mikroskopisk sjukdom kan förekomma.
I slutändan tjänar dessa förbättringar till att både standardisera och förenkla tillvägagångssättet, vilket resulterar i en musmodell som kan studera endometrios på ett hög genomströmningsmode. Denna modell är en analysbar metod för att screena för vägar och läkemedelsmål, och vårt labb använder för närvarande denna modell för en läkemedelsvalideringsstudie. Denna modell är särskilt användbar när man försöker fastställa den relativa betydelsen av avvikande genuttryck (eller läkemedelsbehandling) i givaren endometrium kontra mottagaren peritoneal miljö. Det kan också användas med reportermöss (som vi har visat) och immunkomprometterade och knockoutmöss.
Sammanfattningsvis tillhandahåller vi flera viktiga innovationer som ger en murinmodell med hög tillförlitlighet, reproducerbarhet och objektivitet vid studier av endometrios. Vårt tillvägagångssätt främjar fältet genom att inte bara tillhandahålla en enkel, strömlinjeformad process för lesionsinduktion utan också ett standardiserat sätt att mäta och rapportera data.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga intressekonflikter att avslöja.
Acknowledgments
Vi vill tacka medlemmarna i Reizes-laboratoriet för deras kritiska granskning och insikter under utarbetandet av manuskriptet, samt imaging- och histologikärnorna vid Lerner Research Institute för deras hjälp med datainsamling och dataanalys. Detta arbete stöddes genom en intern bidragsfinansiering genom forskningsprogramkommittén vid Cleveland Clinic och genom ett externt bidrag genom Society for Reproductive Investigation och Bayer. Forskning i Reizes Laboratory finansieras också genom VeloSano Bike to Cure, Center of Research Excellence i gynekologisk cancer, och genom Laura J. Fogarty Endowed Chair for Uterine Cancer Research. Cleveland Clinic äger upphovsrättstillståndet för figur 1 och figur 2.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Supplies for injecting PMSG into donor mouse | |||
| 1 mL Tuberculin syringe with 27G needle | Fisher Scientific | 14-826-87 | |
| Pregnant mare serum gonadotropin | Sigma-Aldrich | 9002-70-4 | |
| Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing | |||
| 6” serrated forceps, curved tip | Electron Microscopy Sciences | 72993-6C | |
| 70% ethanol solution | Pharmco | 33000HPLCCS4L | 70% solution dilute ethyl acetate 200 proof |
| Analytical balance | Mettler Toledo | ME54TE | |
| Carbon dioxide | TriGas Supplier | ||
| Dissecting tray | Fisher Scientific | S14000 | |
| No. 10 disposable scalpel | Fisher Scientific | NC9999403 | |
| Scissors, curved | Electron Microscopy Sciences | 72941 | |
| Scissors, straight | Electron Microscopy Sciences | 72940 | |
| Stereo microscope | Leica Microsystems | Leica SE 4 | For tissue dissection |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | Institutional core facility supplies | ||
| Surgical instrument sterilization tray | Electron Microscopy Sciences | 66112-02 | |
| Tissue culture dishes | Fisher Scientific | 08-772E | |
| Weighing dishes | Fisher Scientific | 02-202-103 | |
| Supplies for injecting into recipient mouse | |||
| 1 cc syringe | BD Biosciences | 301025 | |
| 18 G needle | Fisher Scientific | 148265d | |
| 200 uL pipette tip | Fisher Scientific | 02-707-422 | |
| Double distilled water | Institutional core facility supplies | ||
| Latex bulb | Fisher Scientific | 03-448-21 | |
| Micro cover glass slip | VWR | 48366-067 | |
| Microscope slide | Fisher Scientific | 12-544-7 | |
| Standard light microscope | Leica Microsystems | DM IL | For evaluating vaginal cytology smears |
| Supplies for harvesting tissue from recipient mouse | |||
| 10% Buffered formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Biopsy foam pads | Fisher Scientific | 22-038-222 | |
| Precision Digital Calipers | Electron Microscopy Sciences | 62065-40 | |
| Processing/embedding cassettes | Fisher Scientific | 22-272416 |
References
- Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A.
- Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).
- Giudice, L. C.
- D'Hooghe, T. M., Debrock, S. Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons. Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).
- Ahn, S. H., et al. Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis. BioMed Research International. 2015, (2015).
- Falcone, T., Flyckt, R.
- Vercellini, P., et al. Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients. Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).
- Bulun, S. E., et al.
- Brueggmann, D., et al. Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis. Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).
- Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis. Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).
- Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., Gómez, R. Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).
- Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).
- Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model. Human Reproduction. 33 (7), Oxford, England. 1228-1236 (2018).
- Nair, H. B., et al. An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons. Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).
- Laganà, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road. Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).
- Bellofiore, N., et al. First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus). Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).
- Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).
- Bilotas, M. A., et al. Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model. PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).
- Peterse, D., et al. Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis. Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).
- Richards, E. G., et al. KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis. Reproductive Sciences. 224 (8), Thousand Oaks, Calif. 1129-1138 (2017).
- Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure. Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).
- Greaves, E., et al. A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium. The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).
- Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model. PloS One. 9 (6), 100336 (2014).
