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Bioengineering

क्लीनरूम वातावरण और सेलुलर थेरेपी के लिए माइक्रोबियल नियंत्रण और निगरानी रणनीतियाँ

Published: March 17, 2023 doi: 10.3791/65209
Automatic Translation
1, 1, 1
1Sterility Testing Service, Department of Laboratory Medicine, Clinical Center, National Institutes of Health

Summary

प्रोटोकॉल एक क्लीनरूम वातावरण में माइक्रोबियल बायोबर्डन को कम करने के लिए सर्वोत्तम प्रथाओं को सारांशित करता है और इसमें पर्यावरण निगरानी, प्रक्रिया निगरानी और उत्पाद बाँझपन परीक्षण जैसी रणनीतियां शामिल हैं। यह विनिर्माण और परीक्षण सुविधाओं के लिए प्रासंगिक है जो वर्तमान अच्छे ऊतक अभ्यास मानकों और वर्तमान अच्छे विनिर्माण अभ्यास मानकों को पूरा करने के लिए आवश्यक हैं।

Abstract

एक अच्छी तरह से मान्य और समग्र कार्यक्रम जिसमें मजबूत गाउनिंग, सफाई, पर्यावरण निगरानी और कर्मियों की निगरानी के उपाय शामिल हैं, सेलुलर थेरेपी विनिर्माण सुइट्स और संबंधित परीक्षण प्रयोगशालाओं में माइक्रोबियल बायोबर्डन को कम करने के लिए महत्वपूर्ण है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि सुविधाएं नियंत्रण की स्थिति में काम कर रही हैं। गुणवत्ता नियंत्रण उपायों के माध्यम से उत्पाद सुरक्षा सुनिश्चित करना, जैसे कि बाँझपन परीक्षण, न्यूनतम हेरफेर (धारा 361) और न्यूनतम हेरफेर (धारा 351) मानव कोशिकाओं, ऊतकों और सेलुलर और ऊतक-आधारित उत्पादों (एचसीटी / पीएस) दोनों के लिए एक नियामक आवश्यकता है। इस वीडियो में, हम संयुक्त राज्य अमेरिका फार्माकोपिया (यूएसपी<71>) और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (एनआईएच) वैकल्पिक बाँझपन परीक्षण विधि द्वारा प्रदान किए गए प्रत्यक्ष टीकाकरण का उपयोग करके स्वच्छरूम वातावरण में संचालन के लिए सर्वोत्तम सड़न रोकनेवाला प्रथाओं को विकसित करने और शामिल करने के तरीके के लिए एक चरणबद्ध मार्गदर्शिका प्रदान करते हैं। यह प्रोटोकॉल वर्तमान अच्छे ऊतक प्रथाओं (सीजीटीपी) और वर्तमान अच्छे विनिर्माण प्रथाओं (सीजीएमपी) को पूरा करने की उम्मीद करने वाले प्रतिष्ठानों के लिए एक संदर्भ मार्गदर्शिका के रूप में है।

Introduction

पर्यावरण निगरानी (ईएम), प्रक्रिया निगरानी और उत्पाद बाँझपन परीक्षण के माध्यम से एक मजबूत माइक्रोबियल निगरानी कार्यक्रम को लागू करना सेलुलरथेरेपी प्रयोगशालाओं में वर्तमान अच्छे ऊतक प्रथाओं (सीजीटीपी) और वर्तमान अच्छे विनिर्माण प्रथाओं (सीजीएमपी) के लिए एक नियामक आवश्यकता है। इसके अतिरिक्त, संयुक्त राज्य खाद्य और औषधि प्रशासन (एफडीए) उम्मीद करता है कि उत्पाद के गुणवत्ता नियंत्रण (क्यूसी) परीक्षण करने वाली प्रयोगशाला को सड़न रोकनेवाला भरनेके संचालन के लिए उपयोग की जाने वाली सुविधाओं और नियंत्रणों को भी नियोजित करना चाहिए।

इस प्रोटोकॉल में चार मुख्य खंड हैं: 1) सड़न रोकनेवाला अभ्यास, जिसमें कर्मियों की गाउनिंग, सफाई और सामग्री का मंचन शामिल है; 2) ईएम, व्यवहार्य वायु और सतह संस्कृतियों और गैर-व्यवहार्य कण वायु निगरानी सहित; 3) प्रक्रिया की निगरानी, जिसमें प्लेटों को व्यवस्थित करना और उंगलियों के नमूने शामिल हैं; और 4) संयुक्त राज्य अमेरिका फार्माकोपिया (यूएसपी) <71> विधि3 या एनआईएच वैकल्पिक बाँझपन परीक्षण विधि4 के माध्यम से उत्पाद बाँझपन परीक्षण। जब एक साथ उपयोग किया जाता है, तो ये उपाय यह सुनिश्चित करने के लिए एक प्रभावी तरीका हो सकते हैं कि एक सुविधा नियंत्रण की स्थिति में रहती है।

यहां वर्णित तकनीकें नई नहीं हैं; हालांकि, नियामकों और पेशेवर संगठनों के वर्तमान मानकों में विस्तार की कमी है, जिसके कारण माइक्रोबियल निगरानी या गैर-मानकीकृत प्रथाओं के कार्यान्वयन की अनुपस्थिति हुई है, विशेष रूप से अकादमिक केंद्रों में जहां ऑन-साइट विनिर्माण और उत्पाद बाँझपन परीक्षण तेजी से 1,5,6 की दर से उभर रहे हैं . इस प्रोटोकॉल का उपयोग एक माइक्रोबियल निगरानी और नियंत्रण कार्यक्रम बनाने के लिए एक गाइड के रूप में किया जा सकता है जो अंत-उपयोगकर्ता सत्यापन और जोखिम आकलन के साथ संयोजन में उपयोग किए जाने पर नियामक आवश्यकताओं को पूरा करता है।

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Protocol

1. सड़न रोकनेवाला प्रथाएं

  1. क्लीनरूम स्पेस के लिए तैयारी कर रहे हैं कार्मिक
    नोट: यह प्रक्रिया एक अवर्गीकृत स्थान में प्रारंभिक गाउनिंग पर आधारित है, इसके बाद मानकीकरण के लिए अंतर्राष्ट्रीय संगठन (आईएसओ) 8 क्षेत्र और फिर एक आईएसओ 7 क्षेत्र में प्रवेश होता है। यह प्रक्रिया मौजूदा स्थान को क्लीनरूम फ़ंक्शन में बदलने का प्रयास करने वाली प्रयोगशालाओं के लिए प्रासंगिक है। आदर्श रूप से, सभी प्रारंभिक गाउनिंग आईएसओ 8 वर्गीकृत स्थान (अवर्गीकृत स्थान में नहीं) में होगी।
    1. ढीले बालों को सुरक्षित रखें। हाथों को धोएं, और स्क्रब में बदलें (लंबी आस्तीन के स्क्रब टॉप और पूर्ण लंबाई वाले स्क्रब पैंट बेहतर हैं)। जूते के कवर के साथ क्लीनरूम जूते इकट्ठा करें और बदलें।
    2. अल्कोहल-आधारित हैंड सैनिटाइज़र का उपयोग करके हाथों को शुरू में और फिर निम्नलिखित चरणों में से प्रत्येक के बीच साफ करें: गैर-बाँझ दस्ताने पहनना और फिर एक दाढ़ी कवर (चेहरे के बालों की किसी भी मात्रा के लिए), यदि लागू हो। एक गैर-बाँझ बाउफ़ेंट पहनें, और यदि लंबी आस्तीन के स्क्रब टॉप का उपयोग नहीं किया गया है, तो अग्रभाग को गैर-बाँझ आस्तीन के साथ कवर करें।
    3. जूते के कवर को हटा दें, जूते के कवर को हटाने के बाद प्रत्येक पैर के साथ आईएसओ 8 एंटीरूम दरवाजे के सामने टैकी मैट पर कदम रखें। सुनिश्चित करें कि प्रवेश से पहले पूरा पैर टैकी मैट के साथ संपर्क करता है। जूते के कवर को छोड़ दें, और दस्ताने और दरवाजे के हैंडल को 70% बाँझ आइसोप्रोपिल अल्कोहल (एसआईपीए) के साथ परिचालित करें। ISO8 एंटेरूम में प्रवेश करें।
    4. एक बाँझ हुड, बाँझ फेस मास्क, बाँझ कवरऑल, बाँझ बूट कवर और सुरक्षा चश्मे इकट्ठा करें। दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ परिचालित करें। सुरक्षा चश्मा पहनें, और चरण 1.5 के अनुसार सामग्री को एक साफ सतह पर मंचित करें।
    5. समर्पित क्लीनरूम जूते के ऊपर गैर-बाँझ जूते कवर की एक नई जोड़ी रखें, और द्वितीयक एंटीरूम के सामने टैकी मैट पर कदम रखें। सुनिश्चित करें कि प्रत्येक पैर की संपूर्णता टैकी मैट के साथ संपर्क करती है। दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ परिचालित करें। मंचित गाउनिंग आपूर्ति इकट्ठा करें, और सीमांकन रेखा के गंदे पक्ष पर शेष रहते हुए द्वितीयक आईएसओ 7 एंटीरूम में प्रवेश करें।
    6. बाँझ हुड और बाँझ आवरण को पहनें, गाउनिंग सामग्री के केवल अंदर को स्पर्श करें और यह सुनिश्चित करें कि हुड की गर्दन एक पूर्ण सील बनाने के लिए कवरऑल के अंदर छिपी हुई है। द्वितीयक बाँझ बूट कवर करें। प्रत्येक पहनने के चरण के बीच में दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ परिचालित करें।
    7. सत्यापित करें कि गाउनिंग को उचित रूप से पहना गया है, दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ परिचालित करें, और आईएसओ 7 स्थान में प्रवेश करें।
      नोट: अखंडता के लिए समय-समय पर गाउनिंग सामग्री का निरीक्षण करें। यदि समझौता किया जाता है, तो तुरंत क्लीनरूम से बाहर निकलें और फिर से गाउन करें।
  2. जैविक सुरक्षा कैबिनेट (बीएससी) के लिए तैयार
    1. इन अतिरिक्त प्रथाओं के साथ ऊपर चरण 1.1 के अनुसार गाउन।
    2. बाँझ दस्ताने और बाँझ आस्तीन इकट्ठा करें। चरण 1.4 के अनुसार बीएससी को साफ करें, और चरण 1.5 के अनुसार सामग्री को चरणबद्ध करें। दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ परिचालित करें।
    3. यदि मौजूद हो तो अंगूठे के लूप का उपयोग करके, कवरऑल पर बाँझ आस्तीन को सड़नहीं करता है। मौजूदा दस्ताने पर बाँझ दस्ताने पहनें, यह सुनिश्चित करते हुए कि दस्ताने का कफ बाँझ आस्तीन पर फैला हुआ है। प्रत्येक चरण के बीच 70% एसआईपीए के साथ दस्ताने को हटा दें। बीएससी दर्ज करें।
      नोट: अखंडता के लिए समय-समय पर गाउनिंग सामग्री का निरीक्षण करें। यदि समझौता किया जाता है, तो तुरंत क्लीनरूम से बाहर निकलें और फिर से गाउन करें।
  3. गाउनिंग सामग्री की सजावट
    1. बीएससी से बाहर निकलें, और दस्ताने और बाँझ आस्तीन की शीर्ष जोड़ी को सावधानीपूर्वक हटा दें। आंतरिक दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ परिचालित करें।
    2. द्वितीयक और फिर प्राथमिक एंटीरूम में प्रवेश करें, प्रत्येक चरण के बीच दरवाजे के पूरी तरह से बंद होने की प्रतीक्षा करें। सामग्री को निम्नलिखित क्रम में हटा दें: बाहरी बाँझ बूट कवर, कवरऑल, हुड और फेस मास्क।
    3. प्राथमिक एंटीरूम से बाहर निकलें, और गैर-बाँझ गाउनिंग को हटा दें।
      नोट: अवर्गीकृत स्थान में हटाने का क्रम महत्वपूर्ण नहीं है; हालांकि, आंतरिक गैर-बाँझ जूते कवर गैर-वर्गीकृत स्थानों में भंडारण के लिए क्लीनरूम जूते पर रहना चाहिए।
    4. अल्कोहल-आधारित हैंड सैनिटाइज़र का उपयोग करके हाथों को साफ करें, और सड़क के कपड़ों पर लौटें।
  4. क्लीनरूम सतहों और बीएससी की सफाई
    1. एक हैंडहेल्ड क्लीनिंग मोप इकट्ठा करें, या एक साफ लो-लिंट पोंछा प्राप्त करें। यदि कम-लिंट वाइप का उपयोग कर रहे हैं, तो वाइप को क्वार्टर में मोड़ें, और प्रत्येक सतह के बीच घुमाएं। एक अनुमोदित कीटाणुनाशक के साथ मोप हेड या लो-लिंट वाइप को संतृप्त करें।
    2. पीछे से सामने (या ऊपर से नीचे) काम करते हुए, निम्नलिखित क्रम में अतिव्यापी वाइप्स का उपयोग करके बीएससी को साफ करें: एचईपीए डिफ्यूज़र ग्रिल (बीएससी का शीर्ष), बीएससी की पीछे की दीवार, बीएससी की दोनों तरफ की दीवारें, सैश और काम की सतह। अंत में, किसी भी अवशिष्ट कीटाणुनाशक को हटाने के लिए 70% एसआईपीए का उपयोग करके बीएससी के सैश को पोंछ दें। एक विशिष्ट बीएससी सफाई पैटर्न के लिए चित्रा 1 देखें।
  5. वर्गीकृत वातावरण में स्टेजिंग सामग्री और उपकरण
    1. रोगाणुओं के हस्तांतरण को कम करने के लिए गैर-वर्गीकृत या निम्न-वर्गीकृत क्षेत्र से उच्च-वर्गीकृत क्षेत्र (जैसे, आईएसओ 8 से आईएसओ 7 अंतरिक्ष तक) में स्थानांतरण की आवश्यकता वाली सभी सामग्रियों को डीकॉन्टामिनेट (यानी, चरण) करें। एक ही आईएसओ वर्गीकरण स्तर के क्षेत्रों के बीच सामग्री के हस्तांतरण के लिए मंचन की आवश्यकता नहीं होती है।
      नोट: यदि सामग्री को टर्मिनल रूप से निष्फल किया गया है और कई बैग में हैं, तो बाहरी बैग / थैली को हटा दें, और सामग्री को वर्गीकृत स्थान में ले जाएं; आंतरिक बैग /थैली को पोंछने की आवश्यकता नहीं है।
    2. एक लो-लिंट वाइप प्राप्त करें, और पोंछे को साफ साइड में घुमाने के लिए क्वार्टर में मोड़ें क्योंकि पोंछा गंदा हो जाता है। पोंछे को 70% एसआईपीए या एक अनुमोदित कीटाणुनाशक के साथ संतृप्त करें।
    3. अतिव्यापी वाइप्स का उपयोग करके सामग्री / उपकरण के बाहरी हिस्से को पोंछें। सुनिश्चित करें कि आइटम के सभी क्षेत्रों को मिटा दिया गया है, जिसमें उपकरण और अन्य अनियमित आकार की आपूर्ति पर पुल-अलग पैकेज सील और नुक्कड़ / इंडेंट के अंदरूनी हिस्से शामिल हैं। पहियों पर उपकरणों के लिए, सुनिश्चित करें कि स्टेजिंग प्रक्रिया के दौरान पूरे पहिया को मिटा दिया गया है (पहियों को घुमाने की अनुमति देने के लिए उपकरण को धीरे से डुबोने की आवश्यकता हो सकती है)।

Figure 1
चित्रा 1: बीएससी सफाई पैटर्न का उदाहरण। पीछे से सामने (या ऊपर से नीचे) काम करते हुए, निम्नलिखित क्रम में अतिव्यापी वाइप्स का उपयोग करके बीएससी को साफ करें: एचईपीए डिफ्यूज़र ग्रिल (बीएससी का शीर्ष), बीएससी की पीछे की दीवार, बीएससी की दोनों तरफ की दीवारें, सैश और काम की सतह। अंत में, किसी भी अवशिष्ट कीटाणुनाशक को हटाने के लिए 70% एसआईपीए का उपयोग करके बीएससी के सैश को पोंछ दें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

2. पर्यावरण निगरानी (ईएम)

  1. व्यवहार्य सतह नमूनाकरण
    1. चरण 1.5 के अनुसार नमूना सत्र के लिए आवश्यक सामग्री को स्टेज करें, और अनुभाग 1 के अनुसार वर्गीकृत स्थान में गाउन करें।
      नोट: सतह नमूना किसी भी निर्दिष्ट स्थान पर हवा के नमूने से पहले किया जाना चाहिए। यदि किसी क्षेत्र को सतह-नमूना करने के लिए कई प्लेटों का उपयोग कर रहे हैं, तो एक ही स्थान का नमूना न लें। केवल पूर्ण संपर्क सुनिश्चित करने और आगर को संभावित नुकसान से बचने के लिए सपाट सतहों का नमूना लेने के लिए संपर्क प्लेटों का उपयोग करें।
    2. प्रत्येक नमूना साइट के लिए लेसिथिनेज और ट्वीन (टीएसएएलटी) प्लेट के साथ एक ट्रिपेटिक सोया एगर और लेसिथिनेज और ट्वीन (एसएबीएलटी) प्लेट के साथ एक सबौरॉड डेक्सट्रोज एगर एकत्र करें और लेबल करें। एक हाथ से प्लेट के निचले हिस्से को पकड़ते हुए, ढक्कन को हटा दें, सावधान रहें कि उठाए गए आगर की सतह को न छुएं।
    3. नमूना ली जा रही सतह पर उठाए गए एगर को स्पर्श करें, यह सुनिश्चित करें कि पूरी सतह संपर्क में है, और प्लेट पर दृढ़ दबाव लागू करें। प्लेट को कम से कम 5 सेकंड के लिए सतह के संपर्क में छोड़ दें।
    4. महत्वपूर्ण: नमूना ली जा रही सतह पर प्लेट को पार्श्व रूप से स्थानांतरित न करें, क्योंकि यह सतह क्षेत्र पर संभावित विकास फैला सकता है, जिससे व्यक्तिगत कॉलोनियों का समाधान मुश्किल हो जाता है। नमूना करण के दौरान संपर्क प्लेट पर अत्यधिक बल न डालें, क्योंकि आगर की सतह में दरार आ सकती है।
    5. कवर को सड़न से बदलें, उठाए गए आगर की सतह को न छूने के लिए सावधान रहें। यदि संपर्क प्लेट में लॉकिंग सिस्टम है तो कवर को लॉक करें। सतह से किसी भी अवशिष्ट माध्यम को हटाने के लिए 70% एसआईपीए के साथ नमूना क्षेत्र को साफ करें। शिथिल रूप से प्लेटों को बैग करें, और तालिका 1 में वर्णित संस्कृतियों को इनक्यूबेट करें। टीएसएएलटी सतह नमूना प्लेट पर दो अलग-अलग कॉलोनी आकृति विज्ञान के साथ तीन कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की वृद्धि को दिखाने वाली एक प्रतिनिधि छवि चित्र 2 में चित्रित की गई है। चित्र 3 नमूना संग्रह के दौरान खराब सड़न रोकनेवाला तकनीक के कारण प्लेट के किनारे पर वृद्धि के साथ टीएसएएलटी प्लेट के संदूषण को दर्शाता है।
  2. व्यवहार्य वायु नमूनाकरण
    1. चरण 1.5 के अनुसार नमूना सत्र के लिए आवश्यक सामग्री को स्टेज करें, और अनुभाग 1 के अनुसार वर्गीकृत स्थान में गाउन करें।
    2. प्रत्येक नमूना साइट के लिए एक ट्राइप्टिक सोया आगर (टीएसए) प्लेट और एक सबौरॉड डेक्सट्रोज एगर (एसएबी) प्लेट एकत्र करें और लेबल करें। सिर को दूषित करने से बचने के लिए केवल बाहरी किनारे को पकड़कर नमूना सिर को हटाकर एयर सैंपलर तैयार करें।
    3. नमूना सिर को एक हाथ में पकड़ते हुए, माध्यम को नमूनाकर्ता पर प्लेट धारक में रखें। यदि कोई प्रोंग है जो दूसरों की तुलना में लंबा है, तो पहले लंबे प्रोंग के खिलाफ माध्यम डालें, और फिर प्लेट को सुरक्षित करने के लिए प्लेट को शेष प्रोंग में नीचे धकेलें।
    4. प्लेट ढक्कन को हटा दें, और नमूना पूरा होने तक इसे साफ सतह पर रखें। सड़न रोकने वाले सिर को प्रतिस्थापित करें और सुरक्षित करें, सिर को दूषित करने से बचने के लिए केवल बाहरी किनारे को पकड़ें। बहु-प्रमुख एयर सैंपलर का उपयोग करते समय शेष माध्यम के लिए चरण 2.2.2-2.2.4 दोहराएं।
    5. एयर सैंपलर को नमूना स्थान में एयरफ्लो आंदोलन की प्रमुख दिशा में नमूना सिर के साथ रखें। सुनिश्चित करें कि गैर-व्यवहार्य एयर सैंपलर से निकास (यदि एक साथ नमूना लिया जाता है) व्यवहार्य नमूने के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है। सुनिश्चित करें कि एयर सैंपलर मान्य सेटिंग्स पर सेट है, और नमूना चक्र शुरू करें।
    6. जब नमूना चक्र पूरा हो जाता है, तो सिर को दूषित करने से बचने के लिए केवल बाहरी किनारे को पकड़कर नमूना लेने वाले से नमूना सिर को हटा दें। एक हाथ में नमूना सिर पकड़ें, और एगर प्लेट के ढक्कन को सड़न से बदलें। प्लेट धारक से प्लेट निकालें। शिथिल रूप से प्लेटों को बैग करें, और तालिका 1 में वर्णित संस्कृतियों को इनक्यूबेट करें।
    7. नमूना सिर और प्लेट धारक के आसपास के क्षेत्र को 70% एसआईपीए के साथ कीटाणुरहित करें। नमूना सिर को सुरक्षित रूप से सुरक्षित करें, केवल बाहरी किनारे को पकड़ें। बहु-प्रमुख एयर सैंपलर का उपयोग करते समय शेष माध्यम के लिए चरण 2.2.6 और चरण 2.2.7 दोहराएं।
      नोट: चित्रा 4 एक दूषित नमूना सिर के कारण विकास के साथ एक टीएसए सक्रिय वायु नमूना संस्कृति दिखाता है। इसके विपरीत, चित्रा 5 एक टीएसए सक्रिय वायु नमूना संस्कृति का प्रतिनिधित्व करता है जिसमें कोई वृद्धि नहीं होती है। नमूना सिर से वायु प्रभाव इंडेंट छवि पर देखा जा सकता है।
  3. गैर-व्यवहार्य नमूनाकरण
    1. उपयोग के प्रत्येक दिन के लिए नमूना गतिविधियों से पहले लेजर कण काउंटर पर एक शून्य जांच करें। आइसोकाइनेटिक सिर को कण काउंटर के नमूना पोर्ट से सीधे या नमूना स्थान के लिए आवश्यक ट्यूबिंग की लंबाई से चिपकाए गए संलग्न करें।
    2. यदि ट्यूबिंग लागू की जाती है, तो कम लंबाई का उपयोग करें, क्योंकि >1 मीटर लंबी टयूबिंग ≥1 μm के कणों की गणना के साथ समस्याएं पैदा कर सकती है और ट्यूब में अनावश्यक मोड़ भी पैदा कर सकती है। सुनिश्चित करें कि कण काउंटर मान्य सेटिंग्स पर सेट है। नमूनाकरण के दौरान वायु प्रवाह व्यवधान से बचने के लिए नमूना क्षेत्र से बाहर निकलने की अनुमति देने के लिए लगभग 30 सेकंड की देरी निर्धारित करने की सिफारिश की जाती है।
    3. लेजर कण काउंटर के आइसोकाइनेटिक सिर को नमूना स्थान में आइसोकाइनेटिक सिर के साथ एयरफ्लो आंदोलन की प्रमुख दिशा में रखें। सुनिश्चित करें कि व्यवहार्य वायु नमूने से निकास (यदि एक साथ नमूना लिया जाता है) गैर-व्यवहार्य नमूने के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है। उन क्षेत्रों के लिए जहां एयरफ्लो यूनिडायरेक्शनल नहीं है या एयरफ्लो पैटर्न अज्ञात है, सुनिश्चित करें कि आइसोकाइनेटिक सिर लंबवत ऊपर की ओर है।
      नोट: यदि रोटेशनल कीटाणुनाशक या 70% एसआईपीए को एयर सैंपलर के पास एरोसोलाइज्ड किया गया है, तो नमूना चक्र शुरू करने से पहले कम से कम 5 मिनट प्रतीक्षा करें।
    4. नमूना चक्र शुरू करें, और धीरे-धीरे वायु प्रवाह को बाधित करने से बचने के लिए नमूना क्षेत्र से बाहर निकलें।
      महत्वपूर्ण: नमूना चक्र के दौरान एयर सैंपलर के पास तरल पदार्थ को एरोसोलाइज न करें, क्योंकि इससे उच्च गैर-व्यवहार्य गणना होगी।
    5. जब नमूना पूरा हो जाता है, तो लेजर कण काउंटर को पुनः प्राप्त करें। औसत कण गणना को 0.5 μm के लिए रिकॉर्ड करें। कुछ सुविधाएं 5.0 μm को ट्रैक और ट्रेंड भी कर सकती हैं।
    6. अगले नमूना स्थान के लिए चरण 2.3.3-2.3.6 दोहराएँ। यदि कमरे या बीएससी के बीच चल रहे हैं, तो गैर-व्यवहार्य कण नमूने के बाहर को 70% एसआईपीए या अनुमोदित कीटाणुनाशक के साथ पोंछ दें। आइसोकाइनेटिक सिर के अंदर कीटाणुनाशक प्राप्त करने से बचें, क्योंकि इससे गलत कण गणना हो सकती है।
वर्ग मीडिया संस्कृति की स्थिति संस्कृति अवलोकन परिणाम
पर्यावरण की निगरानी टीएसए (व्यवहार्य हवा) 30 °C-35 °C, हवा, कम से कम 3 दिनों के लिए इनक्यूबेशन का अंत प्रत्येक सुविधा के क्यूए समूह को प्रत्येक नमूना प्रकार और स्थान के लिए चेतावनी और कार्रवाई सीमा स्थापित करनी चाहिए। आईएसओ वर्गीकरण के आधार पर व्यवहार्य नमूनों के लिए कार्रवाई सीमा को पीआईसी / एस 009-16 (अनुलग्नक) 18 और आईएसओ -14644-1 7 का उपयोग करके निर्देशित किया जा सकता है। गैर-व्यवहार्य वायु नमूनों के लिए कार्रवाई सीमाएं आमतौर पर आईएसओ सीमा (जैसे, 99%) के प्रतिशत पर सेट की जाती हैं। व्यवहार्य नमूनों के लिए चेतावनी सीमाएं आमतौर पर कार्रवाई सीमा या आईएसओ सीमा (जैसे, 95%) के प्रतिशत पर सेट की जाती हैं। अलर्ट और एक्शन स्तरों की स्थापना और चयनित संस्कृति स्थितियों को मान्य करने के बारे में अधिक जानकारी के लिए पीडीए टीआर -13 और यूएसपी<1116> देखें।
एसएबी (व्यवहार्य हवा) 20 °C-25 °C, हवा, कम से कम 7 दिनों के लिए
टीएसएएलटी (व्यवहार्य सतह) 30 °C-35 °C, हवा, कम से कम 3 दिनों के लिए ईएम प्लेटों की प्रतिनिधि छवियां चित्रा 2, चित्रा 3, चित्रा 4 और चित्रा 5 में दिखाई गई हैं।
एसएबीएलटी (व्यवहार्य सतह) 20 °C-25 °C, हवा, कम से कम 7 दिनों के लिए
प्रक्रिया की निगरानी टीएसए (निपटान प्लेट) 30 °C-35 °C, हवा, कम से कम 3 दिनों के लिए केवल जानकारी के लिए। एक असफल उत्पाद बाँझपन परीक्षण के जवाब में एक ओओएस जांच की स्थिति में उपयोगी जानकारी प्रदान करता है।
सब (सेटलिंग प्लेट) 20 °C-25 °C, हवा, कम से कम 7 दिनों के लिए एक सकारात्मक निपटान प्लेट के उदाहरण के लिए चित्रा 6 देखें।
उंगलियों के नमूने TSALT 30 डिग्री सेल्सियस -35 डिग्री सेल्सियस, हवा, कम से कम 48 घंटे के लिए, इसके बाद कम से कम 5 दिनों के लिए 20 डिग्री सेल्सियस -25 डिग्री सेल्सियस। पीआईसी/एस 009-16 (अनुलग्नक) 18 के अनुसार जीएफएस के लिए स्वीकार्यता मानदंड <1 सीएफयू/प्लेट (अर्थात कोई वृद्धि नहीं) है। स्वीकार्यता मानदंड सुविधा क्यूए के विवेक पर संशोधित किया जा सकता है।
उत्पाद बाँझपन परीक्षण टीएसबी (यूएसपी<71>) 20 °C-25 °C, हवा, कम से कम 14 दिनों के लिए इनक्यूबेशन अवधि के दौरान समय-समय पर (दिन 3, 5, 7, और 14) कोई वृद्धि नहीं।
FTM (USP<71>) 30 °C-35 °C, हवा, कम से कम 14 दिनों के लिए
iFA+ (एनआईएच विधि) 30 °C-35 °C, हवा, कम से कम 14 दिनों के लिए BACT/ ALERT Dual-T उपकरण द्वारा स्वचालित रूप से निगरानी। मोल्ड गेंदों के लिए इनक्यूबेशन के अंत में प्रत्येक बोतल की दृश्य जांच की जोरदार सिफारिश की जाती है। दृश्यमान मोल्ड गेंदों के उदाहरण के लिए चित्र 8 देखें जो BacT/ALERT द्वारा स्वचालित रूप से पता लगाने में विफल रहे।
iFN+ (एनआईएच विधि)
SAB (NIH विधि) कम से कम 14 दिनों के लिए 20 डिग्री सेल्सियस -25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेशन अवधि के दौरान समय-समय पर (दिन 3, 5, 7, और 14)

तालिका 1: अनुशंसित संस्कृति स्थितियों और अपेक्षित परिणामों का सारांश। यहां वर्णित संस्कृति की स्थिति एनआईएच में उपयोग किए जाने वाले एक मान्य कार्यक्रम के आधार पर सिफारिशें हैं। प्रत्येक अंतिम उपयोगकर्ता को अपने स्वयं के माइक्रोबायोलॉजी परीक्षण कार्यक्रम को मान्य करने की आवश्यकता होती है। माइक्रोबियल नियंत्रण और परीक्षण रणनीतियां सुविधा डिजाइन, सुविधा वनस्पतियों और उत्पाद जोखिम वर्गीकरण सहित चर के आधार पर संस्थानों के बीच भिन्न हो सकती हैं।

Figure 3
चित्रा 2: टीएसएएलटी प्लेट पर विकास। टीएसएएलटी सतह नमूना प्लेट दो अलग-अलग कॉलोनी आकृति विज्ञान के तीन सीएफयू दिखाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 3: संग्रह के दौरान टीएसएएलटी प्लेट का संदूषण। टीएसएएलटी सतह संस्कृति प्लेट के किनारे पर एक एकल कॉलोनी दिखाती है, जो नमूना प्रक्रिया के दौरान खराब सड़न रोकनेवाला हैंडलिंग का संकेत देती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 4: दूषित वायु नमूना सिर का उपयोग करके प्राप्त संस्कृति। टीएसए सक्रिय वायु नमूना संस्कृति का उदाहरण मिश्रित आकृति विज्ञान की >100 कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) को दर्शाता है। वृद्धि का पैटर्न नमूना सिर के संदूषण को इंगित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्रा 5: टीएसए सक्रिय व्यवहार्य एयर प्लेट पर कोई वृद्धि नहीं। टीएसए सक्रिय व्यवहार्य एयर प्लेट इनक्यूबेशन के बाद कोई वृद्धि नहीं दर्शाता है। छवि में सक्रिय एयर सैंपलर हेड से इंडेंट देखे जा सकते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

3. प्रक्रिया निगरानी

  1. निपटान प्लेटें (निष्क्रिय वायु निगरानी)
    1. कार्य क्षेत्र के पास टीएसए और एसएबी प्लेटों को लेबल करें लेकिन एक ऐसे क्षेत्र में जो परीक्षण में हस्तक्षेप नहीं करेगा। नमूना शुरू होने के समय का दस्तावेजीकरण करें, और दोनों प्लेटों को अस्थायी रूप से खोलें, कार्य क्षेत्र से दूर बीएससी में एक साफ सतह पर ढक्कन रखें।
    2. एगर को सूखने से रोकने के लिए निपटान प्लेटों को अधिकतम 4 घंटे की अवधि के लिए खोला जा सकता है। प्रसंस्करण के अंत में प्लेटों के ढक्कन बंद करें। शिथिल रूप से प्लेटों को बैग करें, और तालिका 1 में वर्णित संस्कृतियों को इनक्यूबेट करें। चित्र 6 टीएसए एयर सेटलिंग प्लेट पर एक एकल कॉलोनी संदूषक को दर्शाता है।
  2. ग्लोव्ड फिंगरटिप सैंपलिंग (जीएफएस)
    1. दो लेबल TSALT प्लेटें प्राप्त करें। एक प्लेट के ढक्कन को हटा दें, और इसे नमूना क्षेत्र से दूर एक साफ कार्य सतह पर रखें।
    2. प्लेट की सतह पर प्रत्येक उंगली और एक हाथ के अंगूठे के पैड को धीरे से रोल करें (चित्रा 7)। टिप के बजाय प्रत्येक उंगली / अंगूठे के सबसे बड़े सतह क्षेत्र का नमूना लें। आगर की सतह को क्रैक किए बिना आगर पर मामूली अवसाद बनाने के लिए पर्याप्त बल का उपयोग करें।
    3. अस्पष्ट रूप से ढक्कन को प्लेट पर वापस रखें, और दूसरे हाथ के लिए चरण 3.2.2 दोहराएं। सैंपलिंग के पूरा होने पर 70% एसआईपीए के साथ हाथों को सैनिटाइज करें। शिथिल रूप से प्लेटों को बैग करें, और तालिका 1 में वर्णित संस्कृतियों को इनक्यूबेट करें।

Figure 7
चित्रा 6: टीएसए एयर सेटलिंग प्लेट पर वृद्धि। बीएससी में निष्क्रिय वायु प्रक्रिया निगरानी के दौरान संवर्धित एक दूषित पदार्थ की एकल कॉलोनी को दर्शाने वाली एक टीएसए एयर सेटलमेंट प्लेट। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्र 7: ग्लिव्ड फिंगरटिप नमूनाकरण। प्रत्येक उंगली / अंगूठे के सबसे बड़े सतह क्षेत्र (या पैड) का उपयोग करके ग्लव्ड फिंगरटिप नमूने प्राप्त करने की सही विधि बाईं ओर दिखाई गई है। गलत प्रक्रिया जहां केवल उंगलियों का नमूना लिया जाता है, दाईं ओर दिखाया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

4. प्रत्यक्ष उत्पाद टीकाकरण द्वारा बाँझपन परीक्षण

  1. यूएसपी<71 के बाद प्रत्यक्ष टीकाकरण>
    1. प्रस्तुत प्रत्येक परीक्षण लेख के लिए एक लेबल ट्राइप्टिक सोया शोरबा (टीएसबी) बोतल और एक लेबल द्रव थियोग्लाइकोलेट माध्यम (एफटीएम) बोतल प्राप्त करें। परीक्षण सत्र के लिए, व्यवहार्य सतह नमूने के लिए एक टीएसएएलटी और एक एसएबीएलटी, प्लेटों को निपटाने के लिए एक टीएसए और एक एसएबी प्लेट और जीएफएस के लिए दो टीएसएएलटी प्लेटें प्राप्त करें।
    2. चरण 1.2 के अनुसार बीएससी के अंदर काम के लिए गाउन। चरण 1.4 के अनुसार बीएससी को साफ करें। चरण 1.5 के अनुसार सामग्री को बीएससी में चरण दें। चरण 2.1 के अनुसार महत्वपूर्ण कार्य क्षेत्र का संपर्क नमूनाकरण करें, नमूना लेने के बाद 70% एसआईपीए के साथ सतह को पोंछें। चरण 3.1 के अनुसार कार्य क्षेत्र के पास टीएसए और एसएबी निपटान प्लेटें तैयार करें।
    3. परीक्षण लेख और संबंधित TSB और FTM बोतलें प्राप्त करें। यदि टीएसबी और एफटीएम बोतलों में एक सेप्टम है, तो प्रत्येक बोतल से सुरक्षात्मक टोपी हटा दें, और बाँझ अल्कोहल पोंछे के साथ सेप्टम को पोंछ दें। यदि टीएसबी और एफटीएम बोतलों में स्क्रू टॉप है, तो बोतलों से टोपी को ढीला करें (लेकिन टोपी को न हटाएं)।
    4. वोर्टेक्स एक समरूप निलंबन सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण लेख है। बोतलों को एक बाँझ सिरिंज और हाइपोडर्मिक सुई (सेप्टम कैप्स के लिए) या एक पिपेटर (स्क्रू कैप्स के लिए) का उपयोग करके परीक्षण लेख (10 एमएल / बोतल तक) की मान्य मात्रा के साथ टीका लगाएं।
    5. टीकाकरण के बाद, सेप्टम को बाँझ अल्कोहल वाइप के साथ पोंछें, और इनक्यूबेशन के दौरान वायु विनिमय की अनुमति देने के लिए एक बाँझ वेंटिंग यूनिट डालें। स्क्रू-टॉप बोतलों के लिए, बोतल को बंद करें, लेकिन इनक्यूबेशन के दौरान एयर एक्सचेंज की अनुमति देने के लिए कैप को 1/4 से 1/2 मोड़ पर छोड़ दें। उस सत्र के भीतर परीक्षण किए जाने वाले प्रत्येक परीक्षण लेख के लिए चरण 4.1.3-4.1.5 दोहराएँ।
    6. टीएसए और एसएबी निपटान प्लेटों को बंद कर दें, और नमूना समाप्ति समय का दस्तावेजीकरण करें। चरण 3.2 के अनुसार जीएफएस करें, नमूना लेने के बाद दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ पोंछें। शिथिल रूप से प्लेटों को बैग करें, और तालिका 1 में वर्णित संस्कृतियों को इनक्यूबेट करें।
    7. सभी परीक्षण सामग्रियों को बीएससी से बाहर स्थानांतरित करें, और चरण 1.4 के अनुसार बीएससी को साफ करें।
  2. एनआईएच वैकल्पिक बाँझपन परीक्षण विधि के बाद प्रत्यक्ष टीकाकरण
    1. प्रत्येक परीक्षण लेख के लिए एक लेबल iFA+, एक लेबल iFN+, और एक SAB प्लेट प्राप्त करें। परीक्षण सत्र के लिए, व्यवहार्य सतह नमूने के लिए एक टीएसएएलटी और एक एसएबीएलटी, प्लेटों को निपटाने के लिए एक टीएसए और एक एसएबी प्लेट और जीएफएस के लिए दो टीएसएएलटी प्लेटें प्राप्त करें।
    2. चरण 1.2 के अनुसार बीएससी के अंदर काम के लिए गाउन। चरण 1.4 के अनुसार बीएससी को साफ करें। चरण 1.5 के अनुसार सामग्री को बीएससी में चरण दें। चरण 2.1 के अनुसार महत्वपूर्ण कार्य क्षेत्र का संपर्क नमूनाकरण करें, नमूना लेने के बाद 70% एसआईपीए के साथ सतह को पोंछें। चरण 3.1 के अनुसार कार्य क्षेत्र के पास टीएसए और एसएबी निपटान प्लेटें तैयार करें।
    3. परीक्षण लेख और संबंधित iFA+, iFN+, और SAB प्लेट प्राप्त करें। iFA+ और iFN + बोतलों से सुरक्षात्मक टोपी निकालें, और बाँझ अल्कोहल पोंछे के साथ सेप्टम को पोंछें।
    4. वोर्टेक्स एक समरूप निलंबन सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण लेख है। बाँझ सिरिंज और हाइपोडर्मिक सुई का उपयोग करके परीक्षण लेख (10 एमएल / बोतल तक) की मान्य मात्रा के साथ बोतलों को टीका लगाएं। टीकाकरण के बाद बाँझ अल्कोहल पोंछे के साथ सेप्टम को पोंछें। तालिका 1 में वर्णित के रूप में BACT/ALERT Dual-T उपकरण पर बोतलों को इनक्यूबेट करें।
    5. एक पिपेटर का उपयोग करके, परीक्षण लेख की मान्य मात्रा (500 μL / प्लेट से अधिक नहीं) के साथ SAB प्लेट को टीका लगाएं, और बाँझ लूप का उपयोग करके अलगाव के लिए लकीर करें। यह सुनिश्चित करने के लिए 10 मिनट के लिए खड़े रहें कि नमूना इनक्यूबेशन के लिए उल्टा होने पर प्लेट ढक्कन पर न चले। परीक्षण लेख के साथ टीका लगाए गए प्रत्येक एसएबी प्लेट को एक प्लास्टिक बैग में रखें, ढीले ढंग से बांधें, और तालिका 1 में वर्णित के अनुसार इनक्यूबेट करें।
    6. टीएसए और एसएबी निपटान प्लेटों को बंद कर दें, और नमूना समाप्ति समय का दस्तावेजीकरण करें। चरण 3.2 में वर्णित जीएफएस करें, नमूना लेने के बाद दस्ताने को 70% एसआईपीए के साथ पोंछें। शिथिल रूप से प्लेटों को बैग करें, और तालिका 1 में वर्णित संस्कृतियों को इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन अवधि के अंत में BacT / ALERT बोतलों का दृश्य निरीक्षण मोल्ड गेंदों का पता लगाने के लिए आवश्यक है जो उपकरण द्वारा अज्ञात हो सकते हैं (चित्रा 8)।
    7. सभी परीक्षण सामग्रियों को बीएससी से बाहर स्थानांतरित करें, और चरण 1.4 के अनुसार बीएससी को साफ करें।

Figure 8
चित्र 8: मोल्ड की वृद्धि जो BacT / ALERT द्वारा पता लगाने में विफल रही। मोल्ड गेंदों का उदाहरण, नग्न आंखों को दिखाई देता है, जो बीएसीटी / अलर्ट सिस्टम द्वारा स्वचालित रूप से पता लगाने में विफल रहा। इन निष्कर्षों के आधार पर, हम सभी बीएसीटी / एडब्ल्यूटी बोतलों के टर्मिनल दृश्य निरीक्षण और एनआईएच वैकल्पिक बाँझपन परीक्षण विधि का उपयोग करके फंगल कल्चर के लिए एसएबी प्लेट को जोड़ने की सलाह देते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Representative Results

अपेक्षित परिणाम तालिका 1 में वर्णित हैं। ईएम डेटा की समीक्षा की जानी चाहिए और कार्रवाई, चेतावनी, या आईएसओ सीमा भ्रमण के लिए उचित जांच और प्रतिक्रिया के साथ पालन किया जाना चाहिए। यदि गैर-व्यवहार्य कणों के लिए भ्रमण होता है, तो किसी को आईएसओ 14644-एनेक्स ए, सेकंड ए.5.57 के अनुसार आगे बढ़ना चाहिए। यदि भ्रमण को तुरंत पहचान योग्य असामान्य घटना के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है, तो मूल नमूना परिणामों को प्रलेखित किया जाना चाहिए, मूल परिणामों की उपेक्षा करने के लिए एक नोट जोड़ा जाना चाहिए, और असामान्य घटना का विस्तृत विवरण प्रदान किया जाना चाहिए। विचाराधीन साइट पर एक और नमूना लिया जा सकता है। यदि भ्रमण को तुरंत पहचान योग्य असामान्य घटना के लिए जिम्मेदार नहीं ठहराया जा सकता है, तो नमूना परिणाम का दस्तावेजीकरण करें। आउट ऑफ स्पेसिफिकेशन (ओओएस) परिणाम की पहचान करने के तुरंत बाद साइट पर गैर-व्यवहार्य नमूनों का एक और सेट लें। इसका इस्तेमाल जांच के हिस्से के रूप में किया जा सकता है। आईएसओ 14644-अनुबंध ए, धारा ए.5.6 के अनुसार, ओओएस खोज की जांच करें और पहचाने गए मूल कारण की जांच करें।

एक असफल उत्पाद बाँझपन परीक्षण के परिणामस्वरूप यूएसपी<71> संस्कृति की टर्बिडिटी या बीएसीटी / अलर्ट बोतलों और / या एसएबी प्लेट में वृद्धि होगी (चित्रा 8)। जीव को प्रजातियों के स्तर पर पहचाना जाना चाहिए, और उचित संवेदनशीलता परीक्षण किया जाना चाहिए, यदि चिकित्सकीय रूप से आवश्यक हो। परीक्षण प्रयोगशाला द्वारा यह निर्धारित करने के लिए एक जांच पूरी की जानी चाहिए कि क्या ओओएस परिणाम मान्य है या यदि कोई संभावित प्रयोगशाला त्रुटि थी जिसने ओओएस में योगदान दिया हो सकता है। प्रतिधारण नमूने के परीक्षण की दृढ़ता से सिफारिश की जाती है। जलसेक के लिए उत्पाद को रोकने या जारी करने का निर्णय रोगी की नैदानिक देखभाल टीम द्वारा और विनिर्माण, सूक्ष्म जीव विज्ञान, संक्रामक रोगों, गुणवत्ता आश्वासन और नियामक मामलों की टीम द्वारा किया जाना चाहिए। एचसीटी / पीएस के लिए जो प्रारंभिक प्रक्रिया परीक्षण के आधार पर पहले से ही लगाए जा चुके हैं, रोगी की सावधानीपूर्वक निगरानी की जानी चाहिए, और एक घटना रिपोर्ट उचित नियामक एजेंसी को प्रस्तुत की जानी चाहिए।

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Discussion

इस प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण क्षेत्र हैं, जिनमें स्वच्छ शौचालयों और बीएसएसी के भीतर सड़न रोकनेवाली तकनीक और यूनिडायरेक्शनल एयरफ्लो का रखरखाव शामिल है। एसेप्टिक जोड़तोड़ उत्पाद के पक्ष से किया जाना चाहिए, ऊपर से नहीं। बंद प्रणाली प्रसंस्करण और टर्मिनल रूप से निष्फल कच्चे माल के उपयोग की सिफारिश की जाती है। महत्वपूर्ण क्षेत्रों में बोलने और दीवारों या उपकरणों के खिलाफ झुकने से बचना चाहिए। इसी तरह, गैर-बाँझ वस्तुओं को अनावश्यक रूप से छूने और गिरी हुई वस्तुओं को उठाने से बचना चाहिए जब तक कि बाँझ प्रसंस्करण पूरा नहीं हो जाता। बीएससी में सामग्री को वायु प्रवाह की रुकावट को रोकने और स्वच्छ से गंदे तक यूनिडायरेक्शनल आंदोलन को बनाए रखने के लिए व्यवस्थित किया जाना चाहिए। बीएससी के अंदर और बाहर ऑपरेटर आंदोलन को कम से कम किया जाना चाहिए। नमूनाकरण या परीक्षण सत्र के भीतर सभी सामग्रियों, उपकरणों और प्रक्रियाओं के लिए लॉट संख्या, समाप्ति तिथियां, अंशांकन तिथियां, प्रारंभ / स्टॉप समय और परीक्षण कर्मियों सहित सभी गतिविधियों का प्रलेखन भी महत्वपूर्ण है।

यहां वर्णित ईएम प्रक्रिया मैनुअल इनक्यूबेशन और कॉलोनी गिनती पर निर्भर करती है। एक ईएम प्रोग्राम का डिजाइन अंतिम उपयोगकर्ता के विवेक पर है। नमूना स्थानों और परीक्षण आवृत्ति को पीडीए तकनीकी रिपोर्ट 138 द्वारा निर्देशित किया जाना चाहिए और एक जोखिम मूल्यांकन द्वारा उचित ठहराया जाना चाहिए जिसमें प्रयोगशाला वर्कफ़्लो, उत्पाद निकटता, साइट की महत्वपूर्णता, अवधि और प्रत्येक वर्कफ़्लो चरण8 के लिए कर्मियों की संख्या शामिल है। एक विशिष्ट ईएम कार्यक्रम में कुल वायु कण (0.5 μm गैर-व्यवहार्य कण), व्यवहार्य वायु नमूनाकरण (1,000 L), और उत्पाद जोखिम और ऐतिहासिक रुझानों के आधार पर आवृत्ति पर गतिशील परिस्थितियों में एकत्र किए गए व्यवहार्य सतह नमूने शामिल होने चाहिए। साप्ताहिक नमूनाकरण आम तौर पर नई सुविधाओं के लिए अनुशंसित किया जाता है जब तक कि पर्याप्त डेटा रुझान स्थापित नहीं हो जाते हैं। ईएम और संस्कृति स्थितियों के लिए सामान्य मार्गदर्शन तालिका 1 और यूएसपी<1116>9 में प्रदान किया गया है; हालांकि, दूसरों ने विभिन्न संस्कृति स्थितियों का मूल्यांकन किया है, जैसे कि माध्यम जो केवल टीएसए / टीएसएएलटी तक सीमित था, और दोहरे तापमान10,11 सहित विभिन्न इनक्यूबेशन तापमान। स्वचालित ईएम उपकरण जो कॉलोनी काउंट प्लेट रीडिंग के साथ इनक्यूबेशन को जोड़ते हैं, आमतौर पर दवा बाजार में तेजी से तरीकों 8,12 के रूप में उपयोग किए जाते हैं। चुने हुए ईएम कार्यक्रम को मान्य किया जाना चाहिए और आमतौर पर सुविधा वनस्पतियों, इनक्यूबेटर क्षमता, परीक्षण मात्रा और कर्मियों की क्षमता पर निर्भर है। इसके अलावा, एक स्थापित ईएम कार्यक्रम में एक सक्रिय जीवन चक्र होना चाहिए, जिसमें संग्रह साइटों, परीक्षण आवृत्ति और / या वार्षिक समीक्षा और डेटा-संचालित जोखिम मूल्यांकन के आधार पर अलर्ट / कार्रवाई सीमाओं में प्रासंगिक समायोजनकिए गए हों। ईएम रुझानों में बड़े बदलाव सफाई कार्यक्रम के पुनर्मूल्यांकन को गति दे सकते हैं। कीटाणुनाशकों को निर्धारित संपर्क समय के लिए सुविधा वनस्पतियों के खिलाफ प्रतिनिधि सामग्री सतहों का उपयोग करके एक कीटाणुनाशक प्रभावकारिता अध्ययन के माध्यम से मान्य किया जाना चाहिए, जैसा कि यूएसपी<1072>13 में वर्णित है। विशिष्ट कीटाणुनाशकों में वेस्फीन III (संपर्क समय: 10 मिनट), एलपीएच III (संपर्क समय: 10 मिनट), और पेरिडॉक्स आरटीयू (संपर्क समय: 5 मिनट) जैसे एक स्पोरिसाइडल एजेंट शामिल हो सकते हैं। सर्वोत्तम प्रथाओं के लिए, कीटाणुनाशकों को मासिक आधार पर घुमाया जाना चाहिए, और आउटलेट, मैकेनिकल कनेक्शन और काम की सतहों को जो बीएससी में उपकरण के तहत हैं, उन्हें नियमित रूप से साफ किया जाना चाहिए।

बाँझपन के लिए परीक्षण की जाने वाली न्यूनतम उत्पाद मात्रा यूएसपी<71>3 में परिभाषित की गई है और कुल अंतिम उत्पाद मात्रा पर आधारित है। दुर्भाग्य से, यूएसपी<71> को मूल रूप से बाँझ दवा उत्पादों के लिए डिज़ाइन किया गया था और धीमी गति से टर्नअराउंड समय और उच्च उत्पाद परीक्षण मात्रा14 के कारण लघु शेल्फ-लाइफ उत्पादों के लिए अनुपयुक्त माना जाता है। यूएसपी<1071> स्वीकार करता है कि वैकल्पिक रैपिड माइक्रोबियल विधियां फायदेमंद हो सकती हैं और जोखिम-आधारितदृष्टिकोण लागू होने पर कम उत्पाद परीक्षण मात्रा स्वीकार्य हो सकती है। सेलुलर थेरेपी उत्पादों के बाँझपन परीक्षण के लिए यूएसपी<71> की सीमाओं को देखते हुए, उद्योग 1,4,6 में स्वचालित बीएसीटी / एडब्ल्यूडब्ल्यू श्वसन विधियों जैसे वैकल्पिक तरीकों का उपयोग किया गया है। हालांकि, वैकल्पिक परीक्षण विधि के किसी भी उपयोग के लिए उस उत्पाद 5,15,16 के लिए प्रतिस्पर्धी यूएसपी<71> विधि के लिए गैर-हीनता प्रदर्शित करने के लिए कठोर अंत-उपयोगकर्ता सत्यापन की आवश्यकता होती है। प्रत्येक नए उत्पाद के लिए विधि उपयुक्तता परीक्षण यह सुनिश्चित करने के लिए भी आवश्यक है कि उत्पाद, चुने हुए टीकाकरण की मात्रा और परीक्षण स्थितियों में, निम्न-स्तरीयदूषित पदार्थों का पता लगाने के लिए निरोधात्मक नहीं है। इसलिए, यह संभव है कि परीक्षण की मात्रा और टीकाकरण की मात्रा सत्यापन अध्ययनों के परिणाम के आधार पर उत्पादों के बीच भिन्न हो सकती है। मेम्ब्रेन निस्पंदन, यूएसपी<71> में उल्लिखित एक माध्यमिक विधि, का उपयोग एकल परीक्षण में बड़े नमूने की मात्रा का नमूना लेने के लिए किया जा सकता है। सत्यापन और विधि उपयुक्तता परीक्षण में छह प्रतिस्पर्धी क्यूसी आइसोलेट्स से परे जीव शामिल होने चाहिए। अक्सर पुनर्प्राप्त सुविधा वनस्पतियों और पिछले उत्पाद संदूषकों पर ध्यान केंद्रित किया जाना चाहिए। कवक पर विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए, क्योंकि अकेले श्वसन विधियों ने उप-मानक प्रदर्शन 4,17 का प्रदर्शन किया है, यही कारण है कि एनआईएच वैकल्पिक बाँझपन परीक्षण विधि में एसएबी पर एक युग्मित कवक संस्कृति और बीएसीटी / एडब्ल्यूटी बोतलों का एक टर्मिनल दृश्य निरीक्षण शामिल है।

किसी भी माइक्रोबियल नियंत्रण कार्यक्रम के लिए एक बड़ी सीमा पूर्वव्यापी प्रकृति है जिसमें परिणाम उपलब्ध हैं। गोल्ड मानक परीक्षण संस्कृति-आधारित है, जो धीमा है और सुधारात्मक कार्रवाई के लिए निरंतर प्रतिक्रियाशील उपायों को जन्म दे सकता है। तेजी से परीक्षण विधियों को कठोर सत्यापन की आवश्यकता होती है, लेकिन ये अभी भी माइक्रोबियल निगरानी और नियंत्रण का वास्तविक समय आश्वासन प्रदान नहीं कर सकते हैं। इसके अलावा, माइक्रोबायोलॉजिकल संस्कृतियां उत्पादन या परीक्षण सत्र के दौरान समय के केवल एक छोटे से उप-समूह को पकड़ती हैं। इसलिए, यह महत्वपूर्ण है कि सक्रिय माइक्रोबियल निगरानी लगातार जोखिम-उचित आधार पर होती है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि प्रवृत्ति डेटा अच्छी तरह से स्थापित है। यह होने से पहले माइक्रोबियल नियंत्रण से संभावित विचलन की भविष्यवाणी करने के लिए उचित रूप से निर्धारित चेतावनी सीमाओं के उपयोग को सक्षम करेगा।

सीजीएमपी कार्यक्रम की स्थापना में समय और प्रयास लगता है और दुर्भाग्य से, इसे एक सुविधा से दूसरी सुविधा में स्थानांतरित नहीं किया जा सकता है। संयुक्त राज्य खाद्य और औषधि प्रशासन को उम्मीद है कि सभी कार्यक्रम उनकी प्रभावकारिता का प्रदर्शन करने वाले तीसरे पक्ष के प्रकाशित परिणामों की संभावित उपलब्धता के बावजूद अंतिम उपयोगकर्ता सत्यापन परीक्षण से गुजरते हैं। इसलिए, माइक्रोबियल नियंत्रण और परीक्षण रणनीतियां सुविधा डिजाइन, सुविधा वनस्पतियों और उत्पाद जोखिम वर्गीकरण सहित चर के आधार पर संस्थानों के बीच भिन्न हो सकती हैं। इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित रणनीतियां एक ढांचा प्रदान करने में मदद करती हैं जिसके माध्यम से सीजीटीपी / सीजीएमपी प्रयोगशालाओं के लिए एक मजबूत माइक्रोबियल निगरानी और नियंत्रण कार्यक्रम स्थापित किया जा सकता है।

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Disclosures

लेखक ों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।

Acknowledgments

इस काम को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ क्लिनिकल सेंटर के इंट्राम्यूरल रिसर्च प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करती है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
20-25°C Incubator Lab preference
30-35°C Incubator Lab preference
Alcohol-based hand sanitizer Lab preference
BacT/ALERT Dual-T instrument BioMerieux Industry
Beard cover Lab preference
Biosafety cabinet (BSC) Lab preference
Cleanroom shoes Lab preference
Fluidthioglycollate medium (FTM) Hardy Diagnostics  U84 USP
Handheld cleaning mop Contec 2665LF
Hypodermic needle Lab preference
iFA+ BacT/ALERT bottle Biomerieux 412990
iFN+ BacT/ALERT bottle Biomerieux 412991
Isokinetic head Lab preference
Laser particle counter TSI Incorporated 9500-01
LpH III Steris 1S16CX
Mirror Lab preference
Non-sterile bouffant Lab preference
Non-sterile gloves Lab preference
Non-sterile shoe covers Lab preference
Non-sterile sleeve covers Lab preference
Parafilm Lab preference
Peridox RTU Contec CR85335IR
Plastic bag Lab preference
Sabouraud Dextrose Agar with Lecithinase and Tween (SABLT) Hardy Diagnostics  P595 USP, irradiated
Sabouraurd Dextrose Agar (SAB) Hardy Diagnostics  W565 USP, irradiated
Safety glasses Lab preference
Scrubs (top and bottom) Lab preference
Spor-Klenx RTU Steris 6525M2
Sterile 70% isopropyl alcohol (IPA) Decon CiDehol 8316
Sterile alcohol wipe Lab preference
Sterile boot covers Kimberly Clark Cat# varies based on size
Sterile coveralls Kimberly Clark Cat# varies based on size
Sterile face mask Lab preference
Sterile gloves Lab preference
Sterile hood Kimberly Clark Cat# varies based on size
Sterile low-lint wipes Texwipe TX3210
Sterile mop cleaning pads Contec MEQT0002SZ
Sterile sleeve covers Kimberly Clark 36077
Sterile spreading rod Fisher Scientific 14665231
Sterile syringe Lab preference
Tacky mats Lab preference
Tryptic Soy Agar (TSA) Hardy Diagnostics  W570R USP, irradiated
Tryptic Soy Agar with Lecithinase and Tween (TSALT) Hardy Diagnostics  P520R USP, irradiated
Tryptic Soy Broth (TSB) Hardy Diagnostics  U46 USP
Tubing Lab preference
Vesphene III Steris 1S15CX
Viable air sampler Hardy Diagnostics  BAS22K
Vortex Lab preference

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References

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क्लीनरूम वातावरण और सेलुलर थेरेपी के लिए माइक्रोबियल नियंत्रण और निगरानी रणनीतियाँ
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East, A. D., Gebo, J. E. T., Lau, A. … More

East, A. D., Gebo, J. E. T., Lau, A. F. Microbial Control and Monitoring Strategies for Cleanroom Environments and Cellular Therapies. J. Vis. Exp. (193), e65209, doi:10.3791/65209 (2023).

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