Name: Murino hepática Bioluminiscente modelo tumoral (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: Aprende a inducir tumores hepáticos bioluminiscentes ortotópicos en ratones mediante técnica quirúrgica. Este modelo permite analizar el crecimiento tumoral en hígado usando imagen de luminiscencia en vivo para investigación oncológica.

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Este trabajo fue financiado a través del sur de Cork Hospital Victoria de fondos del Hospital Universitario de mama, la Sociedad del Cáncer de Irlanda (CRI07TAN) y el Centro de Investigación del Cáncer Cork. De pulmón Lewis línea celular estable que expresa la luciferasa fue una especie de regalo de la Dra. Karin Jooss, Cell Genesys, Inc., San Francisco, EE.UU..

Introducción El hígado suele ser el primer sitio de la enfermedad metastásica y puede ser el único sitio de difusión hasta en el 30 40% de los pacientes con enfermedad avanzada. Sin embargo, las opciones para el tratamiento de los tumores metastásicos de hígado son pocos con una minoría de los pacientes pueden someterse a resección y sólo el 23% de respuesta a los principales agentes quimioterapéuticos. La investigación preclínica en este campo ha sido limitada por la ausencia de un modelo de ratón adecuado para estudiar las enfermedades hepáticas aisladas. Se describe un planteamiento por el bazo que se puede utilizar para establecer de forma fiable metástasis uniforme, hepática difusa. La resección de la media del bazo evita las consecuencias del crecimiento del tumor esplénico y la otra mitad del bazo se devuelve con una circulación portal para mantener intactas las propiedades del bazo inmune protectora. El modelo se describe es muy sencillo de realizar y puede hacerse rápidamente a través de una sola incisión. Las propiedades luminiscentes de la línea celular tumoral permite la cuantificación exacta de la respuesta al tratamiento, sin sacrificio de los animales. Protocolo I. Preparación de la célula <ol><li> Lewis células de carcinoma de pulmón se producen medio Dulbecco suplementado con suero bovino fetal al 10% a 37 ° C, 5% de CO 2 y se cosechan por tripsinización cuando los sub-confluentes. </li><li> Las células se contaron usando un NucleoCounter (Chemo-METEC, Dinamarca) y una suspensión de células individuales de 1 x 10 6 células en 200 l fue preparado en medio libre de suero. </li></ol> II. Preparación del ratón Nota: Todos los procedimientos fueron aprobados por el comité de ética de la University College Cork. En nuestro laboratorio utilizamos anestésicos inyectables para anestesiar el ratón, como alternativa, se puede utilizar anestésicos inhalados para lograr el mismo efecto. La cepa de ratón que utiliza es el pelo MF1 nu / nu cepa obtenida a partir de Harlan Laboratories (Oxfordshire, Inglaterra). Mujer MF1 ratones nu / nu peso de 16-22 g, y de 6-8 semanas de edad fueron incluidos en este experimento. Otras cepas como el C57 y ratones Balb / c También se puede utilizar con las correspondientes líneas de células tumorales. <ol><li> La anestesia fue entregado por la inyección intraperitoneal de ketamina de 1,5 mg 100 ul y 300 ug xilazina. </li><li> La profundidad de la anestesia se evaluó mediante una pizca dedo del pie. No debe haber ningún reflejo de retirada con el sujetador del pie. </li><li> El ratón anestesiado se coloca correctamente y grabó más de una almohadilla eléctrica. </li><li> El abdomen está preparado con una solución de Betadine al 10%. </li><li> El abdomen y el lugar de la cirugía están cubiertas de una manera aséptica. </li></ol> III. La incisión abdominal <ol><li> Se hace una incisión subcostal pequeña en la piel. </li><li> La incisión se extiende a 2-3 cm. </li><li> La musculatura de la pared abdominal se dividieron y entraron en la cavidad peritoneal. </li></ol> IV. La exposición y la división del bazo <ol><li> El bazo se moviliza y se exterioriza con cuidado con una gasa estéril pre-cortadas. </li><li> Dos ligaduras vicryl 4-0 se atan alrededor de la mitad del cuerpo del bazo. </li><li> Bazo se divide entre las dos ligaduras la creación de dos hemi-bazo. </li></ol> V. La inyección de células en el Hemi-bazo <ol><li> A G 27 se utiliza para inyectar un volumen de 100 l de células en una hemi-bazo. </li><li> Las células tumorales se permite el drenaje en el hígado durante diez minutos dando tiempo suficiente para la mayoría de las células inyectadas para llegar al hígado. </li></ol> VI. La escisión de Hemi-bazo, el cierre abdominal y recuperación <ol><li> La inyección hemi-bazo es extirpado. </li><li> El otro hemisferio del bazo es devuelto a la cavidad abdominal. </li><li> La capa muscular se cierra con sutura PDS 4-0 con una puntada simple funcionamiento. </li><li> La piel abdominal se cierra con prolene 4-0 con puntos sueltos. </li><li> Bolo se administra y la analgesia postoperatoria, Carpofen (5 mg / kg) se administra mediante una inyección IP durante 24 horas después de la cirugía. </li><li> El ratón se le permite recuperarse de la anestesia </li></ol> VII. IVIS bioluminiscente de imágenes de cuerpo entero <ol><li> Ratón se anestesia con anestésicos inyectables. </li><li> Sustrato luciferina se da por inyección intra-peritoneal diez minutos antes de imágenes </li><li> Los ratones son colocados en el escenario y la imagen de 3 minutos con IVIS todo el sistema de imágenes de cuerpo </li><li> Luminiscencia del hígado se puede medir con una región de la herramienta de interés </li></ol> VIII. La exposición de hígado de ratón <ol><li> Ratón se anestesia con anestésicos inyectables. </li><li> Se hace una incisión abdominal techo permite la visualización de las metástasis hepáticas difusas en vivo. </li><li> El ratón es la eutanasia por dislocación cervical y el hígado pueden ser extirpados para su posterior análisis. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "alt =" Figura 1 "/&gt; Figura 1. Recién extirpadas sin tratar murino y se infiltró en el tumor hígado. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Cinética de crecimiento de tumores hepáticos como se evidencia por imágenes IVIS todo el cuerpo.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

El desarrollo de la confianza en modelos in vivo para el estudio de las metástasis hepáticas se está convirtiendo cada vez más importante con el advenimiento de nuevas estrategias terapéuticas. Para el estudio preciso de las nuevas estrategias, modelos animales debería ser relativamente fácil de realizar, forma un importante número de metástasis, la participación de todos los pasos de la cascada metastásica, y tienen un sistema reportero que permite la detección y el recuento de un número limitado de c...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Videne</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura Vicryl 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura PDS 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura Prolene 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luciferina de luciérnaga</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murino hepática bioluminiscente modelo tumoral

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Este video describe la creación de metástasis hepáticas en un modelo de ratón que puede ser analizada por imágenes bioluminiscentes. Las células tumorales son administrados específicamente al hígado para provocar un tumor hepático localizado, a través de la movilización del bazo y la división en dos, dejando intacto el pedículo vascular para cada mitad del bazo. Lewis células de carcinoma de pulmón que expresan constitutivamente el gen de la luciferasa de luciérnaga (luc1) se inoculan en una hemi-bazo, que luego se resecaron 10 minutos más tarde. El otro hemisferio del bazo se mantiene intacta y se devuelve al abdomen. El crecimiento de tumores hepáticos pueden ser monitoreados por imágenes de bioluminiscencia con el IVIS todo el sistema de imagen del cuerpo. Imagen cuantitativa del crecimiento tumoral con IVIS ofrece cuantificación precisa de las células tumorales viables. La muerte celular y necrosis del tumor, debido al tratamiento farmacológico está indicado temprano por la reducción de la señal bioluminiscente. Este modelo de ratón permite investigar los mecanismos subyacentes de las células tumorales metastásicas supervivencia y el crecimiento y puede ser utilizado para la evaluación de la terapéutica de las metástasis hepáticas.

En este artículo se describe un procedimiento para la inducción de tumores en el hígado ortotópico bioluminiscentes en ratones, y el posterior análisis del crecimiento del tumor confinado al hígado, con imágenes en directo toda la luminiscencia del cuerpo.

Murino hepática Bioluminiscente modelo tumoral

Este video describe el establecimiento de metástasis hepáticas en un modelo de ratón que puede ser analizado posteriormente mediante imágenes de bioluminiscencia. Las células tumorales son...

Hola a todos. Mi nombre es Simon Regenron. Soy uno de los cirujanos adjuntos en el centro de investigación sobre cáncer de carro aquí en Irlanda.Hoy les mostraré una técnica quirúrgica para inducir metástasis hepáticas. En un modelo de cáncer, el hígado es un sitio común de diseminación metastásica y una causa importante de mortalidad relacionada con el cáncer. Solo un pequeño porcentaje de pacientes son candidatos a resección quirúrgica en casos de enfermedad hepática avanzada.Por lo tanto, se necesitan terapéuticas novedosas para el tratamiento de esta afección. Muchos modelos animales de metástasis hepáticas no producen una enfermedad que se asemeje al entorno clínico. El modelo que les muestro hoy es un modelo clínicamente relevante y es relativamente fácil de aprender, con tasas de éxito muy altas.Este modelo consiste en dividir el bazo en dos hemibazos. Uno de los hemibazos se utiliza para la inoculación de células tumorales. Estas células tumorales viajan a través de la circulación porta hasta el hígado.El otro bazo hemicorporal se deja intacto, manteniendo sus propiedades inmunológicas. La línea celular que estoy utilizando expresa de manera estable luciferasa, lo que permi

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

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Luciferasa modificados xenoinjertos de tumores humanos el cerebro puede ser establecida por vía intracraneal en ratones atímicos, con posterior seguimiento del crecimiento del tumor y la respuesta a la terapia que utiliza imágenes de bioluminiscencia. En combinación con el análisis de supervivencia, la supervisión de bioluminiscencia es una herramienta esencial para la investigación pre-clínica de las terapias que se consideran para el tratamiento de tumores cerebrales.

El establecimiento de xenoinjertos de tumor cerebral intracraneal, con posterior análisis del crecimiento tumoral y respuesta al tratamiento con imágenes de bioluminiscencia

Imágenes de bioluminiscencia de inducible por hipoxia-1α factor de actividad se aplica al seguimiento del desarrollo de la hipoxia tumoral intracraneal en un modelo de ratón de cáncer de mama metástasis cerebrales.

Imágenes in vivo de tumores bioluminiscencia Dinámica hipoxia de la metástasis cerebral cáncer de mama en un modelo de ratón

Este video muestra un modelo ortotópico de cáncer de páncreas que utiliza Matrigel para la administración celular localizada e imágenes de bioluminiscencia in vivo para el monitoreo no invasivo de la progresión tumoral. El modelo ortotópico es adecuado tanto para modelos singénicos como de xenoinjertos y podría utilizarse en ensayos preclínicos para investigar el impacto de nuevas terapias contra el cáncer en el crecimiento del tumor pancreático primario y la metástasis.

Modelo de ratón ortotópico bioluminiscente para cáncer de páncreas: una técnica no invasiva para monitorear la progresión del cáncer en ratones

Fuente:Marina Arantes Radicchi1, Victor Carlos Mello1,Victória Paz Machado1, Márcia Cristina Oliveira da Rocha1, Jaqueline Vaz de Oliveira1, Luana Cristina Camargo1,2, Luís Alexandre Muehlmann1, Ricardo Bentes Azevedo1, Sônia Nair Bao1, João Paulo Figueiró Longo11Instituto de Ciencias Biológicas, Universidad de Brasilia, 2Departamento de Procesos Psicológicos Básicos, Instituto de Psicología, Universidad de BrasiliaEste video demuestra el procedimiento para rastrear la progresión tumoral in...

Imágenes bioluminiscentes de la progresión del tumor de mama en un modelo de ratón hembra

Fuente: Clark, A.J., et al. Imágenes de bioluminiscencia de un modelo animal inmunocompetente para el glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra imágenes de bioluminiscencia para rastrear la progresión del glioblastoma en un modelo de ratón inmunocompetente, utilizando células tumorales que expresan luciferasa y luciferina para cuantificar el crecimiento tumoral de forma no invasiva.

Imágenes de bioluminiscencia de un modelo de ratón inmunocompetente para el glioblastoma

Una mejor comprensión de la biología del cáncer de páncreas es una necesidad vital para permitir el desarrollo de mejores opciones terapéuticas para el tratamiento de cáncer de páncreas. Para hacer frente a esta necesidad, se demuestra un modelo ortotópico de cáncer de páncreas que permite la monitorización no invasiva de la progresión del cáncer...

Modelo ortotópico bioluminiscente de la progresión del cáncer de páncreas

GL261 proporcionan un modelo animal inmunocompetente útil de glioblastoma. Los objetivos de este protocolo son demostrar las técnicas adecuadas para monitorizar el crecimiento tumoral intracraneal mediante imágenes de bioluminiscencia in vivo, y verificar la utilidad de las células GL261 modificadas con luciferasa para el estudio de la inmunología tumoral y los enfoques inmunoterapéuticos para el tratamiento del glioblastoma.

La bioluminiscencia de imágenes de un Modelo inmunocompetentes Animal para Glioblastoma

Imágenes de bioluminiscencia es una herramienta bien conocida para la localización de tumores y metástasis, pero la cuantificación de estas imágenes a menudo requiere cálculos complejos e instrumentos particulares. Se describe el método luminoscore de usar fácil, sobre la base de condiciones de adquisición precisas, que no requiere de cálculos, y que permite la carga tumoral y la respuesta al tratamiento a ser monitoreados en modelos de ratón.

Método de cuantificación del tumor bioluminiscencia-base para la progresión tumoral Monitoreo y efectos del tratamiento en modelos de ratón linfoma

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Murino hepática Bioluminiscente modelo tumoral

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