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Artículo de método

Un modelo quirúrgico traslacional porcino para la formación de adherencias intraabdominales postoperatorias

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DOI:

10.3791/70377

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13 de marzo de 2026

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1Department of Surgery, Stanford University School of Medicine, 2Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Stanford University School of Medicine, 3Department of Bioengineering, Stanford University, 4Department of Material Science and Engineering, Stanford University, 5Sarafan ChEM-H, Stanford University, 6Department of Pediatrics (Endocrinology), Stanford University School of Medicine, 7Woods Institute for the Environment, Stanford University

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un modelo porcino de formación de adherencias intraabdominales postoperatorias utilizando mini cerdos yucatánes sometidos a cirugía abdominal abierta con resección intestinal. El enfoque induce de forma fiable adherencias intraabdominales y proporciona una plataforma para evaluar el desarrollo de adherencias y probar estrategias antiadherencias.

Resumen

Se estableció un modelo porcino de formación de adherencias intraabdominales postoperatorias utilizando cerdos mini de Yucatán. El protocolo combina laparotomía media, resección del intestino delgado con anastomosis primaria en dos capas y abrasión peritoneal parietal unilateral en formato de cirugía abdominal abierta. La formación de adherencias se evaluó cuatro semanas después de la operación utilizando criterios de puntuación globales e histológicos establecidos, con evaluaciones realizadas por observadores ciegos. Las adherencias se desarrollaron en todos los animales que usaron este modelo y fueron multifocales, implicando lazos intestinales, entre la pared intestinal y abdominal, involucrando el peritoneo sobre otros órganos del abdomen (por ejemplo, el hígado) y en los sitios operatorios, con severidad variable. El análisis histológico a las cuatro semanas demostró adherencias compuestas predominantemente por matriz extracelular, fibroblastos y vasos sanguíneos, consistentes con un fenotipo de tejido cicatrizado de heridas en fase de remodelación. Este modelo es relevante para el estudio de la biología de la fibrosis de adhesión abdominal y/o la evaluación traslacional de terapias candidatas antiadherencias. Al integrar un procedimiento quirúrgico intestinal clínicamente relevante con una lesión peritoneal definida y una estrategia de evaluación estandarizada, este protocolo proporciona un enfoque reproducible para inducir y evaluar adherencias intraabdominales postoperatorias en un modelo animal de gran tamaño.

Introducción

Las adherencias postoperatorias son una fuente importante de morbilidad tras cirugías abdominales y pélvicas, desarrollándose en hasta el 93% de lospacientes 1,2, con aproximadamente un 20% que requiere hospitalización en un plazo de cinco años por complicaciones relacionadas conadherencias 3,4. La lesión peritoneal se produce en procedimientos quirúrgicos abdominales, así como en irritaciones intraabdominales (infección o exposición a sustancias químicas) o en condiciones inflamatorias crónicas como la enfermedad inflamatoria intestinal. Las adherencias resultantes pueden conllevar una amplia variedad de consecuencias clínicas, incluyendo obstrucciones intestinales recurrentes que a veces requieren cirugías adicionales, o causar infertilidad y dolor crónico 5,6,7. La formación de adherencias puede ser especialmente grave tras resecciones multiviscerales por malignidad, como cirugías citoreductivas, inflamación crónica o perforación intestinal, donde una lesión peritoneal extensa amplifica la respuesta fibrótica. Además, la enfermedad adhesiva puede complicar significativamente intervenciones quirúrgicas posteriores, haciendo a menudo imposible realizar un enfoque mínimamente invasivo o causando lesiones iatrogénicas involuntarias en el intestino u otros órganos.

A pesar de su importancia clínica, el desarrollo de estrategias antiadherencias efectivas es limitado, probablemente obstaculizado en parte por las limitaciones en modelos preclínicos que recapitulan la anatomía, fisiología y respuestas de cicatrización observadas enhumanos 8. Los modelos de roedores se utilizan ampliamente debido a su disponibilidad, manejabilidad experimental y generaciónfiable de adherencia 9, 10 y 11. Sin embargo, su pequeña cavidad peritoneal, mesenterio delgado y un ambiente inflamatorio distinto pueden limitar la relevanciatraduccional 8,12. Estos modelos han contribuido al desarrollo de enfoques antiadherencia que demostraron una eficacia robusta en estudios con animales pero que mostraron un beneficio clínico limitado o dependiente del contexto en humanos 8,13,14,15,16,17. Además, procedimientos quirúrgicos comparables en humanos, como la resección intestinal y la anastomosis, son difíciles de modelar de manera traduccionalmente relevante en roedores, y las diferencias específicas de especies en el metabolismo de los fármacos limitan aún más la extrapolaciónclínica 18.

Los modelos animales grandes, especialmente los cerdos, se utilizan ampliamente para estudiar procesos abdominales debido a su similitud anatómica y fisiológica con los humanos y su manejo quirúrgico comparable, proporcionando una plataforma para estudiar tanto la formación de adherencias como para probar intervencionesterapéuticas 19,20,21,22 . Los modelos existentes de adherencias porcinas han proporcionado importantes conocimientos, aunque muchos se centran en la formación de adherencias específicas para cada procedimiento y a menudo carecen de procedimientos estandarizados que limitan su aplicabilidad, especialmente a adherencias graves que surgen tras una cirugía intestinalabierta 23,24,25,26,27.

Para abordar estas limitaciones, desarrollamos un modelo porcino de adherencias intraabdominales postoperatorias que integra laparotomía media, resección del intestino delgado y abrasión peritoneal parietal unilateral. Esta estrategia peritoneal multifocal recapitula los insultos que promueven adherencias comúnmente encontrados durante las cirugías abdominales y produce adherencias de diferentes intensidades y localizaciones en el periodo de cuatro semanas, con adherencias garantizadas en el lateral del abdomen donde se realiza abrasión parietal dirigida, así como adherencias estocásticas en todo el abdomen. Al incorporar un procedimiento quirúrgico intestinal clínicamente relevante con una lesión peritoneal definida y reproducible, este modelo supera limitaciones clave de los sistemas porcinos previos y proporciona una plataforma consistente para estudiar la formación postoperatoria de adherencias y evaluar intervenciones antiadherencias.

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Protocolo

Declaración de ética

Todos los estudios porcinos se realizaron bajo protocolos aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Stanford, protocolo #34052, tal como se describiópreviamente 28.

1. Ganadería

  1. Consigue cerdos mini yucatánes (recomendados de 9 a 12 kg, de 7 a 9 semanas) de un vendedor verificado. Recomendamos n = 4 cerdos por cohorte. Animales domésticos en parejas en habitaciones con control de luz y temperatura.
  2. Proporciona comida porcina estándar ad libitum. Los animales deben tener acceso a un suministro continuo de agua para evitar la deshidratación.
  3. Monitorizar y registrar el peso corporal y la salud general a intervalos regulares según los estándares institucionales.

2. Anestesia y preparación preoperatoria

  1. Sedan cerdos en sus terrarios domésticos usando xilazina intramuscular y ketamina. Transporta cuidadosamente a los animales al quirófano una vez que el veterinario considere que la sedación es adecuada.
  2. Una vez en el quirófano, asegura las vías respiratorias del animal mediante intubación endotraqueal. Mantener la anestesia durante todo el procedimiento con isoflurano bajo la supervisión de un veterinario titulado.
  3. Administrar líquidos intravenosos, medicamentos vasoconstrictores e inotropos según sea necesario para tratar la hipotensión intraoperatoria y evitar la hipoperfusión intestinal y el riesgo potencial de fuga anastomótica.
  4. Aplica pomada oftálmica para lubricar los ojos y prevenir abrasiones corneales. Administra cefazolina o antibiótico equivalente 1 hora antes de la incisión para prevenir una infección en la herida.

3. Procedimiento quirúrgico

  1. Coloca al animal en posición supina sobre una almohadilla térmica para mantener la normotermia. Mide la saturación de oxígeno (SpO 2) con pulsiómetro, pulso con un monitor cardíaco y temperatura cada 10 minutos.
  2. Elimina el vello del abdomen con una máquina de cortar eléctrica y luego prepara la piel con una sola tanda de muestras de alcohol seguidas de una gasa empapada en povidona-yodo. Seca el exceso de solución antiséptica del abdomen con una toalla estéril.
  3. Cubre el abdomen con toallas estériles y cortinas quirúrgicas para mantener la esterilidad durante todo el procedimiento. Infiltra la solución de lidocaína en la pared abdominal en el lugar previsto de la incisión usando una aguja calibre 25.
  4. Realiza una laparotomía de la línea media mediante una incisión de grosor total a través de la piel, tejido subcutáneo y musculatura de la pared abdominal a lo largo de la línea alba para entrar en la cavidad peritoneal usando un bisturí de 10 cuchillas. Coloca retractores en la pared abdominal y eviscera los intestinos.
  5. Identificar una región del intestino ~10-15 cm proximal a la válvula ileocecal y resecar un segmento de 2,5 cm (1 pulgada) del intestino delgado usando tijeras. Resecar el mesenterio asociado con electrocauterización para la hemostasia de los vasos sanguíneos mesentéricos. Cierra los dos extremos del intestino abiertos usando suturas de seda 3-0 interrumpidas para lograr un cierre hermético. Realizar una anastomosis primaria de dos capas, de lado a lado (funcional de extremo a extremo). Reconstruye la capa interna de la luz con una sutura sintética absorbible 3-0 de forma continua y la capa exterior con una sutura no absorbible 3-0 corrida. Intenta minimizar el derrame intestinal durante todo el procedimiento.
  6. Abrasar suavemente una sección de 3 x 5 cm del peritoneo parietal a lo largo de la pared lateral abdominal derecha usando gasa estéril o una almohadilla electrocauterizada hasta que la superficie peritoneal parezca deshilachada o haya edema subserosiano en la pared abdominal (10-15 movimientos con presión media). La pared lateral izquierda del abdomen puede dejarse intacta para servir de control técnico, aunque usando este modelo se forman adherencias estocásticas en todo el abdomen de manera similar a las enfermedades humanas.
  7. Reposiciona el intestino en la cavidad abdominal y retira los retractores de la pared abdominal. Irriga el abdomen con 1 litro de solución salina estéril calentada, evacua todo el líquido y confirma la hemostasia (no hay sangrado activo) antes del cierre.
  8. Cierra la fascia con una sutura absorbible 0-0 en marcha. Cierra la piel con una sutura no absorbible de 2-0 o 3-0 y cubre la incisión con un apósito estéril. La duración media del procedimiento fue de 1 hora.
  9. Extubar animales al regresar la respiración espontánea. Controla los signos vitales (pulso, saturación de oxígeno, temperatura, presión arterial) de forma continua hasta recuperarte completamente de la anestesia.

4. Cuidados postoperatorios

  1. Administrar Carprofeno (25 - 50 mg por vía post-operatoria) las 24 horas del día durante los primeros 3 días tras la intervención y luego cuando sea necesario (PRN). Mantén a los animales con una dieta líquida alta en proteínas (1,5 botellas dos veces al día) durante los primeros 3 días postoperatorios.
  2. Administra amoxicilina (10 mg/kg) dos veces al día por vía oral durante una semana y luego toma PRN por signos de infección de la herida (enrojecimiento, calor, hinchazón con o sin drenaje).
  3. Revisa a los animales dos veces al día para detectar apetito, actividad, función intestinal e integridad de la herida. Si te preocupa una infección, habla con el veterinario sobre la dosis y duración del antibiótico. El apósito estéril debe dejarse durante los primeros 3 días tras la intervención para minimizar el riesgo de infección de la herida. Registrar el peso en intervalos de 2 a 3 días para asegurar el mantenimiento del peso tras la operación.
  4. Transición a los animales a comida sólida a partir del día 4 postoperatorio (POD4). Ponte la ingesta de comida sólida con una dieta suplementaria líquida alta en proteínas hasta tolerar suficientes calorías solo con comida sólida.

5. Eutanasia

  1. Eutanasiar a los animales a las 4 semanas bajo supervisión veterinaria utilizando una solución de eutanasia según los estándares institucionales.
  2. Evalúa las adherencias a fondo. Recoge inmediatamente tejidos y muestras de sangre para análisis posteriores. Elimina todos los residuos biológicos y farmacéuticos según las directrices de Medio Ambiente, Salud y Seguridad de tu institución.

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Resultados

El modelo propuesto de adherencia postoperatoria porcina (Figura 1) se combinó con un sistema de puntuación adaptado para calificar las adherencias entiempo real 28. La puntuación de adherencias se completó de forma independiente por 3 miembros del equipo cegados ante condiciones experimentales en el periodo de 4 semanas en una cohorte representativa de n=4 cerdos; las puntuaciones se promediaron para ...

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Discusión

El modelo propuesto de adherencias porcinas proporciona un método clínicamente relevante y fiable para modelar las adherencias intraabdominales. En contraste con los modelos de lesión focal o de un solo sitio, la combinación de laparotomía de la línea media, resección del intestino delgado con anastomosis y abrasión peritoneal parietal estandarizada fue seleccionada intencionadamente para recapitular los insultos peritoneales multifactoriales encontrados durante procedimientos quirúrgico...

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Divulgaciones

Los autores no tienen divulgaciones relevantes.

Agradecimientos

La investigación recogida en esta publicación fue apoyada por el programa SPARK de Stanford, la subvención del Proyecto de Mejora de Adherencias Quirúrgicas del American College of Surgeons, generosamente apoyada por la familia Carlino, y el Departamento de Cirugía de la Universidad de Stanford. Queremos agradecer al Centro de Servicios Veterinarios de Stanford y al personal del Pabellón de Animales Comparados. Todas las ideas, análisis, referencias y cifras fueron creadas y verificadas por los autores. Las herramientas de IA solo se usaban para ediciones menores de lenguaje y gramática.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Animales
Mini cerdas yucatanas hembras, de 9 a 12 kg de peso corporal (7 a 9 semanas)S& S Farms8
Suministros quirúrgicos
DMI4000 Microscopio BLeica MicrosystemsHistología
Materiales
Euthasol VirbacEutanasia
Tinte alcohólico con eosinaAzer Scientific & nbsp;  Cat#ES709Histología
Diapositivas esmeriladasFisher Scientific & nbsp;Cat#12-550-400Histología
Mayer′ s Solución de Hematoxilina  Sigma-Aldrich & nbsp;Cat#MHS80 Histología
Medicamentos
AmoxicilinaCovetrus59629Prevención de infecciones
10mg/kg PO BID x1
Ancef/CefazolinCovetrus84773Control de infecciones preoperatorio
25 mg/kg IV
AtipamezoleCovetrus82124Agente de reversión de sedación
0,2 mg/kg 
AtropinaCovetrus74760Bradicardia
0,04mg/kg   
Bupernorfina de liberación prolongada (ER)Faramácia WedgewoodAnalgesia
0,18 mg/kg IV
Carprofeno - intraoperatorioDechraAnalgesia
25 mg/kg IV 
Carprofen - postoperatorioDechraAnalgesia
25-50mg PO PRN
CereniaZoetisAntináuseas
1-2 mg/kg IV una vez intraoperatorio
IsofluranoDechraSedación  
Lidocaína 2%VetOneV1 510212Analgesia
2 mg/kg de SQ antes de la incisión
KetaminaDechraAnesthesia y Analgesia
12 mg/kg IM
DobutaminaHospira Dosificación y titulación según anestesiólogo;
Povidona-yodo (Betadine)ValleyVet12265Antiséptico
Xilazina (Rompun)DechraGW L400000Sedación/Analgesia
2,2 mg/kg IM
Suministros quirúrgicos
Sutura PDS 3-0 (polidioxanona)EthiconCat#Z316HAnastamosis
Cantidad - 2 
Sutura de seda 3-0 (Pop-off) EthiconCat#1679HAnastamosis
Cantidad - 1 paquete de refresco
Sutura PDS 0-0 (polidioxanona)EthiconCat#Z990GCierre de Línea Alba
Cantidad - 1
Sutura Prolene 3-0EthiconCat#8684GCierre de la piel
Cantidad - 1
Bovie Electrocautery Grayline Medical SupplyCat#E2516Homeostasis y corte
Conjunto estándar de instrumentos quirúrgicos abomdinales estériles con retractores en la pared abdominal, como los reactores del Ejército/Marina o Richardson.
3M Tegaderm + Pad 3MCat#3593Vendaje quirúrgico
Dieta líquida alta en proteínasAsegúrateDieta
1,5 botellas BID
Software
BioRenderNúmero de acuerdo SH28Z3OOKIGeneración de figuras 
Adobe IllustratorAdobev29.8.1Generación de figuras 
FIYINIHGeneración de figuras 
*Nota: Las herramientas de IA se usaban solo para ediciones menores de lenguaje y gramática
*BID - dos veces al día,   IV - intravenoso, intramuscular intramuscular, PO - por os/ por boca, SQ - subcutáneo, PRN - según sea necesario

Referencias

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